细胞工程整理版.doc

二．动物细胞工程
【课标扫描】
1.简述动物的细胞培养与体细胞克隆。
2.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体。
【考试说明的规定】
1．动物的细胞培养与体细胞克隆(A级)
2．细胞融合与单克隆抗体(A级)
【知识网络】
动物细胞工程
动物体细胞核移植技术和克隆动物
动物细胞培养
动物细胞培养的概念
细胞培养的过程
细胞培养的条件
细胞培养技术的应用
核移植技术和克隆动物的概念
动物体细胞核移植技术的过程
动物体细胞核移植技术的应用前景
动物体细胞核移植技术存在的问题
① 抗原制备②免疫动物③免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备④细胞融合⑤杂交瘤细胞的选择培养⑥杂交瘤细胞的筛选 ⑦杂交瘤细胞的克隆化⑧单克隆抗体的检定⑨分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立⑩单克隆抗体的大量制备。
单克隆抗体获得
获得抗体的传统方法，缺陷
单一抗体需解决的问题
杂种细胞的特点
环节
单克隆抗体的应用
优点
应用
作为诊断试剂：“早早孕诊断试剂盒”
用于治疗疾病和运载药物：重要用于治疗癌症“生物导弹”
：特异性强，灵敏度高，化学性质单一

动物细胞融合
概念、原理和结果
动物细胞融合的方法和过程
意义：最重要的是获得大量单克隆抗体

【重点难点】
一、动物细胞培养
1．原理：细胞增殖
2．动物细胞培养过程
（1）选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化限度低，容易培养。
（2）动物细胞培养流程：

（3）生长特点：
①贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养瓶内壁才干生长。
规定：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。
②接触克制：当培养瓶中内壁生长细胞彼此紧密接触时，细胞不再分裂。
3．动物细胞培养和植物细胞培养比较：

动物细胞培养
植物细胞培养
原理
细胞的增殖
细胞的全能性
细胞来源
胚胎或幼龄动物组织或器官
离体植物器官、组织或细胞
培养
基
状态
液体
固体
成分
天然培养基
合成培养基
组成
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清
矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素、有机添加物
器皿
培养瓶
锥形瓶
过程
原代生长，传代生长
更换培养基，细胞增值分化
生长特点
贴壁生长，细胞增值不分化
诱导形成愈伤组织，细胞增值分化
细胞进行异养需氧代谢
接种前解决
灭菌、用胰蛋白酶使组织分散成单个细胞
灭菌
培养条件
恒温、无菌、无需光照
常温、无菌、光照条件
培养目的
1.生产蛋白质生物制品
2.获取大量细胞
3.检测有毒物质
1. 快速繁育无病毒植株
2. 生产药物、食品添加剂、香料、色素、杀虫剂等
培养结果
细胞株→细胞系
愈伤组织→植株
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1体细胞核移植的过程必须弄清的几个问题
①动物细胞的全能性会随着动物体的发育而逐渐受到限制，其重要因素是什么？
细胞分化
②克隆高产牛所用的受体细胞是什么？为什么？
去核的卵母细胞，处在减数第二次分裂中期。由于卵母细胞中具有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。
③克隆高产牛过程所运用的生物技术有哪些？
细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植
④目前核移植技术中普遍使用的去核方法是什么？
显微操作法
2．体细胞核移植技术存在的问题
（1）成功率非常低：产下的活克隆动物占移植克隆胚胎的比率平均不到10%。
（2）存在健康问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等。
（3）克隆动物食品安全问题。
三、动物细胞融合与单克隆抗体
1．植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞融合的原理
细胞膜的流动性、细胞的全能性
细胞膜的流动性
细胞融合前的解决
去除细胞壁后诱导原生质体融合
使细胞分散后诱导细胞融合
诱导手段
离心、电刺激、振动、聚乙二醇等试剂诱导
同左，再加灭活的病毒诱导
用 途
克服远源杂交不亲和，获得杂种植株
制备单克隆抗体的技术之一
共同点
都能产生杂种细胞
2．单克隆抗体和常规抗体的比较
项目
分泌
特点
生产
单克隆抗体
杂交瘤细胞
特异性强、灵敏度高
产量高，易纯化分离
常规抗体
各淋巴B细胞
特异性差、灵敏度低
产量低，分离困难
【考点解析】
一、动物细胞工程
[例1能使动物细胞融合的特有的诱导因子是
A．离心 B．灭活的病毒 C．电激 D．振动
【解析】常用的动物细胞融合的诱导因子是聚乙二醇和灭活的病毒。其中聚乙二醇既可用于促进植物原生质体融合，又可用于促进动物原生质体融合。而灭活的病毒只能用于促进动物细胞的融合，如灭活的仙台病毒是最常用的诱导因子，其诱导原理是由于病毒具有侵染细胞的能力，优点是融合率高，对各种动物细胞都合用。

二、动物细胞培养
[例2] 下列关于动物细胞培养的有关叙述中对的的是
A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中
B.动物细胞培养液中通常具有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等
C.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白
D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶解决
【解析】在动物细胞培养过程中，两次用到胰蛋白酶解决，一次是使动物细胞分散开，制成细胞悬浮液；第二次是使细胞从培养瓶壁上分离下来，便于分瓶传代培养。传代培养50代以后，一般核形会发生变化，再继续培养，有些细胞会获得不死性；动物细胞培养的条件是：①无菌、无毒的环境；②营养，如需要糖、氨基酸，促进生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需要加入血清、血浆等一些天然成分；③温度和PH；④气体环境；它需要生长素而需要维生素等。答案： D

三、动物体细胞核移植技术和克隆动物
[例3] 在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到（ ）
A.细胞培养技术 B.细胞核移植 C.胚胎移植技术 D.基因工程技术
解析：考察克隆羊产生的过程。多利羊的哺育过程是：将一只母羊（A羊）卵细胞的细胞核吸出，得到不含核的卵细胞。然后，将实验室中培养的另一只母羊（B羊）的乳腺上皮细胞的细胞核注入到无细胞核的卵细胞中并进行电刺激，这样就通过核移植技术形成了一个同时具有B羊核遗传物质和A羊细胞质的重组卵细胞。融合后的卵细胞通过体外细胞培养形成初期胚胎。然后把这个胚胎移植到第三只羊（C羊）的子宫中，让C羊为胚胎发育提供发育场合和营养物质，这个过程运用了胚胎移植技术。胚胎就在C羊子宫内发育成熟。C羊产下的羊就是克隆羊多利。从以上分析可以看出，多利产生的过程中没有使用基因工程技术。
答案：D
四、动物细胞融合与单克隆抗体
[例4] 下列关于运用细胞工程技术制备单克隆抗体的叙述，不对的的是
A．给小鼠注射抗原，是为了获得能产生相应抗体的B细胞
B．B细胞与骨髓瘤细胞混合培养，是为了获得融合细胞
C．杂交瘤细胞进行体外培养，是为了获得单克隆抗体
D．杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎
解析：通过多次筛选获得的杂交瘤细胞是可以分泌所需抗体的细胞，将杂交瘤细胞进行体内培养，目的是获得大量的单克隆抗体，而不是胚胎。
答案：D
例5 (2023上海)下图表达用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题

（1）人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异________：从免疫学角度看，这种凝集原是________。
（2）图中细胞中1是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的________细胞，这种细胞具有产生________________的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能________________，但不会产生抗体。
（3）为了能充足发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊解决，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为________________。把它在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为________________。
（4）过程①的重要目的__________________。通过过程②或⑧的培养方法能产生大量________________________抗体。
解析：第一次从融合细胞和非融合细胞中筛选杂交瘤细胞；第二次从多种杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞（产生抗体的杂交瘤细胞所产生的未必是目的抗体）。
答案（1）糖蛋白 抗原
（2）免疫B淋巴 单一的抗A抗体（或单一的特异性抗体）快速大量增殖
（3）杂交瘤细胞 单克隆
（4）筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞 抗A单克隆
【能力测试】（时间：45分钟，分值：60分）
一、单项选择题（每小题2分，共40分）
1徐州市2023—2023学年度高三第三次）下列是应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作环节，其中对单克隆抗体制备的相关叙述中不对的的是
①从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞②将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞③将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养④筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑤运用选择培养基筛选出杂交瘤细胞⑥从腹水中提取抗体⑦运用促细胞融合因子使两种细胞发生融合
A.实验顺序应当是①③⑦⑤④③⑥ B.③过程中产生的多个杂交瘤细胞称为克隆
C.⑦过程获得的细胞均可无限增殖 D.运用细胞融合生产单克隆抗体过程中通常要通过两次筛选
D．运用细胞融合生产单克隆抗体过程中通常要通过两次筛选
2下列关于动物细胞培养的叙述，对的的是
A．培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体
B．培养中的人B细胞可以无限地增殖
C．人的成熟红细胞通过培养能形成细胞株
D．用胰蛋白酶解决肝组织可获得单个肝细胞

3.（盐城市09高三年级摸底17．）用单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”。下列对此叙述不对的的是
A．“瞄准装置”是指辨认肿瘤的单克隆抗体
B．“弹头”具有选择性杀伤肿瘤细胞的功能
C．“弹头”由放射性同位素、化学药物等物质构成
D．“生物导弹”的制备运用了细胞工程技术
4 制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术涉及(　A　)
①细胞培养　②细胞融合　③胚胎移植　④细胞核移植
A. ①②　　 　B. ①③　 　　C. ②③　　　D. ③④
5. 运用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述对的的是(D　　)
A. 用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B. 体外培养每个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的克隆抗体
C. 将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞
D. 运用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者
6 下列关于运用细胞工程技术制备单克隆抗体叙述，不对的的是(D　　)
A. 给小鼠注射抗原，是为了获得能产生相应抗体的B细胞
B. B细胞与骨髓瘤细胞混合培养，是为了获得融合细胞[来源:学+科+网]
C. 杂交瘤细胞进行体外培养，是为了获得单克隆抗体
D. 杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎
7. 动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。如图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。从该图提供的信息不能获得的结论是(　A　)

A. 正常细胞与癌细胞的增殖速率相同
B. 有无血清对正常细胞培养的影响不同
C. 培养基中补充血清有助于正常细胞的培养
D. 培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
8. 单克隆抗体(单抗)实质上是单个效应B细胞通过克隆形成的细胞群产生的化学性质单一、特异性强的免疫球蛋白。下列有关叙述中，错误的是(D　　)
B
10、（2023·江苏卷）关于现代生物技术应用的叙述，错误的是
A．蛋白质工程可以合成自然界不存在的蛋白质
B．体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体
C．植物组织培养技术可以用于植物茎尖脱毒
D．动物细胞培养技术可用于转基因动物的培养
答案：B
11．下列有关制备单克隆抗体的过程叙述错误的是D
A．给小鼠注射抗原的目的是刺激小鼠产生相应的（效应）B细胞
B．融合后的杂交瘤细胞具有体外增殖和分泌抗体的特性
C．筛选时先选出杂交瘤细胞，再选出能产生特定抗体的细胞
D．杂交瘤细胞在培养过程中会出现细胞接触克制现象
12．某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。下列说法对的的是 C
A．在运用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶解决
B．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞的呼吸
C．甲、乙细胞在连续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象
D．仅用该培养液也能用来培养乙肝病毒
13、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到融合细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体。该过程中，与小鼠骨髓瘤细胞融合的细胞是A
A．通过免疫的B淋巴细胞 B．不通过免疫的T淋巴细胞
C．通过免疫的T淋巴细胞 D．不通过免疫的B淋巴细胞
14、下列过程中，没有发生膜融合的是C
A．植物体细胞杂交 B．动物细胞融合
C．基因表达载体的构建 D．效应B细胞分泌抗体
15. (无锡常州四区(市)九校25．)生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，由于该试剂
Ａ．能克制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制
Ｂ．能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活
Ｃ．选择性克制骨髓瘤细胞的DNA复制
Ｄ．能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成
16. 下列关于动物细胞培养的叙述，对的的是 ( D )
A．培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体
B．培养中的人B细胞可以无限地增殖
C．人的成熟红细胞通过培养能形成细胞株
D．用胰蛋白酶解决肝组织可获得单个肝细胞
17．下列细胞工程技术中能使后代个体染色体组加倍的是 （ B ）
A．细胞或组织培养技术 B．细胞融合技术 C．动物胚胎移植技术 D．核移植技术
18. 生物技术的发展速度不久，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。假如世界上最后一只野驴刚死亡，以下提供的“复生”野驴个体的方法中可以成功的是 （ C ）
A. 将野驴的体细胞取出，运用组织培养技术，经脱分化、再分化，哺育成新个体
B. 将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养哺育成新个体
C. 取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体
D. 将野驴的基因导入家驴的受精卵中，哺育成新个体
19．关于动物细胞培养的错误叙述是
A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行解决使其分散成单个细胞
C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液
D.动物细胞培养只能传50代左右，所哺育的细胞会衰老死亡
20．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验环节中错误的是
A.将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞
B.用纤维素酶解决B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
C.用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合
D.筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体
二、多项选择题：（本大题涉及5小题，每小题有不止一个选项符合题意，全选对者得3分，其他情况不给分。15分）
21、运用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述错误的是 ABD
A．用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体
B．体外培养单个浆细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体
C．将等量浆细胞和骨髓瘤细胞混合,经PEG诱导融合后的细胞不一定为杂交瘤细胞
D．运用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法不一定能诊断出SARS病毒感染者

22. 卵细胞作为生殖细胞，在生物技术中可用于 ( ABD )
A.克隆动物时细胞核的受体
B.进行体外受精，哺育试管动物
C.直接植物组织培养形成可育的二倍体试管苗
D.形成受精卵，运用转基因和植物组织培养，哺育抗虫棉植株
23.下列在现代生物科技的应用中，需要进行检测与筛选的是ABCD
A.对植物的愈伤组织进行诱变解决，哺育作物新品种
B.将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，制备单克隆抗体
C.运用植物体细胞杂交技术哺育“萝卜－甘蓝”
D.将抗虫基因导入植物细胞，哺育具有抗虫特性的新植株
24. 下列关于细胞工程的叙述，错误的是BCD
A.植物细胞融合必须先制备原生质体
B.动物细胞培养的原理是动物细胞的细胞核具有全能性
C.试管婴儿技术涉及核移植和胚胎移植两个方面
D.经细胞核移植哺育出的新个体只具有一个亲本的遗传性状
25.（南京市2023学年度第一学期期末调研24．）（多选）下列与应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作环节如下，其中对单克隆抗体制备的相关叙述中对的的是
①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞
②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞
③运用促细胞融合因子使两种细胞发生融合
④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养
⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞
⑥从腹水中提取抗体
A．实验顺序应当是①②③⑤④⑥ B．④过程中产生的多个杂交瘤细胞也为克隆
C．③过程获得的细胞均可无限增殖 D．③到⑤的过程中通常要通过两次筛选
二、非选择题（共45分）
26．（09江苏高考）(8分)动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题。

(1)肝脏切成小薄片，这有助于肝脏细胞▲ 。(2)气室中充入5％C02：气体的重要作用是 ▲ 。(3)培养液中添加抗生素是为了克制细菌生长，但要注意选择抗生素的 ▲ ，以保证抗生素对肝脏无害。
(4)有机物X有毒性，可诱发染色体断裂。运用上图所示装置和提供的下列材料用品，探究肝脏小块对有机物X是否具有解毒作用。
材料用品：
肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养液，植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂)；显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管；吉姆萨染液(使染色体着色)，有机物X溶液等。实验过程：
①在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取4等份，备用。
⑦运用甲、乙、丙、丁4组上图所示装置，按下表环节操作(“√”表达已完毕的环节)。

甲
乙
丙
丁
环节一：加人肝脏培养液
√
√
√
√
环节二：加入有机物X溶液
√

√，

环节三：放置肝脏小块
√

上表中还需进行的操作是 ▲ 。 ③培养一段时间后，取4组装置中的等量培养液，分别添加到4份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。
④一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观测 ▲ ，并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞正常，则说明 ▲ 。
27（1）制备单克隆抗体过程中要用到 、 等技术。
（2）制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相称于 ，使小鼠产生 细胞，此过程属于特异性免疫中的 免疫。与植物体细胞杂交不同的是，图中操作加入的促融剂通常是 。
（3）在细胞内DNA合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①运用上述特点配制的HAT培养基具有多种成分，其中添加的 成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是 。
（4）此过程生产的单克隆抗体可以与 特异性结合，从而诊断早孕。
（5）除了图示的培养杂交瘤细胞的方法外，还常用 方法，此法对培养条件无特殊规定。

28. (南京市2023届高三第—次调研31．) (7分)日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出奉献，获得2023年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中K考S资5源U网 有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题。

(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为 ▲ 基因。
(2)在②过程进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的筛选方法是 ▲ 。
(3)在④过程培养重组细胞时，培养液中通常具有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和▲等。
(4)以上哺育过程中应用到的生物技术有 ▲ 等。
(5)科学工作者在实验过程中为了保证实验成功，往往一次做多个核移植，为了从乙兔体内一次获得多个卵细胞，往往需要向乙兔体内注入的是促性腺激素，而不是性激素，因素是
▲ 。
(6)在以上③核移植过程中，乙兔提供的细胞应是 ▲ ，移核之前要对此去核的因素是 ▲ 。
29.（9分）如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请根据图回答:

(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 。
(2)培养一方面在C瓶中进行, 瓶中的培养液成分有葡萄糖 、氨基酸、无机盐、维生素
和 等。
(3) 培养到一定阶段后，细胞会停止分裂增殖，此时，瓶壁上形成的细胞层数为 。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用 酶来解决，然后分装继续培养。
(4)一般来说，细胞在传至_______代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止。当继续传代培养时，少部分细胞获得不死性，这些细胞已经发生了突变。
（5）在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞。由于在这种条件下。细胞中 的活性减少，细胞 的速率减少。
(6)进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含____________________的混合气体的培养箱中进行培养。

30(1)图中涉及的现代生物技术有____________________________（至少写三种）。（2分）
(2)小羊a、小羊b、小羊c的性状表现（填 “相同”或“不同”） __ __，因素是______ _______；
(3)若研究发现羊N细胞中线粒体发达，故而它的产奶率高，则小羊a会有这一优良性状吗？________，判断依据是_______ _。（2分）
(4)有人设想将羊体细胞与牛体细胞进行融合，以获得新物种“羊—牛”，你认为依据目前的生物技术和理论能否实现这一构想？ 。理由是 ________。（2分）
31 （7分）为加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法：

请据图的信息回答：
（1）试管牛与克隆牛的哺育过程中均用到的细胞工程技术有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
（2）用来促进B牛多排卵的激素是 　　　分泌的促性腺激素，E牛的性别是 　　
（3）产生F牛的生殖方式属于 　　　　　　　　。
（4）要培养高产奶率的转基因牛，一般将目的基因导入的受体细胞是 ；导入常用 法；假如要获得能表达出人干扰素（一种淋巴因子）的目的基因，则需要从人体的哪种细胞中获得？ 　　　　　　。（2分）

32．（10分）下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：

⑴若A、B是植物细胞，在细胞融合之前须解决获得原生质体，由A、B到细胞C的过程中，常用的促融剂是_______________。融合完毕的标志是____________。
⑵若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用__________技术把D培养成植株。
⑶若A、B是动物细胞，一般取自___________，然后用________ 使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的且不用于植物细胞融合的手段是_________。A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有___________________________。
⑷若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，两两融合所形成的C有_____种，用来培养的D细胞应当是________________，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和 。
33.（13分）下图是制备分泌抗原X抗体的过程，根据图解回答问题：

⑴制备单克隆抗体的环节：
①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。
②由图中可看出，单克隆抗体制备过程运用了 和 的动物细胞工程技术手段，前者常用的诱导剂与植物原生质体融合不同的是 。
③将诱导后产生的多种细胞，放在含________培养基的多孔培养板上培养，筛选。
④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞 的能力，又具有__________________的本领。
⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放一个细胞进行培养。
⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体。
⑵单克隆抗体是由同样的抗体分子组成，与一般的血清抗体相比，单克隆抗体的优点是 。
⑶用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，由于它是用小鼠的_____________细胞制备的，其化学本质是___________，对人类有异物性和免疫原性。
（4）动物细胞培养液的配方通常具有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还具有 。
（5）图中有两次筛选过程，其中环节④目的是筛选出 ，环节⑤的目的是筛选出 。

34.(09届江苏省百校高三样本分析考试生物试34B)题胚胎干细胞介导法(转基因动物哺育的途径之一)，即将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与宿主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达成种系嵌合。下图是实验过程示意图，请分析回答下列问题：

(1)胚胎干细胞(ES细胞)体外培养时需要在_________________________________条件下进行，由于人们对细胞所需营养物质还没有搞清楚，因此在使用合成培养基培养细胞时需加入___________。
(2)图中①表达在___________作用的培养基上培养，②表达导入___________时期的胚胎，生成嵌合体小鼠④，外源DNA转染的ES细胞产生的变异类型属于___________ ___________
(3)1984年我国第一例转生长激素(GH)基因的鱼诞生，但鱼类易于逃逸、扩散，会引起生态安全性问题，试分析因素：_______________________________________。

35．（09山东高考）（8分）（生物一现代生物科技专题）
人类在防止与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为重要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

请回答：
（1）过程①代表的是 。
（2）过程②构建A基因表过载体时，必须使用 和 两种工具酶。
（3）过程③采用的实验技术是 ，获得的X是 。
（4）对健康人进行该传染病免疫防止时，可选用图中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行 比较；或用图中的 进行特异性结合检测。

答案
一1．C2．D3．B4．A5．D6．D7．A8．D9．B10．B11．D12．C13.A14.C15.C16.D
17.B18.C19.D20.B
二、21. ABD 22. ABD 23. ABCD 24. BCD 25. ABD
26．答案：(1) 吸取氧气和营养物质、排出代谢废物
(2)维持培养液适宜的pH
(3)种类和剂量
(4)向乙(或丁)组装置中放置肝脏小块 染色体形态和数量 肝脏小块对有机物X具有解毒作用
27答案：（
28．答案：(7分)(1)目的 (2)通过设备检测，发出明亮的绿色荧光细胞即为转基因体细胞
(3)动物血清
(4)转基因技术、核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术(答出三个可得1分)
(5)注射一定量的性激素后会克制下丘脑和垂体的活动，从而导致相关激素分泌量下降，进而引起自身性激素分泌量减少，影响排卵。(负反馈)
(6)次级卵母细胞 使获得的荧光兔的遗传物质基本上所有来自转基因的甲兔细胞

29（1）胚胎或幼龄动物组织器官（2）动物血清（3）1 胰蛋白酶 （4）10—50 （5）冷冻（或超低温、液氮） 酶 新陈代谢（6）95%空气加5%二氧化碳

30（1）基因工程、核移植、胚胎移植、胚胎分割、动物细胞培养（2）相同，这些个体都是由同一重组细胞发育形成的（3）不会。线粒体中的基因一般通过细胞质传递给后代，小羊A的细胞质重要来自羊O（4）不能。由于高度分化的动物体细胞的全能性受到限制。由羊体细胞和牛体细胞融合得到的杂交细胞不能正常发育成完整个体。即使得到一个个体也不能成为一个新物种，由于它不能正常生殖。
(5)2023年1月世界第一只克隆羊、年仅3岁的“多利”，因患老年羊常得的肺部感染疾病，研究人员不得不对它实行了“安乐死”，同时某些科学狂人宣布成功克隆了人“夏娃”，根据以上信息，谈谈你对克隆技术或克隆人的评价。
31（1）　动物细胞培养、胚胎移植 （2）垂体　 雌性或雄性
（3） 无性生殖 （4）受精卵 显微注射器 效应T细胞
改为32\33的答案

34． (1)无菌、温度适宜、营养充足(2分 )动物血清(1分) （2)筛选(1分) 囊胚(1分)基因重组(2分) (3)转基因鱼与同种野生鱼杂交，使野生鱼带有转基因，从而具有生长优势，使其捕食对象大量减少。并与其他物种竞争，引起生态危机(2分

35.（1）逆（反）转录 （2）限制性核酸内切酶（限制性内切酶、限制酶） DNA连接酶
（注：两空顺序可颠倒）（3）细胞融合 杂交瘤细胞 （4）A蛋白 核酸（基因）序列 抗A蛋白的单克隆抗体