2020-2022年上海市松江区牛结节性皮肤病流行病学调查.pdf

福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年表 6长期稳定性试验结果渊n=3冤3讨论本试验选择用助溶剂 渊倍他环糊精尧 聚乙二醇6000冤尧润湿剂渊十二烷基硫酸钠冤作为助剂袁采用粉碎方法使物料微粉化袁 使阿苯达唑伊维菌素粉能在水中较好分散袁辅料易得袁原料基本无损耗袁生产设备简单袁适合大批量生产遥进行药物稳定性试验是为了考察药物制剂在温度尧湿度尧光线的影响下随时间变化的规律袁为兽药上市提供科学依据袁建立产品的有效期3遥 本试验经过加速试验和长期试验袁结果显示产品的性状尧干燥失重尧阿苯达唑和伊维菌素含量变化均在兽药典规定的范围内袁产品稳定袁因此袁将有效期暂定为 2 年遥参考文献院1 方亮.药剂学M.8 版.北京:人民卫生出版社,2016:37-41.2 中国兽药典委员会.兽药质量标准:化学药品卷S.2017 年版.北京:中国农业出版社,2017.3 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典:一部S.2020年版.北京:中国农业出版社,2020.表 5阿苯达唑伊维菌素粉加速试验渊n=3冤时间渊月冤外观性状干燥失重渊%冤阿苯达唑含量渊%冤伊维菌素含量渊%冤01236类白色粉末无变化无变化无变化无变化2.42.42.52.52.699.299.399.098.497.5100.2100.599.499.797.9时间渊月冤外观性状干燥失重渊%冤阿苯达唑含量渊%冤伊维菌素含量渊%冤0369121824类白色粉末无变化无变化无变化无变化无变化无变化2.42.42.42.52.52.62.699.299.099.299.198.698.597.3100.2100.399.698.598.397.897.02020-2022 年上海市松江区牛结节性皮肤病流行病学调查金一春曹向英金立朱骏孙文梅胡晓艳许柯渊上海市松江区农产品质量安全中心上海201611冤摘要2020-2022 年袁运用荧光聚合酶链反应对上海市松江区规模牛场有计划地开展牛结节性皮肤病病毒核酸检测袁共检测牛血液样品 382 份袁结果全部为阴性遥 表明松江区牛结节性皮肤病防控取得成效袁同时说明 LSD 在松江区传播流行的可能性较低遥关键词牛结节性皮肤病荧光聚合酶链反应防控文献标识码院A文章编号院1003-4331渊2023冤04-0025-02Epidemiologicalinvestigations of lumpy skin disease in Shanghai Songjiang district from 2020 to 2022Jin Yichun Cao Xiangying Jin Li Zhu Jun Sun Wenmei Hu Xiaoyan Xu Ke渊Shanghai Songjiang district center of agri-products quality and safety,Shanghai 201611冤Abstract From 2020 to 2022,nucleic acid detection of lumpy skin disease virus(LSDV)by fluorescent polymerase chain reaction(PCR)was carried out in a planned way on large-scale cattle farms in Songjiang district,a total of 382 bovine blood samples were de鄄tected,and all the results were negative.This indicates that the prevention and control of LSD in Songjiang district has achieved re鄄sults,and it also indicates that the possibility of LSD transmission and prevalence in Songjiang district is low.Key words Lumpy skin disease(LSD)Fluorescent polymerase chain reaction Prevention and control牛结节性皮肤病渊Lumpy skin disease袁LSD冤袁又称牛皮肤疙瘩病或牛结节疹袁 是由牛结节性皮肤病病毒引起的传染病袁它能通过吸血蚊尧蝇等节肢昆虫传播袁临床上主要有持续发热尧皮肤出现水肿以及在黏膜尧皮肤尧器官表面会出现结节尧淋巴结肿大等特征遥 该病是 OIE 须通报疾病袁也曾是叶中华人民共和国进境动物检疫疫病名录曳中的一类传染病1遥近几年袁 国内外牛结节性皮肤病流行状况较复杂袁 为掌握和跟踪上海市松江区规模牛场牛结节性皮肤病流行现况袁2020-2022 年应用荧光 PCR 方法对松江区规模牛场实施调查袁科学评估尧强化防控袁避免对辖区内养牛企业造成经济损失遥25福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年1材料与方法1.1被检血清采 自松 江区规 模 牛场袁2020-2022 年共采集牛血液样品 382 份遥1.2检测试剂牛结节性皮肤病病毒荧光 PCR 检测试剂盒袁购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司曰病毒核酸提取试剂盒袁购自广州美基遥1.3主要仪器设备ABI 7500 荧光 PCR 仪尧King鄄Fisher 磁珠法核酸提取仪尧SIGMA 高速离心机尧泰事达 BIO-域-A 生物安全柜遥1.4检测方法与结果判定1.4.1检测方法1.4.1.1病毒核酸提取准备 96 孔板袁 分别吸取130 滋LBuffer MLB尧10 滋L Proteinase K 和 10 滋LMagBind Particles 加入至孔 A 中袁 再取已处理样品50 滋L 加入孔 A 中曰 取 150 滋L Buffer MW1 加入至孔 B 中曰 取 150 滋L Buffer MW2 分别加入至孔 C尧D中曰取 50 滋L Nuclease Free Water 加入至孔 H 中袁将96 孔板与磁力外套放入仪器相应位置袁启动磁珠法核酸提取程序运行至结束袁 将 96 孔板孔 H 中核酸液体吸入 1.5 mL 离心管中袁-20 益保存备用遥1.4.1.2扩增试剂准备扩增反应试剂总体积17 滋L袁根据所需反应管总数渊包括样本和阴阳性对照冤袁计算出所需试剂总量渊每份样品所需试剂组成院PCR 反应液 10.0 滋L尧引物 1 和引物 2 各 1.5 滋L尧探针 0.8 滋L尧 无菌无核酸酶水 3.2 滋L冤袁 在 1.5 mL 经DEPC 水处理的灭菌离心管中充分混匀袁2 000 r/min离心 10 s袁 向设定的 PCR 反应管中 分别加入17 滋L袁 再加入 3 滋L 制备的样本模板及阴阳性对照袁盖上管盖袁置 ABI 7500 荧光 PCR 仪上遥1.4.1.3荧光 PCR 扩增与信号收集选择 VIC 通道检测牛结节性皮肤病病毒荧光信号 渊报告院VIC袁淬灭院NONE冤遥荧光 PCR 反应条件院95 益 30 s曰95 益5 s袁54 益 30 s渊收集荧光信号冤袁40 个循环遥 反应体系为 20 滋L遥1.4.2结果判定在阴阳性对照成立条件下袁 检测样本 VIC 通道 Ct 值小于等于 35袁 且扩增曲线有明显的指数增长期袁可判定为阳性遥 检测样本 VIC 通道 Ct 值大于 35 且小于 40 时袁重复 1 次袁如果 Ct 值仍处于 35耀40袁且扩增曲线有明显的指数增长期袁可判为阳性袁否则判为阴性遥 检测不到样本 Ct 值或 Ct值为 40 或以上袁则判为阴性遥2结果从表 1 可以看出袁2020-2022 年分别从规模牛场采集 128 份尧126 份尧128 份样品袁 经过荧光 PCR检测袁382 份样品均未检出牛结节性皮肤病阳性遥表 12020-2022 年松江区牛结节性皮肤病检测结果3讨论1冤各品种尧各年龄的牛均可感染牛结节性皮肤病病毒袁对于免疫力相对较低的犊牛更易发生感染袁通过接触受污染的饲料尧 水源等以及传播媒介昆虫叮咬均可引起感染袁另外袁对牛只药物注射及疫苗接种等常规性操作也可引起 LSD 病毒传染遥 从调查结果来看袁 松江区牛结节性皮肤病防控工作做得比较好袁但仍需在防控监管工作上加把劲遥2冤由于该病种不属于我国实施动物疫病强制免疫计划中的病种袁所以袁松江区的牛场并没有进行疫苗接种遥疫苗免疫接种是对疫病控制最有效的手段袁很多国家现在通过接种山羊痘疫苗来预防 LSD2遥对于松江区辖区内的规模养殖场袁 如果群体牛都没有被感染袁那么可以对健康牛群体进行免疫接种预防遥3冤有效的生物安全措施袁能使防控工作做到事半功倍遥 应进一步增强规模牛场日常管理中的生物安全防范水平袁包括对饲养管理各环节尧养殖人员尧出入车辆尧牛只引种尧无害化处理等方面的生物安全行为进行规范化尧标准化遥4冤做好牛场的消毒灭源工作是杀灭 LSDV 的有效措施袁对牛场环境及牛舍进行经常性清理袁减少蚊虫孳生场所袁尽可能切断 LSDV 传播媒介袁在严格的生物安全措施基础上袁制定科学有效的消毒程序袁注重消毒药物的交替使用袁 是控制牛结节性皮肤病发生的重要环节遥5冤加大对牛场经营尧养殖尧兽医等相关人员进行牛结节性皮肤病防控知识的宣传普及和培训教育力度袁增强他们的自主防范意识遥动物疫病预防控制部门需加强 LSD 诊断尧监测排查尧疫苗接种尧过敏救治等专业技术能力袁进一步提高防控水平袁确保本辖区内的牛产业能持续尧稳定尧健康发展遥参考文献院1 Neitz W O.The ileriosis and cytauzoonosis:a reviewJ.On鄄derstepoort J Vet Res,1957,27(1):257-430.2 周廷宣,陈卫东.牛结节性皮肤病概述J.四川畜牧兽医,2019,46(12):31-33.年份样本数渊份冤阳性数渊份冤2020 年2021 年2022 年合计128126128382000026