资源描述
项目信息表
项目中文名称
反向斑点杂交技术在预测抗癫痫药物致皮肤严重不良反应中应用
项目英文名称
An application of reverse dot blot in prediction of cutaneous adverse drug reactions induced by antiepileptic drugs.
申报指南代码
项目申报单位
名 称
北京三博脑科医院
通讯地址
北京市海淀区香山南路香山一棵松50号
邮 编
100093
单位类别
医疗机构
□中央所属 □军队所属
□企业所属 □区县所属
√其他
组织机构代码
卫生机构
□市属卫生机构
□区县所属卫生机构
组织机构代码
研究机构
□市属科研院所
组织机构代码
单位性质
全额拨款单位（ ） 差额拨款单位（ ） 民营单位（√ ）
单位上级主管部门
组织机构代码
合作
单位
序号
单 位 名 称
无
项目
申请人
姓 名
王梦阳
性别
√男 □女
出生年月
1975年8 月
学 历
博士
职 称
主治医师
联络电话
项目组组员
总人数
7人
高级
2人
中级
2人
初级
2人
其他
1人
起始时间
1 月
终止时间
12 月
项目活动类型
□应用基础研究 □应用研究
√技术开发与推广研究 □其他
预期成果
□专利 □技术原则 □新产品 □新工艺 □新装置 □新材料
□计算机软件 √论文 □专著 □研究汇报 □其他
经费预算
10.4万元
专题经费
8万元
匹配经费
2.4万元
其他经费
0万元
项目摘要
(400字以内)
临床常用抗癫痫药物（AEDs）卡马西平（CBZ）、奥卡西平（OXC）、拉莫三嗪(LTG)及苯妥英钠(PHT)引起皮肤过敏反应几率较高，其中Stevens-Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死溶解症(TEN)死亡率达30%。亚洲人群HLA-B*1502等位基因与CBZ诱导SJS／TEN高度有关，尤其是汉族人群。其他三种AEDs也许也与HLA-B*1502或HLA-B*1301、Cw*0801 及DRB1*1602其中某几种等位基因高度有关，因此在处方以上四种AEDs时有必要对有关等位基因进行筛查，尤其是CBZ，而目前国内尚未立法同意。本研究率先将迅速、经济、精确反向斑点杂交技术（RDB）应用于该项筛查，拟分别入组对四种AEDs 出现严重皮肤不良反应患者及对照各10例，以DNA测序成果作为基因型诊断金原则，记录应用RDB技术时间成本、经济成本及精确率，成果与DNA测序为金原则进行对照。通过该项研究，我们首先要确认CBZ及以外三种AEDs致皮肤严重不良反应有关等位基因，另一方面要确立RDB技术在该反应等位基因筛查中优势地位，为实现商业化生产及尽快推进立法提供根据及技术支持。
关键词：（5个以内）
反向斑点杂交，抗癫痫药物，皮肤严重不良反应，基因多态性
一、立题根据（限1000-字，附重要参照文献目录）
1.国内外研究现实状况
临床常用抗癫痫药物(AEDs)中，卡马西平（CBZ）、奥卡西平（OXC）、拉莫三嗪(LTG)及苯妥英钠(PHT)皮肤过敏反应较常见。以CBZ为例，它已在中国上市三十多年，是局灶性癫痫及全面性强直－阵挛发作一线AEDs。服用CBZ 患者中，约有16%会出现轻微皮肤过敏反应，很少數病人也许引起严重过敏反应(约2～3/1000)，甚至致命。其体现程度从轻度斑丘疹到超敏反应综合征，甚至到严重大疱性损害—Stevens-Johnson综合征(SJS)和中毒性表皮坏死溶解症(toxic epidermal necrolysis，TEN)。严重皮肤不良反应病死率可高达30％[1-3]。粗略计算，中国900万癫痫患者，服用以上4种药物人数超过500万，假如用药不妥，1-2万人会出现严重皮肤过敏反应，数千人也许因此而死亡。
诸多临床医生并不深晓该事件严重性，虽然有所认识，也无法提前预判。不过，CHung等[1]一篇划时代研究使这种预判成为也许。此后，多项来自台湾、香港、中国大陆、泰国、新加坡、泰国、马来西亚、印度及欧美、非洲研究反复出了Hung成果，显示 HLA-B*1502等位基因与CBZ诱导SJS／TEN有关性有明显种族特异性，亚洲人群HLA-B*1502等位基因与CBZ诱导SJS／TEN高度有关，尤其是汉族人群。因此在汉族人群中检测HLA-B*1502基因可作为防止CBZ诱导严重皮肤不良反应一种重要手段[4-15]。CHung等最新研究表明，OXC和PHT引起SJS／TEN也与该位点高度有关，LTG也有一定有关性，此外PHT引起SJS／TEN还与HLA-B*1301、Cw*0801 及DRB1*1602高度有关[16]，但后述成果并未得到广泛反复和承认。Locharernku[17]在综述显示，HLA-B*1502等位基因筛选费用远低于SJS治疗费用。因此，在处方以上药物时，对应等位基因位点筛查非常必要，这将大大减少因严重皮肤不良反应带来医疗支出及死亡风险。
包括台湾、美国、澳大利亚在内多种国家抗癫痫协会及食品、药物监督管理局均立法或刊登申明，规定医生给汉族人处方CBZ时应检测HLA-B*1502等位基因。而我国则尚未出台对应立法文献，这与筛查费用较贵、措施不够简朴、缺乏对应设备及人员有关。目前文献通用监测措施为序列特异性PCR（SSP），国外进口试剂盒比较昂贵，进行科研工作是很好选择，不过用于临床显然成本过高。常用有：①Micro SSP HLA Class IB Locus Specific( OneLamda, Canoga Park, CA, U.S.A.) [5] ，价格2800元（税前），8次；②Micro SSP HLA ABDR Typing Kit ( OneLamda, Canoga Park, CA, U.S.A.) [9]，18650元（税前），40次；③PG1502 DNA detection kit (Pharmigene，台湾)[10]，进货渠道不畅。上述措施对PCR仪规定较高，需要昂贵实时荧光定量PCR仪（real-time PCR），价格20-30万元，在中国目前国情下不利于该检测在基层医院推广。此外，也有研究使用反向线点杂交技术（RLD），试剂盒采用HLA-B sequence-specific oligonucleotide reverse line blot (Dynal Biotech，Lafayette Hill, Pennsylvania, USA) [10]，价格46000元（税前），100次，同步需要配置RELI™ -Scan及对应软件，价格50000元（税前）。使用国外试剂盒，如包括提取DNA、PCR成本在内，检测一种等位基因位点成本在400-500元之间，4个位点成本至少1600元，远超国人承受能力。国内几项研究普遍采用前述SSP措施，但所用试剂为研究者合成[12-15]，因荧光标识引物价格昂贵，每个等位基因位点检测成本不低于120元，4个位点达480元，且精确率和稳定性低于国外试剂盒，同样需要配置昂贵实时荧光定量PCR仪。
然而，一味追求价格低廉势必牺牲监测精确性和稳定性。例如等位基因特异性PCR措施每个位点成本估计仅10-20元左右（包括DNA提取等），但成果不稳定，不可直接用于临床。直接测序虽然精确，且价格不停走低，每个反应30左右元即可，但测序仪非常昂贵，不能常规配置，如到生物企业送检一般需要等待2-3个工作日，用于多种样品和个位点监测，检查成本均会大幅增长。
2.研究目与意义
综上所述，我们设计该研究目就是要：1.确认CBZ及以外三种AEDs致皮肤严重不良反应有关等位基因；2.建立一种更适合中国国情筛查措施，以便普及并增进对应立法工作，其具有如下特性：
1)．使用以便、高效、敏捷、价格廉价
2)．成果易于阅读
3)．仅需配置低端PCR仪（5万元以内）即可完毕，
4)．合用于多种样品、多位点检测且不明显增长监测成本
反向斑点杂交技术(reverse dot blot，RDB)能满足这种规定。它较正向斑点杂交和凝胶电泳印迹转移杂交具有迅速、简便、高敏感性、特意性强特点，尤其是基因分型、基因突变检测，病原体检测等方面有其独特优势。获得PCR扩增产物目片段后，仅需杂交、洗膜(实现了洗膜条件同一化，无需不一样洗膜条件)、显色、成果鉴定。杂交过程在3小时即可完毕，加上DNA提取和PCR时间，7-8小时之内可以显示成果。既合用于少许标本分型检测，也可合用于大量标本同步分型[18]。成果显示时，将多种等位基因位点整合在一张膜条上，这将极大以便成果阅读。 前述美国Dynal Biotech企业开发HLA-B sequence-specific oligonucleotide reverse line blot试剂盒应用了RLB技术，该技术与RDB原理相似，但用于更多位点筛查，不适合少数几种等位基因检测，但从中我们可以明确“核酸杂交技术在该筛查中应用已得到承认”。
RDB技术成熟、可靠，在国内已经用于地中海贫血、肝豆状核等疾病基因突变检测，如能应用于AEDs致严重皮肤不良反应等位基因筛查，将大大推进该检测向广大基层医疗机构普及，从而挽救成千上万患者生命。
参照文献
[1]Chung WH,Hung SI,Hong HS,et a1．Medical genetics:a marker for Stevens—Johnson syndrome．Nature,,428:486．
[2]Hung SI,Chung WH,Jee SH,et a1．Genetic susceptibility to carbamazepine-induced cutaneous adverse drug reactions. Pharmacogenet Genomics. ,16:297-306．
[3]Chung WH, Hung SI. Genetic markers and danger signals in stevens-johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis. Allergol Int. , 59(4):325-332.
[4]Man CB,Kwan P,Baum L,et a1．Association between HLA-B*1502 Allele and Antiepileptic Drug-Induced Cutaneous Reactions in Han ChineseAuthors. Epilepsia,,48:1015—1018．
[5]Locharemkul c,Loplumlert J,Limotai C,et a1．Carbamazepine and phenytoin induced Stevens-Johnson syndrome is associated with HLA·B·1502 allele in Thai population．epilepsia,,49:2087-2091．
[6]Hung SI,Chung WH,Chen YT．HLA·B genotyping to detect carbamazepine induced Stevens-Johnson syndrome:implications for personalizing medicine．Personalized Medicine,,2:225-237．
[7]Yang CW,Hung SI,Juo CG,et a1．HI_A-B·1502·bound peptides:implications for the pathogenesis of carbamazepine induced Stevens-Johnson syndrome．J Allergy Clin Immunol,,120:870-877．
[8]Wang Q, Zhou JQ, Zhou LM, et al. Association between HLA-B*1502 allele and carbamazepine-induced severe cutaneous adverse reactions in Han people of southern China mainland, Seizure, , 20:446-448.
[9]Chang CC, Too CL, Murad S, et al. Association of HLA-B*1502 allele with carbamazepine-induced toxic epidermal necrolysis and Stevens–Johnson syndrome in the multi-ethnic Malaysian population. International Journal of Dermatology, , 50:221-214.
[10]Chen P, Lin JJ, Lu CS, et al. Carbamazepine-Induced Toxic Effects and HLA-B*1502 Screening in Taiwan. New England Journal of Medicine, , 364:1126-1133.
[11]Min FL, Shi YW, Liu XR. HLA-B*1502 genotyping in two Chinese patients with phenytoin-induced Stevens-Johnson syndrome. Epilepsy & Behavior, , 20:390-391.
[12]Hu FY, Wu XT, An DM. Pilot association study of oxcarbazepine-induced mild cutaneous adverse reactions with HLA-B*1502 allele in Chinese Han population. Seizure, , 20:160-162.
[13]Zhang Y, Wang J, Zhao LM, et al. Strong association between HLA-B*1502 and carbamazepine-induced Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis in mainland Han Chinese patients. European Journal of Clinical Pharmacology, , 67: 885-887.
[14]Wu XT, Hu FY, An DM, et al, Association between carbamazepine-induced cutaneous adverse drug reactions and the HLA-B*1502 allele among patients in central China. Epilepsy & Behavior, , 19:405-408.
[15]An DM, Wu XT, Hu FY, et al. Association study of lamotrigine-induced cutaneous adverse reactions and HLA-B*1502 in a Han Chinese population. Epilepsy Research, , 92:226-230.
[16]Hung SI, Chung WH, Liu ZS,et al. Common risk allele in aromatic antiepileptic-drug induced Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis in Han Chinese. Pharmacogenomics, , 11(3):349-356.
[17]Locharernkul C, Shotelersuk V, Hirankarn N. Pharmacogenetic screening of carbamazepine-induced severe cutaneous allergic reactions. J Clin Neurosci. , 18(10):1289-1294.
[18]Li D, Liao C, Li J, Huang Y,et al. Prenatal diagnosis of beta-thalassemia by reverse dot-blot hybridization in southern China. Hemoglobin, , 30(3):365-370.
二、研究目与内容
1.拟处理关键问题
确认卡马西平（CBZ）、奥卡西平（OXC）、拉莫三嗪(LTG)及苯妥英钠(PHT)所致皮肤严重不良反应与HLA-B*1502、HLA-B*1301、Cw*0801 及DRB1*1602四个等位基因有关性，并可以通过迅速、经济措施精确地监测出对应成果。
2.研究目
通过反向斑点杂交技术，将同步多种样品进行4个等位基因筛查时间压缩在8小时以内，精确率不低于98%，每个样品单价控制在100元以内。
3.研究内容
1）受试者入组：四种AEDs 出现严重皮肤不良反应患者及对照（用药后无皮肤过敏）各10例（总计80例）；
2）DNA提取：全血DNA试剂盒提取；
3）用反向斑点杂交技术、基因测序分别筛查HLA-B*1502、HLA-B*1301、Cw*0801 及DRB1*1602四个等位基因；
4）记录反向斑点杂交技术检测所需时间、精确率、成本，精确率以测序作为金原则。
4.特色与创新点
将反向斑点杂交技术用于预测抗癫痫药物皮肤过敏反应，该技术可将多种探针固定在同一膜上，同步参与检测样品DNA互不干扰，能一次性筛查多种不一样序列，大大提高筛查效率，为制定有关法律奠定技术基础。
三、研究方案
1.研究对象
口服4种抗癫痫药物严重皮肤过敏反应患者及对照各10例（总计80例）。
2.研究措施
（1）DNA提取：使用全血基因组DNA极速抽提试剂盒，按阐明书措施提取细胞基因组DNA，产物于紫外分光光度仪上测定DNA含量；
（2）使用Primer4.0设计等位基因引物；
（3）ABI梯度PCR仪PCR扩增；
（4）反向斑点杂交措施（RDB）：
首先，串联反复ASO探针构建制备。ASO探针长度一般为20个碱基，突变位点位于探针中1／3部分。探针一般为两份，一份与正常基因序列杂交，一份与突变序列杂交，正常与突变探针除了在基因突变点处核苷酸不一样外，其他序列都是相似。通过控制洗脱温度，使正常探针只能与正常基因杂交而不与突变序列杂交，反之亦然。在本课题中，我们用连接探针单元措施获得了串联反复ASO探针，探针长度在300～500bp之间，克隆入载体后，用载体通用测序引物扩增其插入序列，片段长度为450~650bp，这种长度片段可以牢固结合于尼龙膜上。在探针单元两侧插入5个核苷酸(1inker)分割和连接探针单元，使每个单元都能发挥杂交作用而不至于“挤在一起”。根据突变位点设计好正常／突变探针单元后，需要再分别设计他们反向交错互补链。互补链5’端与探针链突变点位置后一位核苷酸相对应，其中间与探针链3’端互补，两条链伸出5’端分别是对方5’端互补序列，这样在退火后探针链与互补链就可以首尾排列起来。
①探针链自身连接反应；②连接DNA片段回收纯化③、探针与T载体连接④大肠杆菌DH5a感受态细胞制备⑤转化大肠杆菌DH5a感受态细胞⑥、筛查挑选菌落(菌落PCR)⑦、SDS碱裂解法制备质粒DNA：小量制备
另一方面，制备杂交膜。将提取质粒稀释20倍，作为PCR模板，扩增质粒中插入对应探针序列。取2ul PCR产物，以1．5％琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪下观测扩增状况。取适量PCR产物，加入400ul碱变性液，混匀后室温放置15分钟。用点样器将变性PCR产物抽真空点在尼龙膜上，正常探针点成一行，对应突变探针点在第二行)，抽干后加入400ul中和液，真空抽干。将膜条取出，放在纸巾上使其干燥，紫外交联仪交联固定，真空包装后，室温下避光保留。
第三，反向斑点杂交。将待用探针分别点到硝酸纤维素膜或尼龙膜上，每个探针一种点并编上号，再将待测DNA样本(PCR扩增产物，在PCR引物5’端预先进行生物素标识，使扩增产物对应标识有生物素)与之杂交，这样待检样本就会与具有同源序列探针结合，经洗涤清除未结合DNA样本，由于待测DNA样本具有生物素类标识物，结合了待测DNA探针点上就带有生物素类标识物，再经对应显色反应就能显出杂交信号。同一条膜上多种探针同步与不一样扩增PCR产物进行杂交，并规定所有结合于膜上探针应有大概相似Tm值。观测成果，阳性反应显示蓝色斑点，不显色提醒不杂交。
（5）焦磷酸测序措施：PCR扩增产物直接送生物企业测序。
3.技术路线
被试入组
流程图
DNA提取
引物设计
PCR
探针制备
测序
反向斑点杂交
两种措施时间、精确率及成本比较
4.记录措施
花费时间、成本比较使用t检查，精确率比较使用卡方检查。
5.组织实行与管理措施
重要由三博脑科医院神经内科分子生物试验室组织实行，由科教部负责管理。
四、工作基础与优势
1.申请者及研究组重要组员研究经历及研究成果(近5年)
在癫痫分子遗传学方面，王梦阳博士有5年分子生物学试验经验，曾负责多种有关癫痫分子遗传学方面研究，纯熟掌握DNA和RNA提取、RT-PCR和MSP-PCR，可以纯熟搜索NCBI、UCSC数据库，应用生物信息学知识合理分析多种DNA变异。刘兴洲专家曾是卫生部全国重点学科项目“遗传性运动障碍疾病临床、电生理、分子生物学研究” 项目负责人及国家自然科学基金“Machado-Joseph病临床病理分子生物学研究”项目重要参与者，并获得国家科技进步二等奖和卫生部科技进步一等奖。其他参与人员在癫痫病学及分子生物学方面也经验丰富。
[1]Wang M, Wu L, Zheng Y, Zhang Q, Li C.The Chinese QOLIE-AD-48: Translation, validity, and reliability. Epilepsy Behav , 14(3): 476-80.
[2]王梦阳, 吴立文, 刘兴洲. 中文版青少年癫癎患者生活质量问卷信度及效度检查. 癫癎与神经电生理学杂志. , 20(4): 210-17.
[3]王梦阳, 刘兴洲, 陈说花, 张玮, 隋伟, 王静, 王海祥, 李学秀. 携带新生SCN1A突变婴儿严重肌阵挛癫痫1例. 第四届北京三博国际神经科学论坛. :130-131.
[4]王梦阳, 吴立文, 林华, 王铮, 黄尚志. 一种中国北方遗传性癫(癎)伴热性惊厥附加症家系基因定位研究. 癫癎与神经电生理学杂志. , 19(2): 77-81.
[5]王梦阳, 吴立文, 卢强, 金丽日, 刘秀琴, 黄颜. 国际抗癫痫联盟国际癫痫综合征分类可分类率比较及架构分析. 中华神经科杂志. , 42(7): 440-445.
[6]王梦阳, 吴立文. 小朋友良性癫(癎)伴中央颞区棘波遗传学研究进展. 中华神经科杂志. , 41(9): 638-640.
[7]王梦阳, 董立羚译. 特发性全面性癫痫. 任连坤主译. 癫痫发作和综合征诊断与治疗.北京: 中国协和医科大学出版社. 第一版, , 248-319.
[8]王梦阳译. 婴儿重症肌阵挛性癫痫.刘兴洲主译. 癫痫性脑病及其远期预后.北京:人民卫生出版社. , 29-39.
[9]Lin H, Li J, Wang M, Wang Z, Wang Y, Wu L. Mutation screening of three Chinese families with genetic epilepsy with febrile seizures plus. Neurosci Lett. ,500(2):123-8.
[10]Lv RJ, Wu LW, Jin LR, Lu Q, Wang MY, Liu H. Reliability and validity of a Chinese version of the Impact of Pediatric Epilepsy Scale. Epilepsy Behav. ,16(1):150-5.
[11]陈晏, 吴立文, 房岳, 王梦阳, 许琪, 沈岩. 夜发性额叶癫痫三家系临床和遗传学特性. 中华神经科杂志. , 42(6):386-389.
[12]林华, 王玉平, 王梦阳, 吴立文.全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系致病基因连锁定位和突变分析.中华医学杂志. , 88(12):3177-3188.
[13]林华, 王玉平, 王梦阳, 吴立文.中国10个全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系临床特性分析.脑与神经疾病杂志. , 17(1): 5-8.
2.单位科研条件及保障措施
三博脑科医院癫痫中心是完全按照国际三级癫痫中心原则建立以癫痫内外科、临床电生理、影像学、心理学综合一体大型医疗中心。每年就诊癫痫患者达3000人，其中80%至少会使用卡马西平、奥卡西平、拉磨三嗪、苯妥英钠中一种。神经内科分子试验室可以完毕DNA、RNA提取、PCR、核酸杂交等分子遗传学试验，已开展临床及科研工作数年。我院对科研重视程度极高，一般会在资金人员方面予以获得科研基金项目予以支持。这些为保证本研究顺利进行奠定了坚实基础。
3.政策法律法规保障
该研究所有内容符合国家法律法规规定。
五、研究进度与考核指标
年度
时间（年、月）
研究内容
考核指标
第一年
.1-.12
入组15例严重皮肤不良反应患者，15例对照，分别用两种筛查措施检测4个等位基因位点
完毕率不低于80%
次年
.1-.12
入组15例严重皮肤不良反应患者，15例对照，分别用两种筛查措施检测4个等位基因位点
完毕率不低于80%
第三年
.1-.12
入组10例严重皮肤不良反应患者，10例对照，分别用两种筛查措施检测4个等位基因位点。记录数据，课题总结。
完毕率不低于80%
六、预期成果与知识产权管理
1.预期成果形式：包括技术原则与规范、人才培养、学科建设、论文、专著、专利、成果、新项目等。
预期培养硕士硕士一名，刊登1篇综述、1篇关键期刊论文、1篇SCI论文。形成反向斑点杂交检测抗癫痫药物致皮肤严重不良反应等位基因技术规范，为该项目在临床推广奠定基础。
2.社会效益和经济效益
每年中国新增癫痫患者数十万人，加上周围神经痛而口服卡马西平患者，数字有百万之众，产生严重皮肤不良反应患者近万人。进行癫痫药物过敏反应等位基因筛查可防止易感人群服用上述抗癫痫药物，从而减少严重皮肤不良反应发生率，挽救数以千计患者生命。反向斑点杂交技术将筛查时间缩短到2小时以内（测序一般需要2-3天），成本较酶切及测序低廉，而精确率与测序靠近，因此更符合卫生经济学规定，如能商品化，将更有助于该项筛查在基层医院推广。
3.知识产权归属与管理
归属北京三博脑科医院。
七、医学伦理管理与风险分析
1.研究中伦理问题及对策
本研究波及被试者DNA，需要签订知情同意书，使研究符合伦理规定。
2.研究中技术、政策、管理等风险分析及对策
反向斑点杂交探针制作是关键，需提高试验室无菌水平，购置对应设备。在政策和管理方面风险较低。
伦理问题：
（1）疾病预知与处理两难问题：等位基因筛查并不能保证患者百分之百没有皮肤不良反应风险。尤其是轻微皮肤不良反应与以上等位基因关联不亲密。
（2）个人心理承担与家庭关系稳定问题：基因检测具有自身风险，重要体目前心理承担上。受检者对与否存在与某种严重疾病有关基因，对检查成果焦急期待也许引起抑郁；
（3）社会歧视与舆论压力问题：当有基因缺陷患者遗传密码被破解并记录在案时，他们也许遭到来自社会各方面压力。
对策：
1．知情同意原则；2基因隐私保护原则；3尊重个人遗传特性原则
八、项目组组员
项目申请人
姓 名
性别
年龄
职务/
职称
业务专业
任务分工
为本项目
工作时间（%）
所在单位
身份证号
签字
王梦阳
男
36
主治医师
癫痫病学、分子遗传学
试验设计、试验操作
60%
北京三博脑科医院
41219
重要研究人员
姓 名
性别
年龄
职务/
职称
业务专业
任务分工
为本项目
工作时间（%）
所在单位
身份证号
签字
刘兴洲
男
62
主任医师
神经病学、神经电生理、癫痫病学
入组及诊断
50%
北京三博脑科医院
54012
陈说花
女
副主任医师
神经病学、神经影像学、癫痫病学
入组及诊断
50%
北京三博脑科医院
370802
张玮
男
30
主治医师
神经病学、神经电生理、癫痫病学
试验操作
50%
北京三博脑科医院
91000
王静
女
31
住院医师
神经病学、神经电生理、癫痫病学
试验操作
50%
北京三博脑科医院
37028
闫兆芬
女
26
住院医师
神经病学、分子生物学
试验操作
80%
北京三博脑科医院
44529
李威威
女
26
硕士硕士
癫痫病学、分子遗传学
试验操作
50%
首都医科大学附属复兴医院
37847
九、经费预算（单位：万元）
年
年
年
合 计
经费总额
5.4
3.4
1.6
10.4
1课题经费来源： 单位：万元
来 源
年
年
年
合 计
市财政专题经费
5
3
--
8
匹配经费
单位匹配
0.4
0.4
1.6
2.4
其他来源
0
0
0
0
合 计
0.4
0.4
1.6
2.4
2课题经费支出：
科 目
来源
年
年
年
合 计
设备费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
材料费
市财政专题经费
3.4
1.8
--
匹配经费
0
0
1.6
测试化验加工费
市财政专题经费
1.0
1.0
--
匹配经费
0
0
0
燃料动力费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
国际合作与交流费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
差旅费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
会议费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
档案出版、文献信息传播、知识产权事务费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0.4
0.4
劳务费
市财政专题经费
0.2
0.2
--
匹配经费
0
0
0
征询费
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
管理费
市财政专题经费
0.4
0
--
匹配经费
0
0
0
其他费用
市财政专题经费
0
0
--
匹配经费
0
0
0
合 计
首都卫生发展科研专题经费总合计
8.0
其他来源总合计
2.4
2. 设备购置费用明细：（单价在7万元如下，含7万元）
名 称
型 号
数 量
金 额
资金来源
购置时间
重要用途
十、合作单位任务分工及经费分派
（如无合作单位，可不填写，如有合作单位，还需提供合作意向书作为附件）
无
十一、签订意见
1.单位学术委员会意见
盖 章：
年 月 日
2.单位伦理委员会意见（波及伦理问题须单位伦理委员会讨论并出据意见）
盖 章：
年 月 日
3.单位意见
主管院长（签 章）： 盖 章：
年 月 日
十二、承诺：
1.申请人承诺：
我保证申请书内容真实性。假如获得资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守《首都卫生发展科研专题管理措施》及其配套文献规定，切实保证研究工作时间，认真组织项目实行，完毕研究任务目，并配合做好全程监督检查。若填报失实、项目执行中出现违约行为，本人将承担违约责任。
申请人：（签字）
年 月 日
2.申报单位承诺：
我单位已按本次《申报指南》规定，对本申报书各项内容进行了认真审核，状况属实并同意申报。申请项目如获资助，我单位将根据《首都卫生发展科研专题管理措施》及其配套文献规定，按照本申报书和正式立项告知签订项目任务书，并严格履行对应义务。假如信息失实、项目执行中出现违约行为，我单位将承担违约责任。
申报单位法人（签章）： 申报单位（公章）
年 月 日
十三、附件
1.合作意向书（包括合作内容、合作人员、合作时间、经费分派比例、支付形式与时间等）
2.查新汇报（仅限重点攻关项目和自主创新项目）
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