脓汁和粪便标本中病原菌的检测专家讲座.pptx

医学微生物学试验综合性试验一脓汁和粪便标本中病原菌检测（六）药敏试验结果分析糖发酵、动力试验结果分析玻片凝集试验细菌综合性试验总结试验汇报撰写洗刷脓汁和粪便标本中病原菌的检测第1页脓汁和粪便标本中病原菌的检测第2页惯用药敏试验纸片判断标准P21抗菌药品 纸片含药量 抑菌圈直径(mm)耐药 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌)10单位 28 -29链霉素 10微克 11 1214 15庆大霉素 10微克 12 1314 15四环素 30微克 14 1518 19氯霉素 30微克 12 1317 18磺胺 300微克 12 1316 17脓汁和粪便标本中病原菌的检测第3页v药敏试验结果分析青霉素链霉素庆大霉素黄色细菌白色细菌紫黑细菌粉红细菌 注：耐药，中度敏感，敏感。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第4页抗菌素药敏试验纸片法结果vG+金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素敏感，对链霉素中度敏感。vG-粉红色和紫黑色细菌对青霉素耐药，对链霉素敏感。vG+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第5页糖发酵、动力试验结果判断 反应现象 结果描述 符号培养基变色无气泡 分解糖产酸不产气 培养基变色有气泡 分解糖产酸又产气 培养基不变色 不分解糖 细菌扩散生长,培基混浊 细菌有鞭毛 沿接种线生长,培基清澈透明 细菌无鞭毛 脓汁和粪便标本中病原菌的检测第6页肠道杆菌科各菌属生化反应判别表 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体埃希菌属 +志贺菌属 +/-/+-沙门菌属 /+-+霍乱弧菌 +-+变形杆菌属 -+产酸或阳性，产酸产气，-阴性，+/-多数阳性，-/+多数阴性，不确定。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第7页常见肠道感染细菌主要生化反应特征 葡萄糖 乳糖 半固体（动力）v大肠埃希菌 +v痢疾志贺菌 +-v伤寒沙门菌 +-+v霍乱弧菌 +-+v幽门螺杆菌 不分解糖类 +v变形杆菌 -+产酸能快速杀死该菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第8页细菌生化反应结果分析 甲、乙紫黑 丙、丁粉红组号葡萄糖 乳糖半固体葡萄糖乳糖半固体12345678910结果+-脓汁和粪便标本中病原菌的检测第9页实结果错误错误可能性v纯培养时，菌落挑错了。v无菌操作不严格，污染杂菌。v接种时未协调好，接种错误。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第10页玻片凝集试验v在适量电解质存在情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体混合，假如百分比适当，则出现肉眼可见凝集块，称为凝集反应。v用于细菌抗原分析、判定及分型，也可应用已知细菌检验未知血清抗体。v诊疗血清与待检测细菌混合细菌凝集阳性汇报：检出细菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第11页玻片凝集试验原理v凝集反应机制是因为抗原与其对应抗体间存在着相对应极性基。极性基相互吸附，使抗原外周水化膜除去，由亲水溶胶变成憎水溶胶。v电解质含有降低电位作用，使抗原颗粒间排斥力消除，从而产生了凝集现象。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第12页玻片凝集反应试验步骤v取洁净干燥载片一片，分试验与对照区。v滴加生理盐水15ul，置于对照区中心；滴加诊疗血清15ul，置于试验区中心。v用接种环取菌苔，分别研磨乳化于盐水或血清内，混合均匀。v将玻片重复摆动、充分混匀，凝集速度更加快、结果更清楚。v观察是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有则记为阴性。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第13页载玻片1张痢疾血清，生理盐水各15ul粉红色菌苔与盐水混匀粉红色菌苔与血清混匀脓汁和粪便标本中病原菌的检测第14页安全警告v此次试验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um经过呼吸道直接抵达肺泡。vPike博士对试验室感染统计分析结果发觉，不明原因感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引发。v试验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持平静、有序，尽可能少说话、少走动，以免感染病原菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第15页综合性试验一综合性试验一 试验总结试验总结 v采取平板划线分离法，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是经典葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。经过血浆凝固酶试验判别，金黄色葡萄球菌是致病菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第16页v用伊红美蓝平板，从粪便标本分离出紫黑色含有金属光泽菌落和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能判别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果判定，它们分别是大肠埃希菌和痢疾志贺菌。v金黄色葡萄球菌和痢疾志贺菌，这两株致病菌分别做了药敏试验，G+金黄色葡萄球菌对青霉素敏感，G-痢疾杆菌对链霉素敏感；庆大霉素对G+和G-菌都敏感。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第17页脓汁和粪便标本细菌检测结果分析脓汁和粪便标本细菌检测结果分析标本标本菌落菌落形态形态血浆血浆凝固酶凝固酶葡葡 乳乳 半半痢疾痢疾血清血清青青 链链 庆庆结论结论黄色G+球+金黄色葡萄球菌脓汁白色G+球-+白色葡萄球菌紫黑 G杆 +-+大肠埃希菌粪便粉红 G杆+-+-+福氏志贺菌脓汁和粪便标本中病原菌的检测第18页思索题v假如细菌生化反应结果不佳，原因何在?v汇报纸片法药敏试验结果，是否符合你所判定细菌药敏特征?v玻片凝集试验观察完成，应将载玻片马上放入消毒缸内，为何?v怎么设计一个试验，对伤寒沙门菌进行分离和判定?脓汁和粪便标本中病原菌的检测第19页常见病原性球菌检验程序常见病原性球菌检验程序P47P47：直接涂片、革兰染色、镜检直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物脓汁、痰、咽部分泌物 观察菌落性状、溶血性、色素观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板培养血琼脂平板培养 涂片染色镜检涂片染色镜检 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 生化反应生化反应 纯培养纯培养 动物试验动物试验 药敏试验药敏试验血液、穿刺液血液、穿刺液 肉汤增菌培养肉汤增菌培养 培养液涂片染色境检培养液涂片染色境检 常见肠道致病菌检验程序常见肠道致病菌检验程序P48P48：粪便粪便 SS SS琼脂、伊红美蓝平板培养琼脂、伊红美蓝平板培养 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 血清学判定血清学判定 血、骨髓血、骨髓 增菌培养增菌培养 双糖铁培养基双糖铁培养基 染色镜检染色镜检 生化反应生化反应 脓汁和粪便标本中病原菌的检测第20页脓汁和粪便标本中病原菌检测 年级专业 学号 姓名v试验目标v试验器材v方法与步骤v结果与讨论。试验汇报以小组试验结果为基础。主要是从2种标本取得4种菌试验结果。讨论是对试验结果分析，应客观、严谨，围绕主题，突出重点。结论应该明确，脓汁标本检测到什么病原菌？粪便标本检测到什么病原菌？结果不正确也要分析原因。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第21页怎样撰写科研论文P57v不论人们是否完全赞成“要么发表、要么销毁”格言，但毫无疑问，科学研究目标就是要把研究结果发表出来。普通来说，评价科学工作者工作，主要不是看他们在试验室内灵巧操作，也不是看他们在辽阔或狭窄科学领域内掌握知识多少，也不是看他们智能或魅力，而主要是依据他们所发表文章来估量。他们可能由此而成名，或依然默默无闻。所以，写出能充分展示自己工作、引发同行注意论文是一个科研工作者必备素质。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第22页v一项科学试验，不论它结果多么惊人，只有到它发表出来时才算完成。所以对科学工作者来说，他不但必须“研究”科学，而且必须把科研结果“写”出来。要写好一篇科学论文，作者必须准确地知道他要写是什么以及为何要这么写。v科学论文是叙述原始研究结果而写成并发表汇报。详细地说，一篇公认原始科学论文，必须是首次公布，它应提供足够资料，以使同行们能够：(1)评价观察到结果；(2)重复试验；(3)评价推理过程，而且原始科学论文还必须能为人们所接收，基本上可供科学界永久地、不受限制地利用，要有严密思维特征、逻辑性、清楚性和准确性。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第23页v科研论文内容P57标题 摘要引言材料与方法结果讨论参考文件脓汁和粪便标本中病原菌的检测第24页医学微生物学试验综合性试验一脓汁和粪便标本中病原菌检测（六）药敏试验结果分析糖发酵、动力试验结果分析玻片凝集试验细菌综合性试验总结试验汇报撰写洗刷脓汁和粪便标本中病原菌的检测第25页惯用器材摆放次序：电源插座惯用器材摆放次序：电源插座试管架试管架酒精灯酒精灯污物盘。污物盘。试管架上器材：按接种针、试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火接种环、油性笔和打火机次序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插机次序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。脓汁和粪便标本中病原菌的检测第26页试验室器材试验室器材 整齐有序整齐有序脓汁和粪便标本中病原菌的检测第27页脓汁和粪便标本中病原菌的检测第28页