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血清学基础免疫学反应：抗原抗体反应免疫学反应：抗原抗体反应lThe Immune Response:Antigen-Antibody Reactionsl是抗原与抗体反应，抗原与抗体反应，仅在高等脊椎动物中存在.这是已知最精妙复杂身体抵抗外部物质系统。血清学基础培训课程第1页In vivo reactions活体中反应:抗体与入侵细胞结合，补体与抗体结合，造成入侵细胞裂解血清学基础培训课程第2页一、什么是血清学反应一、什么是血清学反应l血清学反应是指对应抗原与抗体在体外体外一定条件下作用，可出现肉眼可见沉淀、凝集现象。在微生物检验中，惯用血清学反应来判定分离到细菌，以最终确认检测结果。血清学基础培训课程第3页1、什么是抗原、什么是抗原l抗原（A substance that causes production of an antibody directed against itself）是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合物质。产生对应抗体与抗原结合，形成抗原抗体复合物，产生免疫反应，从而保护机体不受抗原侵害而造成破坏。普通抗原都是外来物体，如细菌、病毒、寄生虫等。血清学基础培训课程第4页2、什么是、什么是抗体抗体l机体受外来抗原物质刺激后，产生一个与该抗原发生特异性结合免疫球蛋白(Ig)被分为G，A，M,E,D等几类.最经典抗体是IgG,有Y型三维结构,包含两套重链和轻链。血清学基础培训课程第5页IgG抗体结构及抗体结构及与抗原反应与抗原反应l 血清学基础培训课程第6页二、血清学反应普通特点：二、血清学反应普通特点：l1、抗原抗体结合含有特异性，但有共同抗原体存在时，会出现交叉反应。l2、抗原抗体结合是分子表面结合，这种结合虽相当稳定，不过可逆。l3、抗原抗体结合是按一定百分比进行，只有百分比适当初，才能出现可见反应。血清学基础培训课程第7页l4、血清学反应大致分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完成，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。血清学基础培训课程第8页抗体攻击抗原（中间是抗原）抗体攻击抗原（中间是抗原）血清学基础培训课程第9页最适百分比示意图最适百分比示意图血清学基础培训课程第10页三、血清学反应类型l1）凝集反应）凝集反应l2）沉淀反应）沉淀反应l3）补体结合反应）补体结合反应血清学基础培训课程第11页1、Agglutination凝集反应凝集反应l颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与对应抗体结合，在电解质参加下所形成肉眼可见凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。其中抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量试验时，应稀释抗体。lAgglutination is the process by which particulate antigen such as cells are aggregated to form large,visible aggregates if the specific antibody is present.血清学基础培训课程第12页）直接凝集反应）直接凝集反应l颗粒性抗原如细菌和细胞与对应抗体直接结合所出现反应，称为直接凝集反应(Direct agglution reaction)。血清学基础培训课程第13页a.玻片凝集法玻片凝集法l是一个常规定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。惯用于判定菌种、血型。如将含有白叶枯病菌抗体血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见凝集块，即为阳性反应，证实该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定血清学基础培训课程第14页一个塑料试验板一个塑料试验板血清学基础培训课程第15页b.试管凝集法试管凝集法l是一个定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有没有对应抗体及其效价。因为要测定抗体含量，故将待检验血清用等渗盐水倍比稀释成不一样浓度，然后加入等量抗原，37，24小时后观察，血清最高稀释度仍有显著凝集现象，为该抗血清凝集效价。血清学基础培训课程第16页试管凝集法示意图试管凝集法示意图血清学基础培训课程第17页c.Microtiter Agglutination微皿板（96孔板）凝集法凝集法l1)Microtiter plates are plastic and usually contain 96 wells2)More efficient way to do assay as opposed to tubes血清学基础培训课程第18页微皿板凝集法示意图凝集法示意图血清学基础培训课程第19页）间接凝集反应）间接凝集反应l将可溶性抗原（抗体）先吸附在一个与免疫无关，颗粒状微球表面，然后与对应抗体（抗原）作用，在有电解质存在条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应(Indirect agglutination)。因为载体增大了可溶性抗原反应面积。当载体上有少许抗原与抗体结合。就出现肉眼可见反应，敏感性很高。血清学基础培训课程第20页2、沉淀反应、沉淀反应可溶性抗原与对应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。因为在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原稀释度作为沉淀反应效价。Precipitation involves combination of soluble antibody with soluble antigen to produce insoluble complexes.血清学基础培训课程第21页）环状沉淀反应：）环状沉淀反应：l是一个定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁渐渐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色沉淀圆环。血清学基础培训课程第22页环状沉淀反应示意图环状沉淀反应示意图血清学基础培训课程第23页）絮状沉淀反应：）絮状沉淀反应：l将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者百分比适当初，会出现肉眼可见絮状沉淀，此为阳性反应。血清学基础培训课程第24页3、Complement Fixation补体结合反应lComplement fixation is the triggering of the classical complement pathway due to combination of antigen with specific antibody.l1)A very senstitive assay2)Used in a number of research application3)Somewhat difficult to control血清学基础培训课程第25页补体结合反应补体结合反应l补体结合反应(Complement fixation reaction)是在补体参加下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统抗原抗体反应。补体无特异性，能与任何一组抗原抗体复合物结合而引发反应。假如补体与绵羊红细胞、溶血素复合物结合，就会出现溶血现象，假如与细菌及对应抗体复合物结合，就会出现溶菌现象。其试验原理是补体不单独和抗原或抗体结合。假如出现溶菌，是补体与待检系统结合结果，说明抗原抗体是相对应，假如出现溶血，说明抗原抗体不相对应。此反应操作复杂，敏感性高，特异性强，能测出少许抗原和抗体，所以应用范围较广。血清学基础培训课程第26页补体结合反应示意图补体结合反应示意图血清学基础培训课程第27页四、实用血清学检测方法四、实用血清学检测方法l除上述玻片凝集法、环状沉淀法外最惯用有琼脂扩散法、ELISA、免疫电泳法和免疫荧光法免疫电泳法和免疫荧光法血清学基础培训课程第28页1、琼脂扩散法、琼脂扩散法l利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者百分比适当，在其扩散某一部分就会出现白色沉淀线。每反抗原抗体可形成一条沉淀线。有几反抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单向扩散是一个定量试验。可用于免疫蛋白含量测定。而双向扩散多用于定性试验。因为方法简便易行，惯用于测定分析和判定复杂抗原成份。血清学基础培训课程第29页琼脂单扩散试验示意图琼脂单扩散试验示意图血清学基础培训课程第30页琼脂双扩散试验示意图琼脂双扩散试验示意图血清学基础培训课程第31页琼脂双扩散试验结果琼脂双扩散试验结果血清学基础培训课程第32页Agar gel diffusion testl左图示抗体与样本都起反应l右图示抗体只与一个样本反应血清学基础培训课程第33页2、ELISA enzyme linked immuno-sorbent assay酶联免疫结正当 1)One of the most sensitive reactions 2)Easy to set up and run3)Commonly used in diagnostic applications血清学基础培训课程第34页双抗体夹心双抗体夹心ELISA法示意图血清学基础培训课程第35页双抗体夹心双抗体夹心ELISA法示意图血清学基础培训课程第36页双抗体夹心双抗体夹心ELISA捕捉试验血清学基础培训课程第37页3、Immunoelectrophoresis免疫电泳法l1)Provides some comparative information2)May tell you the number of antigens in a preparation血清学基础培训课程第38页免疫电泳法示意图血清学基础培训课程第39页免疫电泳法结果血清学基础培训课程第40页强反应与弱反应血清学基础培训课程第41页4、Immunofluorescence免疫荧光法l1)Often used with the fluorescent microscope2)Compounds fluoresce in the presence of uv light血清学基础培训课程第42页免疫荧光法示意图血清学基础培训课程第43页免疫荧光法结果血清学基础培训课程第44页免疫荧光法结果血清学基础培训课程第45页免疫荧光法结果血清学基础培训课程第46页