梅毒实验检测及诊断.pptx

梅毒试验室诊疗梅毒试验室诊疗检验科检验科梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第1页页梅毒概况梅毒概况梅梅毒毒是是由由梅梅毒毒螺螺旋旋体体引引发发一一个个慢慢性性、系系统统性性性性传传输输疾疾病病。人人体体受受感感染染后后，螺螺旋旋体体很很快快播播散散到到全全身身，几几乎乎可可侵侵犯犯全全身身各各组组织织与与器器官官，临临床床表表现现各各种种多多样样，且时显时隐，病程较长且时显时隐，病程较长中中华华人人民民共共和和国国传传染染病病防防治治法法要要求求要要管管理理性性病病是是艾艾滋滋病病、淋淋病病和和梅梅毒毒，应应加加以以重重点点防防治治。卫卫生生部部性性病病防防治治管管理理方方法法则则要要求求除除上上述述3 3种种病病以以外外，还还有有生生殖殖器器疱疱疹疹、尖尖锐锐湿湿疣疣、软软下下疳疳、非非淋淋菌菌性性尿尿道道炎（炎（NGU）、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病）、性病淋巴肉芽肿均为监测性疾病梅梅毒毒早早期期主主要要侵侵犯犯皮皮肤肤及及粘粘膜膜，晚晚期期除除侵侵犯犯皮皮肤肤、粘粘膜膜外外，还还可可侵侵犯犯心心脏脏血血管管系系统统及及中中枢枢神神经经系系统统等等全全身身各各个个系系统统；另另首首先先，梅梅毒毒又又可可多多年年无无症症状状而而呈呈潜伏状态潜伏状态梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第2页页梅毒分期梅毒分期一一期期梅梅毒毒：主主要要表表现现为为单单个个、无无痛痛性性硬硬下下疳疳，通通常常在在感感染梅毒螺旋体后染梅毒螺旋体后34周出现周出现二二期期梅梅毒毒：一一期期梅梅毒毒不不经经治治疗疗，梅梅毒毒螺螺旋旋体体在在几几周周至至几几个个月月后后会会播播散散至至血血液液中中，引引发发二二期期梅梅毒毒。二二期期梅梅毒毒临临床床表表现现各各种种多多样样，常常见见有有发发烧烧、淋淋巴巴结结病病、弥弥漫漫性性皮皮疹疹、生殖道或会阴湿疣等。一、二期梅毒统称为早期梅毒生殖道或会阴湿疣等。一、二期梅毒统称为早期梅毒三三期期或或晚晚期期梅梅毒毒：普普通通在在最最初初感感染染多多年年至至十十多多年年后后发发生生，可可累累及及任任何何器器官官，常常见见有有梅梅毒毒瘤瘤性性梅梅毒毒、心心血血管管梅梅毒毒及及神经梅毒神经梅毒隐隐性性梅梅毒毒：无无症症状状但但梅梅毒毒血血清清学学试试验验呈呈阳阳性性。分分为为早早期期隐隐性性梅梅毒毒（病病程程一一年年以以内内）和和晚晚期期隐隐性性梅梅毒毒（病病程程一一年年以上）以上）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第3页页生物学特征生物学特征n梅毒螺旋体即苍白密螺旋体苍白亚种，人是其唯一宿主。直径梅毒螺旋体即苍白密螺旋体苍白亚种，人是其唯一宿主。直径0.10.15m，全长，全长7-8m。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼运动方式。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼运动方式。n梅毒螺旋体主要有两种抗原：梅毒螺旋体主要有两种抗原：1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等面特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。同抗原，可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心肌心脂质抗原发生反应，此法敏感性机体产生反应素，其与牛心肌心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。高，但有假阳性。n梅毒螺旋体对外界抵抗力极弱，离体后梅毒螺旋体对外界抵抗力极弱，离体后12小时即死亡，对热小时即死亡，对热和干燥尤其敏感，在体外干燥环境下和干燥尤其敏感，在体外干燥环境下12小时或加小时或加1.5经经1小小即死亡。血液中即死亡。血液中4放置放置3天可死亡，所以天可死亡，所以4血库存放血库存放3天以上天以上血液无传染梅毒危险。对肥皂水和惯用化学消毒剂亦敏感，血液无传染梅毒危险。对肥皂水和惯用化学消毒剂亦敏感，1%-2%石炭酸内数分钟就死亡。石炭酸内数分钟就死亡。n梅毒免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦梅毒免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应，体液免疫中有两种抗体：一个是梅生细胞免疫和体液免疫反应，体液免疫中有两种抗体：一个是梅毒特异性抗体，主要是毒特异性抗体，主要是IgG、IgM，对螺旋体有制动作用，当有，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体再感染有保护作用。另补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体再感染有保护作用。另一个是抗脂质抗体反应素，为一个是抗脂质抗体反应素，为IgG和和IgM混合物，对机体无保护混合物，对机体无保护作用。作用。梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第4页页期梅毒病人取硬下疳渗出液，期梅毒病人取硬下疳渗出液，期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对抽出液。对期梅毒末期以后（大约感染期梅毒末期以后（大约感染34周以后）病人可分周以后）病人可分离血清检验有没有梅毒螺旋体抗体和反应素。离血清检验有没有梅毒螺旋体抗体和反应素。检验方法：检验方法：1、显微镜镜检显微镜镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合适合期梅毒检验。（现已经不惯用）期梅毒检验。（现已经不惯用）2、血清学试验血清学试验包含非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类包含非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类1）非螺旋体抗体试验（非螺旋体抗体试验（NtrAT）用正常牛心肌脂质作为抗原，测定用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清中反应素。均为初筛试验。病人血清中反应素。均为初筛试验。2）密螺旋体抗体试验（密螺旋体抗体试验（TrAT）采取采取Nichols株梅毒螺旋体作为抗株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。试验。送检标本和检验方法送检标本和检验方法梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第5页页梅毒治疗梅毒治疗非口服路径青霉素可用于各期梅毒治疗非口服路径青霉素可用于各期梅毒治疗早早期期梅梅毒毒治治疗疗首首选选240240万万单单位位苄苄星星青青霉霉素素G G单单次次肌肌肉肉注注射射。对对青青霉霉素素过过敏敏者者，替替换换治治疗疗方方案案有有强强力力霉霉素素（口口服服，100mg一一次次，每每日日2次次，连连续续2周）或四环素（口服，周）或四环素（口服，500mg一次，每日一次，每日4次，连续次，连续2周）周）早早期期隐隐性性梅梅毒毒治治疗疗方方案案与与早早期期梅梅毒毒相相同同。晚晚期期隐隐性性梅梅毒毒首首选选治治疗疗方方案案为为每每七七天天一一次次肌肌肉肉注注射射240万万单单位位苄苄星星青青霉霉素素G，连连续续3周周；对对青青霉霉素素过过敏敏者者，替替换换治治疗疗方方案案有有强强力力霉霉素素（口口服服，100mg一一次次，每每日日2次次，连连续续4周）或四环素（口服，周）或四环素（口服，500mg一次，每日一次，每日4次，连续次，连续4周）周）合并合并HIV感染者治疗方案同晚期隐性梅毒感染者治疗方案同晚期隐性梅毒梅梅毒毒瘤瘤性性梅梅毒毒和和心心血血管管梅梅毒毒治治疗疗方方案案与与晚晚期期隐隐性性梅梅毒毒相相同同。神神经经梅梅毒毒治治疗疗只只能能采采取取青青霉霉素素，详详细细方方案案为为静静脉脉注注射射水水溶溶性性青青霉霉素素G（每每4小小时时300万万400万万单单位位，连连续续1014天天）或或肌肌肉肉注注射射普普鲁鲁卡卡因因青青霉霉素素G（240万万单单位位一一天天，连连续续1014天天）同同时时口口服服丙丙磺磺舒舒（500mg一一次次，每每日日4次次，连续连续1014天）天）孕妇治疗只能采取青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治疗孕妇治疗只能采取青霉素，青霉素过敏者需经脱敏后再进行治疗梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第6页页暗视野显微镜检验法暗视野显微镜检验法：主要梅毒病原学诊疗方法。是最特异：主要梅毒病原学诊疗方法。是最特异一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在（须在3周内不一样周内不一样3天采样检测，才能得出阴性结果）。暗天采样检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊疗准确性受操作者经验、病灶中活螺旋体数视野显微镜法诊疗准确性受操作者经验、病灶中活螺旋体数量及口腔、肛门破损处存在非致病性螺旋体等原因影响量及口腔、肛门破损处存在非致病性螺旋体等原因影响镀银染色法镀银染色法：与暗视野检验法临床意义基本相同。利用梅毒：与暗视野检验法临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体含有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再经过普通高螺旋体含有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再经过普通高倍显微镜进行观察倍显微镜进行观察直接免疫荧光法（直接免疫荧光法（DFA)：是当前国外采取较多方法，其特异是当前国外采取较多方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检验法。将特异性抗梅毒螺旋体单性及敏感性均优于暗视野检验法。将特异性抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标识，如标本中存在梅毒螺旋体，则经过克隆抗体用荧光素标识，如标本中存在梅毒螺旋体，则经过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色梅抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其它非致病性或条件致毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其它非致病性或条件致病性螺旋体病性螺旋体梅毒病原学检测（一）梅毒病原学检测（一）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第7页页聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）：PCR能对生殖器溃疡进行早期判别能对生殖器溃疡进行早期判别诊疗，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为诊疗，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为PCR和和RT-PCR。PCR设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和TpN47DNA开放编码区，常见引物有开放编码区，常见引物有K03A、K04、47-1、47-2、47-3、47-4等。因为在等。因为在PCR中会偶然出现非特异中会偶然出现非特异PCR产物产物而干扰结果，这就必须用特异性而干扰结果，这就必须用特异性DNA探针进行探针进行DNA-DNA杂杂交来提升交来提升PCR特异性及敏感性。另外，因为特异性及敏感性。另外，因为TpN47保守性，保守性，雅司螺旋体可产生类似雅司螺旋体可产生类似PCR产物，所以这种设计产物，所以这种设计PCR不能区不能区分梅毒和雅司；但能够区分梅毒螺旋体和引博氏疏螺旋体，分梅毒和雅司；但能够区分梅毒螺旋体和引博氏疏螺旋体，这就能够处理梅毒与莱姆病之间血清诊疗中免疫交叉问题。这就能够处理梅毒与莱姆病之间血清诊疗中免疫交叉问题。另一个是另一个是RT-PCR，常见设计是针对梅毒螺旋体，常见设计是针对梅毒螺旋体16s rRNA 366bp片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。PCR在梅毒连续感染中诊疗价值当前尚无一致意见，理论上在梅毒连续感染中诊疗价值当前尚无一致意见，理论上PCR可查出死亡可查出死亡TP，所以治疗后，所以治疗后PCR阳性并不意味着治疗失阳性并不意味着治疗失败，但死亡败，但死亡TP从机体内去除较快（从机体内去除较快（1530天），而存活天），而存活TP从从机体内去除最少需机体内去除最少需120天，所以治疗数周后天，所以治疗数周后PCR阳性意味着连阳性意味着连续感染可能续感染可能。另外，也有将。另外，也有将PCR用于产前诊疗和神经梅毒诊用于产前诊疗和神经梅毒诊疗报道疗报道 梅毒病原学检测（二）梅毒病原学检测（二）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第8页页人人类类对对梅梅毒毒无无先先天天免免疫疫性性，尚尚无无疫疫苗苗接接种种进进行行人人工工免免疫疫，仅仅能能在在受受感感染染后后产产生生感感染染性性免免疫疫。已已完完全全治治愈早期梅毒患者仍能够再感染愈早期梅毒患者仍能够再感染感感染染梅梅毒毒后后，首首先先产产生生IgM型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，感感染染2周周后后即即可可测测出出，早早期期梅梅毒毒抗抗梅梅治治疗疗39个个月月后后或或晚晚期期梅梅毒毒治治疗疗2年年后后，大大部部分分病病人人IgM可可转转阴阴性性，再再感感染染时时又又出出现现阳阳性性，故故IgM型型抗抗体体存存在在是是活活动动性性梅梅毒毒表现表现感感染染梅梅毒毒4周周左左右右产产生生IgG型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，即即使使经经足足量量抗抗梅梅治治疗疗，梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原消消失失后后很很长长时时间间，IgG抗抗体体仍仍可可经经过过记记忆忆细细胞胞作作用用继继续续产产生生，甚甚至至终生在血清中可测出终生在血清中可测出梅毒免疫性（一）梅毒免疫性（一）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第9页页梅毒免疫性（二）梅毒免疫性（二）另另一一个个含含有有抗抗体体性性质质物物质质叫叫反反应应素素（reagin），是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出一一个个抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生抗抗体体。反反应应素素普普通通在在感感染染后后57周周（或或下下疳疳出出现现后后23周周）产产生生。经经正正规规治治疗疗后可逐步消失后可逐步消失胎胎儿儿在在宫宫内内感感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体后后，胚胚胎胎晚晚期期（69个个月月）已已能能合合成成IgM型型抗抗体体，出出生生后后第第3个个月月开开始始形形成成IgG型型抗抗体体；IgM抗抗体体不不能能经经过过胎胎盘盘，而而IgG抗抗体体能能经经过过胎胎盘盘，如如在在患患儿儿血血清清中中检检侧侧出出IgM抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体是是诊诊疗疗先先天天性性梅梅毒毒有有力力证证据据（但但IgM阴阴性并不能排除先天性梅毒）性并不能排除先天性梅毒）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第10页页NTrAT非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检验血清中反应素，用于初筛试脂及胆固醇作为抗原检验血清中反应素，用于初筛试验及疗效观察。能够分为以下四种验及疗效观察。能够分为以下四种试验试验，原理基本相，原理基本相同同 1、性病研究试验室玻片试验（、性病研究试验室玻片试验（VDRL)：试剂需现配现用，：试剂需现配现用，且要在显微镜下观察结果，故国内试验室极少采取。且要在显微镜下观察结果，故国内试验室极少采取。但但VDRL是诊疗神经性梅毒最特异血清学方法是诊疗神经性梅毒最特异血清学方法 2、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USR)：试剂无需现配现用，：试剂无需现配现用，但仍要在显微镜下观察结果，现已极少使用但仍要在显微镜下观察结果，现已极少使用 3、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)：在特制纸片上：在特制纸片上进行，加入一定量特制炭粉，可使抗原抗体出现凝集，进行，加入一定量特制炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果用肉眼可观察结果 4、甲苯胺红不加热试验（、甲苯胺红不加热试验（TRUST)：在试剂中以红色甲：在试剂中以红色甲苯胺红颗粒代替黑色炭粉颗粒，使结果更易于观察苯胺红颗粒代替黑色炭粉颗粒，使结果更易于观察 非特异性梅毒血清学试验（一）非特异性梅毒血清学试验（一）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第11页页非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验缺点缺点 1、特异性：在各种疾病，如急性病毒性感染、本身免疫性疾病、特异性：在各种疾病，如急性病毒性感染、本身免疫性疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以这类试验有时会出现假阳性反应可出现反应素，所以这类试验有时会出现假阳性反应 2、敏感性：感染梅毒后反应素出现时间晚于特异性梅毒螺旋体、敏感性：感染梅毒后反应素出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，所以非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒漏检率较抗体，所以非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒漏检率较高。高。RPR或或TRUST有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引发性结果，则为抗体过量引发“钩状效应钩状效应”，12二期梅毒病二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。另外，晚期梅毒反应素人可出现此现象而发生假阴性反应。另外，晚期梅毒反应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，所以用转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，所以用这类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量漏检这类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验优点优点 1、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性患者往往是梅毒现症感染者，非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗临床上即可开展治疗 2、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功治疗而逐步下非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功治疗而逐步下降，故能够作为疗效观察指标降，故能够作为疗效观察指标 3、这类方法价格低廉、这类方法价格低廉非特异性梅毒血清学试验（二）非特异性梅毒血清学试验（二）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第12页页测定非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度测定非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度进行疗效观察进行疗效观察 1、治疗成功：治疗成功：早期梅毒患者在治疗后早期梅毒患者在治疗后6个月内症状消失且个月内症状消失且非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有最少非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有最少4倍下降。晚期梅倍下降。晚期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后毒或隐性梅毒患者在治疗后1224个月内非梅毒螺旋体个月内非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有最少抗原血清试验滴度有最少4倍下降倍下降 2、治疗失败：治疗失败：治疗后症状连续或重新出现；治疗后非梅毒治疗后症状连续或重新出现；治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了4倍或以上；非梅毒倍或以上；非梅毒螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（1:32或以上）但在或以上）但在六个月内没有到达六个月内没有到达4倍下降。抗梅毒治疗失败病人应考虑倍下降。抗梅毒治疗失败病人应考虑合并合并HIV感染及神经梅毒可能性感染及神经梅毒可能性 3、血清固定：血清固定：经正规治疗后，梅毒患者经正规治疗后，梅毒患者非梅毒螺旋体抗原非梅毒螺旋体抗原血清试验普通都会转为阴性，但有血清试验普通都会转为阴性，但有13%病人即使经足病人即使经足量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍连续呈量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍连续呈低滴度阳性，这种现象称为血清固定，其原因尚不明了。低滴度阳性，这种现象称为血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者滴度重又上升则提醒再次感染梅毒血清固定患者滴度重又上升则提醒再次感染梅毒非特异性梅毒血清学试验（三）非特异性梅毒血清学试验（三）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第13页页TrAT梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中抗螺旋体抗原检测血清中抗螺旋体IgM和和/或或IgG抗体，其抗体，其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察指标。惯用有以下五种验，但不能用作疗效观察指标。惯用有以下五种方法：方法：1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)2、梅毒螺旋体血球凝集试验（、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）5、梅毒螺旋体化学发光免疫测定（、梅毒螺旋体化学发光免疫测定（TP-CLIA)6、梅毒螺旋体快速诊疗试验（、梅毒螺旋体快速诊疗试验（TP-RT）特异性梅毒血清学试验（一）特异性梅毒血清学试验（一）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第14页页荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)FTA-ABS是全部螺旋体试验中最敏感方法，特异性也很是全部螺旋体试验中最敏感方法，特异性也很高，被认为是检测梅毒高，被认为是检测梅毒“金标准金标准”。且该试验可分开检测。且该试验可分开检测IgM和和IgG 不过，该方法在技术操作上也是最困难，试验操作以及不过，该方法在技术操作上也是最困难，试验操作以及结果判读都必须加以核实。试验可靠性关键是标准化结果结果判读都必须加以核实。试验可靠性关键是标准化结果判断、高质量荧光标识抗体以及适当稀释度。因为试验室判断、高质量荧光标识抗体以及适当稀释度。因为试验室操作繁琐以及主观判读经常产生错误结果，所以增加标识操作繁琐以及主观判读经常产生错误结果，所以增加标识荧光标识染料复染能够减低标准化过程中错误并增加其可荧光标识染料复染能够减低标准化过程中错误并增加其可读性及重复性读性及重复性 因为该试验需有优质荧光显微镜和技术熟练操作人员才因为该试验需有优质荧光显微镜和技术熟练操作人员才能得到准确结果，故常不被临床试验室作为常规方法开展能得到准确结果，故常不被临床试验室作为常规方法开展 特异性梅毒血清学试验（二）特异性梅毒血清学试验（二）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第15页页 梅毒螺旋体血球凝集试验（梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）原理：原理：用超声裂解梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、用超声裂解梅毒螺旋体为抗原，致敏经醛化、鞣化羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清鞣化羊或禽类红细胞，此致敏红细胞与人血清 或血浆中梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观或血浆中梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可观 察凝集反应察凝集反应优点：该方法比优点：该方法比FTA-ABS易操作且稳定性好，它敏感易操作且稳定性好，它敏感 性除早期梅毒外与性除早期梅毒外与FTA-ABS相同，对大样本进行相同，对大样本进行 批量检测时，批量检测时，TPHA也比也比FTA-ABS易操作易操作不足：因为红细胞含有生物活性，可能产生非特异性凝不足：因为红细胞含有生物活性，可能产生非特异性凝 集，且保留时间较短，批间差较大，故实际使用中集，且保留时间较短，批间差较大，故实际使用中 也存在一些问题也存在一些问题特异性梅毒血清学试验（三）特异性梅毒血清学试验（三）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第16页页 梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）原理：原理：TPPA原理与原理与TPHA基本相同，但它以人工合基本相同，但它以人工合 成惰性明胶颗粒代替成惰性明胶颗粒代替TPHA中红细胞作为载中红细胞作为载 体，是体，是TPHA升级产品升级产品 优点：优点：1、试剂稳定，批间差小试剂稳定，批间差小 2、结果判读更为清楚明确结果判读更为清楚明确 3、敏感性和特异性较敏感性和特异性较TPHA深入提升深入提升 不足：较难实现自动化，结果判定主观不足：较难实现自动化，结果判定主观特异性梅毒血清学试验（四）特异性梅毒血清学试验（四）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第17页页梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检 血清以及酶标识抗原，形成双抗原夹心，同时检血清以及酶标识抗原，形成双抗原夹心，同时检 测测 IgG和和IgM抗体。少数试剂采取间接法，使用抗体。少数试剂采取间接法，使用 酶标识抗人酶标识抗人IgG或或IgM，分开检测，分开检测IgG或或IgM 优点：优点：1、敏感性和特异性较高、敏感性和特异性较高 2、价格较低，适合于对大量样品筛查、价格较低，适合于对大量样品筛查 3、可实现操作自动化、客观化、可实现操作自动化、客观化 不足：不足：ELISA试剂盒品牌众多，各家采取抗原和工艺试剂盒品牌众多，各家采取抗原和工艺 不一样，使敏感性和特异性产生较大差异，临床不一样，使敏感性和特异性产生较大差异，临床 试验室在选取试验室在选取ELISA试剂前应认真进行评定试剂前应认真进行评定 特异性梅毒血清学试验（五）特异性梅毒血清学试验（五）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第18页页酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验检测梅毒螺旋体IgM抗体抗体 原理：原理：ELISA间接法或捕捉法，以捕捉法敏感性和特间接法或捕捉法，以捕捉法敏感性和特 异性为佳。因为血液中异性为佳。因为血液中 IgG 量大大高于量大大高于 IgM，为防止交叉反应所引发假阳性，普通须对样本为防止交叉反应所引发假阳性，普通须对样本 进行预处理，先去除其中进行预处理，先去除其中 IgG 然后再进行然后再进行IgM 测定。分离去除测定。分离去除 IgG 惯用方法为柱层析法或免惯用方法为柱层析法或免 疫沉淀法（沉淀剂为抗人疫沉淀法（沉淀剂为抗人IgG等）等）用途：用途：1、先天性梅毒诊疗、先天性梅毒诊疗 2、活动性梅毒（新近感染）诊疗及疗效观察、活动性梅毒（新近感染）诊疗及疗效观察 3、梅毒再感染诊疗、梅毒再感染诊疗 结果解释：结果解释：IgM阳性是先天性梅毒或活动性梅毒主要证阳性是先天性梅毒或活动性梅毒主要证 据，但阴性结果并不能排除感染可能性据，但阴性结果并不能排除感染可能性 特异性梅毒血清学试验（六）特异性梅毒血清学试验（六）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第19页页梅毒螺旋体化学发光免疫测定（梅毒螺旋体化学发光免疫测定（TP-CLIA）原理：当前以微孔板式化学发光免疫测定最为常见，其原原理：当前以微孔板式化学发光免疫测定最为常见，其原理与理与ELISA方法基本相同，只是以化学发光底物取方法基本相同，只是以化学发光底物取代了发色底物，检测信号则由光密度（代了发色底物，检测信号则由光密度（A值）变为值）变为光子数光子数 优点：较之优点：较之ELISA方法，其分析方法，其分析敏感性更低，可汇报范围敏感性更低，可汇报范围更宽更宽 不足：与不足：与ELISA试剂盒不足基本相同试剂盒不足基本相同特异性梅毒血清学试验（七）特异性梅毒血清学试验（七）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第20页页梅毒螺旋体快速检测试验梅毒螺旋体快速检测试验（TP-RT）原理：双抗原夹心免疫层析试验或间接法免疫渗滤试验，原理：双抗原夹心免疫层析试验或间接法免疫渗滤试验，多采取胶体金进行标识，同时检测多采取胶体金进行标识，同时检测IgG、IgM抗体抗体 （双抗原夹心法）或单测（双抗原夹心法）或单测IgG抗体（间接法）抗体（间接法）优点：优点：1、简便、快速，不需要特殊仪器、简便、快速，不需要特殊仪器 2、适合于单人份操作，可用于较紧急和试验室条、适合于单人份操作，可用于较紧急和试验室条 件差场所件差场所 不足：不足：1、临床评定资料不多，敏感性、特异性还有待进、临床评定资料不多，敏感性、特异性还有待进 一步考查一步考查 2、无法实现自动化，结果判断主观、无法实现自动化，结果判断主观 3、测定结果受温度和时间影响较大、测定结果受温度和时间影响较大 4、价格较高、价格较高特异性梅毒血清学试验（八）特异性梅毒血清学试验（八）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第21页页免疫印迹试验免疫印迹试验梅毒免疫印迹试验（梅毒免疫印迹试验（Western blot）与作为）与作为HIV抗体抗体确认免疫印迹试验采取相同原理和技术确认免疫印迹试验采取相同原理和技术既可检测既可检测IgG抗体，也可检测抗体，也可检测IgM抗体抗体当前已经有商品化试剂盒供给，但价格高昂当前已经有商品化试剂盒供给，但价格高昂检测特异性梅毒抗体条带，其分子量分别为检测特异性梅毒抗体条带，其分子量分别为15.5、17、45.5和和47kd梅毒梅毒IgG免疫印迹试验敏感性和特异性均可到达甚至免疫印迹试验敏感性和特异性均可到达甚至超出超出FTA-ABS水平水平有文件报道，梅毒有文件报道，梅毒IgM免疫印迹试验对先天性梅毒诊免疫印迹试验对先天性梅毒诊疗可能很有意义，其特异性最少到达疗可能很有意义，其特异性最少到达90%，而敏感性，而敏感性达达83%以上，高于以上，高于FTA-ABS 19S IgM 73%水平水平梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第22页页方法学比较方法学比较n1.非螺旋体抗体试验（非螺旋体抗体试验（NtrAT）这类方法敏感性高，其抗体滴度与病这类方法敏感性高，其抗体滴度与病变活动性相关，病灶出现后变活动性相关，病灶出现后1-2周就可测出反应素，周就可测出反应素，期梅毒阳性率约为期梅毒阳性率约为70%，期梅毒阳性率可达期梅毒阳性率可达100%，期梅毒阳性率较低，先天性梅毒期梅毒阳性率较低，先天性梅毒阳性率可达阳性率可达80%-100%，但这类试验特异性不高，常有假阳性反应。所，但这类试验特异性不高，常有假阳性反应。所以，在分析结果时应结合病史和临床症状，并做密螺旋体抗原试验加以确以，在分析结果时应结合病史和临床症状，并做密螺旋体抗原试验加以确诊。诊。n2.密螺旋体抗体试验（密螺旋体抗体试验（TrAT）n1）TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）（梅毒螺旋体血凝试验）是一个间接血凝试验，以是一个间接血凝试验，以SRBC为载为载体，将梅毒螺旋体体，将梅毒螺旋体Nichols株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏SRBC，加入待检病人血清作间接血凝试验，含有敏感性高，快速，简便，加入待检病人血清作间接血凝试验，含有敏感性高，快速，简便，易于观察等特点。易于观察等特点。n2）TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与TPHA基本相同。基本相同。n3）WB（免疫印迹试验）（免疫印迹试验）是分子水平试验，本法综合了是分子水平试验，本法综合了SDS-PAGE高分高分辩力和辩力和ELISA高特异性和敏感性，对梅毒确实诊，尤其对早期梅毒确实诊高特异性和敏感性，对梅毒确实诊，尤其对早期梅毒确实诊含有特殊价值，对二期，三期梅毒诊疗率很高。含有特殊价值，对二期，三期梅毒诊疗率很高。n4）FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高，是法敏感性和特异性均高，是期，期，期梅毒首先出现阳性反应血清学试验，期梅毒首先出现阳性反应血清学试验，且病人经药品治疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。且病人经药品治疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。n密螺旋体抗原试验特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，密螺旋体抗原试验特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，也可有也可有1%生物学假阳性存在。所以，这些试验结果判定，仍需结合临床生物学假阳性存在。所以，这些试验结果判定，仍需结合临床资料来分析。资料来分析。梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第23页页梅毒血清学试验假阳性原因原因原因非密螺旋体非密螺旋体抗体试验抗体试验(NTrAT)密螺旋体密螺旋体抗体试验抗体试验(TrAT)n本身免疫病n疟疾n新近免疫接种n皮肤病n心血管病n结核n麻风n静脉注射毒品n病毒感染n热性病n妊娠nHIV感染n其它性传输病n老年人n屡次输血n莱娒病n地方性密螺旋体病n原因不明n技术误差梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第24页页非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评定结果非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评定结果试剂名称试剂名称生产厂家生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性RPR上海科华n062097.2%93.4%TRUST上海荣盛n050195.4%95.1%TRUST兰州生物所n020192.2%96.2%TRUST厦门英科新创n06760297.2%93.4%TRUST郑州安图绿科n050987.1%94.4%TRUST北京万泰MZ007030184.3%92.0%参比试剂：参比试剂：美国美国BD企企业业生生产产RPR试剂试剂盒（批号盒（批号8095883）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第25页页梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂(ELISA)评评定定结结果果试剂名称试剂名称生产厂家生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性ELISA-TP珠海丽珠试剂n061899.6%99.6%ELISA-TP厦门英科新创n07750699.6%98.3%ELISA-TP北京华大吉比爱n091299.6%97.1%ELISA-TP北京万泰nN060699.2%99.6%ELISA-TPn北京当代高达n0600398.9%99.6%ELISA-TP北京金豪n0707698.9%98.3%ELISA-TP上海科华n071497.7%93.8%参比试剂：参比试剂：日本富士日本富士企企业业生生产产TPPA试剂试剂盒（批号盒（批号VN80807）+免疫印迹法（批号免疫印迹法（批号D081009A1）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第26页页梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂(快速法快速法)评评定定结结果果试剂名称试剂名称生产厂家生产厂家生产批号生产批号敏感性敏感性特异性特异性快速(胶体金)北京万泰n0080398.1%96.3%快速(胶体金)厦门英科新创02712270295.8%93.8%快速(胶体金)韩国SD02503591.6%99.2%快速(胶体金)杭州艾康n1021687.8%100%参比试剂：参比试剂：日本富士日本富士企企业业生生产产TPPA试剂试剂盒（批号盒（批号VN80807）+免疫印迹法（批号免疫印迹法（批号D081009A1）梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第27页页关于梅毒血清学试验程序探讨（一）关于梅毒血清学试验程序探讨（一）先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR、TRUST等）等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TPHA、ELISA等）进行确认等）进行确认 优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使梅优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使梅 毒检测成本能够保持在低水平毒检测成本能够保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验敏感性较差，缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验敏感性较差，造成临床上易出现漏检情况造成临床上易出现漏检情况同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗同时进行梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清试验原血清试验 优点：这是从技术上而言最正确方案优点：这是从技术上而言最正确方案 缺点：人力和试剂成本较高缺点：人力和试剂成本较高先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时再进行非梅毒螺旋体抗原血清试验毒螺旋体抗原血清试验梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第28页页关于梅毒血清学试验程序探讨（二）关于梅毒血清学试验程序探讨（二）TrAT梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA等）等）（-）阴性汇报阴性汇报（+）NtrAT非梅毒螺旋体抗原血清试验（非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR等）等）（+）现症梅毒现症梅毒抗梅治疗，疗效观察抗梅治疗，疗效观察（-）问询梅毒既往感染和治疗史问询梅毒既往感染和治疗史（有）（有）既往感染既往感染（无）（无）随访或抗梅治疗随访或抗梅治疗梅毒实验检测及诊断梅毒实验检测及诊断第第29页页关于梅毒血清学试验程序探讨（三）关于梅毒血清学试验程序探讨（三）一些适合使用梅毒