水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离.pptx

试验三试验三 水中细菌总数测定和土壤微生水中细菌总数测定和土壤微生物分离物分离水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第1页一一 试验目标试验目标n1.1.学习水样采取方法和水样细菌总数测学习水样采取方法和水样细菌总数测定方法；定方法；n2.2.了解水源水平板菌落计数标准了解水源水平板菌落计数标准。（一）水中细菌总数测定水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第2页二二.试验原理：试验原理：n本试验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。n因为水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件要求差异很大，不可能找到一个培养基在一个条件下，使水中全部细菌均能生长繁殖，所以，以一定培养基平板上生长出来菌落，计算出水中细菌总数仅是一个近似值。n当前普通是采取肉膏蛋白胨琼脂培养基。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第3页n本试验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采取平板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中细菌总数。1-71-7组河水，组河水，8-108-10组自来水组自来水水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第4页三、试验操作三、试验操作1.水体取样：n 应取距水面1015cm深层水样。先将灭菌带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水马上流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出。2.自来水取样：n 打开自来水龙头，让水流流出1min左右，用烧杯接取自来水。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第5页n3.3.将河水水样分别稀释成将河水水样分别稀释成1010-1-1、1010-2-2、1010-3-3三个连续三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。自来水样不稀释。注意：河水样稀释，取注意：河水样稀释，取1 1个灭菌空试管，加入个灭菌空试管，加入9mL9mL灭灭菌水。用取过灭菌水移液管取菌水。用取过灭菌水移液管取1mL1mL河水样，放入试管河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。中，振荡试管混合均匀。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第6页n4.4.涂布平板法：涂布平板法：n1 1）加热已经配制好固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），）加热已经配制好固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。使固体培养基溶化。n2 2）倒制平板：每个空平皿中倒约）倒制平板：每个空平皿中倒约20mL20mL培养基，放置桌面待培养基，放置桌面待其凝固。其凝固。n3 3）用移液管吸收）用移液管吸收0.1mL0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷于酒精灯外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水滴均匀涂满整个平板表面，尽可能却，然后用涂布棒将水滴均匀涂满整个平板表面，尽可能将水涂干。将水涂干。n5.5.倒置于倒置于3737培养箱中培养培养箱中培养24h24h。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第7页水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第8页水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第9页n6.6.菌落计数：菌落计数：1 1）挑取无片状菌苔生长平板作为计数平板，若片状菌苔）挑取无片状菌苔生长平板作为计数平板，若片状菌苔大小不到平板二分之一，而其余二分之一菌落分布很均大小不到平板二分之一，而其余二分之一菌落分布很均匀时，可将此二分之一菌落数乘匀时，可将此二分之一菌落数乘2 2以代表全平板菌落数。以代表全平板菌落数。2 2）选择平均菌落数在）选择平均菌落数在3030300300之间平板来计算该水样菌落之间平板来计算该水样菌落总数。假如全部平板菌落总数都不在总数。假如全部平板菌落总数都不在3030030300范围之内，范围之内，则取最靠近则取最靠近3030030300平板进行计数平板进行计数3 3）假如有两个稀释浓度总菌落数落在了假如有两个稀释浓度总菌落数落在了3030030300范围之范围之内，则先计算两个浓度下每内，则先计算两个浓度下每mlml水体中细菌总数，假如两水体中细菌总数，假如两个数值比值大于个数值比值大于2 2则取小浓度，如若小于则取小浓度，如若小于2 2则取两值平均则取两值平均值。值。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第10页（二）土壤微生物分离、培养（二）土壤微生物分离、培养一、试验目标一、试验目标 掌握微生物分离纯化基本操作技术掌握微生物分离纯化基本操作技术二、试验原理二、试验原理 从混杂微生物群体中取得只含某一个或某一株从混杂微生物群体中取得只含某一个或某一株微生物过程称为微生物分离与纯化。惯用平板分离法：微生物过程称为微生物分离与纯化。惯用平板分离法：包含两个方面：包含两个方面：1 1、选取适当培养基、选取适当培养基 2 2、挑取单菌落、挑取单菌落 水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第11页三、试验操作三、试验操作1 1、倒平板、倒平板 将营养琼脂培养基、高氏将营养琼脂培养基、高氏1 1号琼脂培养基、号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基，加热溶化，待冷至马丁氏琼脂培养基，加热溶化，待冷至55-6055-60时，马丁培养基中加时，马丁培养基中加链霉素链霉素（终浓度为（终浓度为3030g/mlg/ml），混匀后倒平板。），混匀后倒平板。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第12页2 2、制备土壤稀释液制备土壤稀释液 称取土壤称取土壤10g10g，放入盛有，放入盛有90ml90ml无菌水中，猛无菌水中，猛烈震荡烈震荡20min20min，充分混合。用无菌吸管吸收，充分混合。用无菌吸管吸收1ml1ml土壤悬液加入土壤悬液加入9ml9ml无菌水中，混匀，以这类推，无菌水中，混匀，以这类推，制备成制备成1010-1-1，1010-2-2，1010-3-3，1010-4-4，1010-5-5，1010-6-6不一不一样稀释度土壤溶液。样稀释度土壤溶液。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第13页3 3、涂平板、涂平板 将上述每种培养基三个平板底面分别用记号笔写将上述每种培养基三个平板底面分别用记号笔写上上1010-4-4，1010-5-5，1010-6-6种稀释度，再用无菌吸管分别种稀释度，再用无菌吸管分别吸收吸收1010-4-4，1010-5-5，1010-6-6种稀释度土壤稀释液种稀释度土壤稀释液0.1ml0.1ml，用无菌涂布棒涂布均匀后，静置用无菌涂布棒涂布均匀后，静置5-10min5-10min。（若平（若平板数量不足，板数量不足，降低降低1010-6-6稀释度平板）稀释度平板）水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第14页4 4、培养、培养 将高氏将高氏1 1号培养基平板和马丁氏培养号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于基平板倒置于28 28 恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养3-5d3-5d，营养琼脂培养基平板倒置于，营养琼脂培养基平板倒置于37 37 恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养2-3d2-3d。水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第15页水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第16页5 5、菌落形态观察、菌落形态观察 、（计数）、（计数）6 6、染色判定可疑菌落（细菌、放线菌、霉菌）、染色判定可疑菌落（细菌、放线菌、霉菌）（下次试验作）（下次试验作）水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第17页思索题：思索题：为何马丁培养基中要加入链霉素？假如用牛肉为何马丁培养基中要加入链霉素？假如用牛肉膏蛋白胨培养基分离一个对青霉素含有抗性细膏蛋白胨培养基分离一个对青霉素含有抗性细菌，你认为应怎样做？菌，你认为应怎样做？水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离第18页