DB43_T 2584-2023玉竹组织培养育苗技术规程.docx

ICS11.120.01CCSB3843湖南省地方标准DB 43/T 25842023玉竹组织培养育苗技术规程Code of practice for propogation via tissue culture of Polygonatum odoratum (Mill) Deuce2023 - 04 - 10 发布2023 - 07 - 10 实施湖南省市场监督管理局发 布目次前言III1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 组培室消毒处理15 外植体采集16 外植体处理17 培养基制备28 组织培养29 移栽210 出苗312 档案管理3附录A（资料性） 组织培养配方5附录B（资料性） 生产档案611 包装、标志、运输3前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南农业大学、湖南岳麓山中药材种业中心创新中心有限公司、湖南省农业环境生态研究所、湖南莱切诺生物科技有限公司。本文件主要起草人：曾建国、谢进、南小航、杨华、孙梦姗、周利、谢红旗、邹剑锋、宋荣、蔡柳、杨子墨、谭晖、向维。玉竹组织培养育苗技术规程1 范围本文件规定了玉竹组织培养育苗过程中组培室消毒处理、外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装运输、档案管理等技术要求。本文件适用于湖南省玉竹组织培养育苗。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB 4285农药安全使用标准GB/T 8321农药合理使用准则（所有部分） LY/T 1882林木组织培养育苗技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。玉 竹 PolygonatumcyrtonemaHua百合科黄精属的多年生草本植物。根状茎圆柱形，叶互生，椭圆形至卵状矩圆形，花期5-6月，果期7-9月。4 组培室消毒处理组培室用稀释1000 倍的84消毒液或 75%乙醇喷洒洗涤组培室地面，保持室内清洁。超净工作台用紫外灯照射 30min，随后关闭紫外灯通风 20min 以上，用湿拖把轻轻打扫超净工作台四周，降低尘埃， 接着用 75乙醇擦拭台面操作区域。5 外植体采集取无病害，无腐烂，根系发达的玉竹根状茎健壮芽头，在芽点以下2 cm3 cm处，用解剖刀切下。6 外植体处理清洗放入器皿中用洗衣粉等清洁剂清洗后用自来水流水冲洗1 h2 h。消毒清洗好的外植体转入超净工作台进行操作，将芽块放入灭菌后的烧杯内，用75%酒精清洗30 s，无菌水冲洗3次5次，1.0%次氯酸钠溶液浸泡20min305 min，最后用无菌水冲洗5次6次。7 培养基制备 培养基配方初代培养基、继代培养基、生根培养基的配方见附录A。 培养基配置、灭菌与保存参照LY/T 1882执行。8 组织培养 培养条件培养室培养温度为 252，光照时间 12 h/d，光照强度1500 lx2000 lx。 初代培养玉竹茎块灭菌后在接种盘中切掉芽块下部，只留取0.5 cm1 cm大小的芽点，迅速接种到诱导培养基中，培养时间30 d50 d，分化产生4 个6 个丛生芽时，转入继代培养基中进行培养。继代培养切取其丛生芽转入增殖培养基中进行增殖培养，反复接种继代培养4次5次后，转入生根培养基中进行生根培养。继代培养的时间以30 d45 d为宜，增殖率为4倍7倍，继代次数不超过15次。生根培养将诱导形成的大小相近的继代苗，在超净工作台上切割为单株，接种到生根培养基中培养，培养25d-30 d，当根系铺满培养瓶底部即进行炼苗移栽。炼苗8.5.1 炼苗标准当试管苗拥有1个以上的健壮根状茎，生长4条5条根时，可进行炼苗处理。8.5.2 驯化将装试管苗的培养瓶从培养架上取下，转移到2025温室中，自然散射光下炼苗，封口炼苗3 d5 d，开瓶炼苗1 d2 d后即可移栽。9 移 栽容器选用穴盘或底部有孔的育苗盘。 基质珍珠岩、蛭石、泥炭土体积比为1:2:3。 方法取出生根苗，自来水冲洗干净根部培养基，用1000 倍甲基托布津或多菌灵溶液浸泡根部 5min 8 min，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再移栽入已准备好的基质中。移栽前将基质浇透水，移栽完成后浇定根水。 苗期管理9.4.1 大棚环境移栽初期温度保持在 1825，湿度 8590，基质含水量 7080，适当遮荫，2 周后转入正常管理，空气湿度在 75%85%之间，定期浇水，保持基质湿度为30%50%。9.4.2 追肥新叶长出后，每隔15 d20 d用氮磷钾（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍800倍溶液浇苗1次。9.4.3 病害管理对苗期病害以预防为主，综合防治。施用农药应符合GB 4285和GB/T 8321（所有部分）的规定。10 出 苗当组培苗根状茎长3cm以上，重量在5 g10 g以上时可以出苗。11 包装、标志、运输包装采用干燥、清洁、无异味、的材料，外包装应用纸箱。标志每箱应贴上标签，注明品种、数量、产地、出苗日期等。运输运输过程以避免日晒、雨淋，高温和严寒，温度控制在5 25 ，防倒置。12 档案管理 内容玉竹组织培养育苗培育过程中外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装等内容，应逐项如实记载，记载表格见附录B。 保存档案采用纸质档案和电子档案2种方式保存，保存时间3年。A A附 录 A（资料性） 组织培养配方表A.1 玉竹组织培养育苗培养基配方初代培养基继代培养基生根培养基培养基成分类别培养基成分mg/Lmg/Lmg/LNH4N0316501650825KNO319001900950大量元素MgS04 7H20370370185KH2PO417017085CaCl2 2H2 0440440220FeS03 7H2 027.827.827.8铁盐Na2-EDTA37.337.337.3MnS04 4H2022.322.322.3ZnS04 7H208.68.68.6CuS04 5H200.0250.0250.025微量元素Na2Mo04 2H200.250.250.25CoC12 6H200.0250.0250.025KI0.830.830.83H3BO36.26.26.2烟酸0.50.50.5盐酸硫胺素0.10.10.1有机营养成分盐酸吡哆醇0.50.50.5甘氨酸2.02.02.0肌醇100100100防褐变剂抗坏血酸101010植物生长调节剂6-苄氨基嘌呤（6-BA）2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D） 吲哚丁酸(IBA)萘乙酸（NAA）/1/ 0.5/ 0.2糖蔗糖30 00030 00030 000凝固剂琼脂5 0005 0005 000pH值5.85.85.8B B附 录 B（资料性） 生产档案表B.1 玉竹组织培养育苗生产档案记载编号：记录人：日期： 序号诱导培养接种时期增殖培养接种时期生根培养接种时期炼苗时期移栽时期追肥记录农药使用记录出苗时间包装12345.