糖连接位置的测定.pptx

（四）糖连接位置测定（四）糖连接位置测定1 1、化学方法：多采取甲基化法、化学方法：多采取甲基化法 首先将糖链全甲基化，然后水解全部苷首先将糖链全甲基化，然后水解全部苷键，用气相色谱法对水解产物键，用气相色谱法对水解产物甲基化单糖甲基化单糖进行定性和定量分析。进行定性和定量分析。定性分析：需要选择各种单糖标准品定性分析：需要选择各种单糖标准品 计计算算各各甲甲基基化化产产物物相相互互之之间间百百分分比比，推推测测糖糖 链重复单位中各种单糖数目链重复单位中各种单糖数目 糖连接位置的测定1/45（四）糖连接位置测定（四）糖连接位置测定1 1、化学方法：多采取甲基化法、化学方法：多采取甲基化法 首先将糖链全甲基化，然后水解全部苷首先将糖链全甲基化，然后水解全部苷键，用气相色谱法对水解产物键，用气相色谱法对水解产物甲基化单糖甲基化单糖进行定性和定量分析。进行定性和定量分析。定性分析：需要选择各种单糖标准品定性分析：需要选择各种单糖标准品 计计算算各各甲甲基基化化产产物物相相互互之之间间百百分分比比，推推测测糖糖 链重复单位中各种单糖数目链重复单位中各种单糖数目 糖连接位置的测定2/45全甲基化全甲基化水解水解糖连接位置的测定3/452 2、NMRNMR谱法谱法 1313CNMRCNMR谱谱法法：是是当当前前用用来来确确定定糖糖连连接接 位置惯用方法位置惯用方法 该该法法是是在在归归属属各各碳碳信信号号基基础础上上，以以游游离离苷苷元元和和甲甲基基糖糖苷苷作作为为参参考考化化合合物物，确确定定产产生生苷苷化化位位移移碳碳，然然后后利利用用苷苷化化位位移移规规则则，即即可可方方便地获知各单糖连接位置。便地获知各单糖连接位置。糖连接位置的测定4/45 1 1HNMRHNMR谱法：谱法：首先是使糖与苷先乙酰化，接着比较不一样首先是使糖与苷先乙酰化，接着比较不一样 类型质子化学位移值。类型质子化学位移值。比如：比如：CHOAcCHOAc中中CHCH质子化学位移为质子化学位移为 4.755.4 ppm;4.755.4 ppm;而而CHCH2 2OAcOAc、CHCH2 2OROR中质中质子子 化学位移在化学位移在3.04.3ppm3.04.3ppm；端基质子化学位移；端基质子化学位移介于这二者之间。介于这二者之间。最终经过最终经过2D-NMR2D-NMR就可判定质子归属，就可判定质子归属，从而得出糖连接位点。从而得出糖连接位点。糖连接位置的测定5/45（五）糖链连接次序决定（五）糖链连接次序决定 1 1、经典方法：部分水解法、经典方法：部分水解法 过程：过程：多糖多糖 部分水解部分水解 低聚糖低聚糖 分析低聚糖连接次序分析低聚糖连接次序 推测糖链连接次序推测糖链连接次序2 2、驰豫时间法、驰豫时间法 基本原理：外侧糖自旋晶格驰豫时间基本原理：外侧糖自旋晶格驰豫时间T T1 1比内侧大，同一糖上各碳自旋晶格驰豫时间比内侧大，同一糖上各碳自旋晶格驰豫时间T T1 1则基本相同。则基本相同。糖连接位置的测定6/45 3 3、质谱分析法、质谱分析法 先先了了解解糖糖组组成成，再再依依据据质质谱谱裂裂解解规规律律和和化化合合物物裂裂解解碎碎片片推推测测低低聚聚糖糖及及其其苷苷中中糖糖链链连连接接次序。次序。可可处处理理低低聚聚糖糖及及其其苷苷中中糖糖链链连连接接次次序序，但但难于准确确定糖链连接位置。难于准确确定糖链连接位置。要求低聚糖及其苷中糖不能是同一类糖。要求低聚糖及其苷中糖不能是同一类糖。糖连接位置的测定7/454 4、当代方法：、当代方法：NMRNMR与与2D-NMR2D-NMR法法 在归属各个碳原子与在归属各个碳原子与HH原子信号基础上，原子信号基础上，利用利用HMBCHMBC（异核多键相关）、（异核多键相关）、NOESYNOESY（二维（二维NOENOE谱）等波谱技术，经过观察相连谱）等波谱技术，经过观察相连碳氢或碳氢或HHHH远程偶合，推断糖链连接次序远程偶合，推断糖链连接次序与连接位置。与连接位置。糖连接位置的测定8/45（六）苷键构型及氧环确实定（六）苷键构型及氧环确实定1 1、苷键构型测定方法以下：、苷键构型测定方法以下：.分子旋光差法（分子旋光差法（klyneklyne法）法）.酶催化水解方法酶催化水解方法比如：麦芽糖酶只能水解比如：麦芽糖酶只能水解-苷键；苷键；苦杏仁酶只能水解苦杏仁酶只能水解-苷键等。苷键等。糖连接位置的测定9/45 1 1H-NMRH-NMR判断糖苷键相对构型判断糖苷键相对构型 经过经过C C1 1-H-H与与C C2 2-H-H偶合常数来判断苷键构偶合常数来判断苷键构型型.比如：比如：D-D-吡喃糖，吡喃糖，-苷键苷键 ：J JH1-H2H1-H2=2-4Hz=2-4Hz -苷键苷键 ：J JH1-H2H1-H2=6-8Hz=6-8Hz糖连接位置的测定10/45 1313C-NMRC-NMR判断糖苷键构型判断糖苷键构型 经过经过C C1 1-H-H1 1偶合常数来判断苷键构型偶合常数来判断苷键构型.比如：比如：D-D-葡萄吡喃甲苷，葡萄吡喃甲苷，-苷键苷键 ：J JC1-H1C1-H1=170Hz=170Hz -苷键苷键 ：J JC1-H1C1-H1=160Hz=160Hz糖连接位置的测定11/453 3、糖氧环大小测定、糖氧环大小测定 依据依据1313CNMRCNMR数据来判断数据来判断 比如：比如：吡喃糖环中吡喃糖环中1313C C3 3-NMR-NMR信号在信号在72-78ppm;72-78ppm;呋喃糖环中呋喃糖环中1313C C3 3-NMR-NMR信号在信号在80ppm80ppm以上。以上。分析分析SmithSmith降解产物也可判断氧环大小。降解产物也可判断氧环大小。利用甲醇解反应来判断利用甲醇解反应来判断 呋喃型糖甲苷与吡喃型糖甲苷色谱行为不一样。呋喃型糖甲苷与吡喃型糖甲苷色谱行为不一样。糖连接位置的测定12/45二、糖链结构研究实例二、糖链结构研究实例 皂角苷皂角苷A A结构测定结构测定1 1、皂角苷、皂角苷A A为无定形粉末，是九糖三萜皂苷。为无定形粉末，是九糖三萜皂苷。2 2、HR-FAB-MSHR-FAB-MS负离子源测得负离子源测得 分子量为：分子量为：1831.7649 M-H1831.7649 M-H-3 3、结合、结合1313CNMRCNMR、DEPTDEPT谱确定皂角苷谱确定皂角苷A A 分子式为：分子式为：C C8282HH128128OO4545糖连接位置的测定13/454 4、相关、相关1 1HNMRHNMR数据：数据：4.89(1H,d,J=7.3Hz),4.89(1H,d,J=7.3Hz),4.99(2H,d,J=7.6Hz),4.99(2H,d,J=7.6Hz),5.13(2H,d,J=7.1Hz),5.13(2H,d,J=7.1Hz),5.32(1H,d,J=7.7Hz),5.32(1H,d,J=7.7Hz),5.55(1H,d,J=7.3Hz),5.55(1H,d,J=7.3Hz),5.93(1H,d,J=8.2Hz),5.93(1H,d,J=8.2Hz),6.29(1H,s).6.29(1H,s).糖连接位置的测定14/455 5、相关、相关1313CNMRCNMR数据：数据：94.4,100.9,103.8,104.2,94.4,100.9,103.8,104.2,104.9,105.5,105.8,106.2,104.9,105.5,105.8,106.2,106.9.106.9.在在100ppm100ppm处有处有9 9个吸收峰，说明个吸收峰，说明皂角苷皂角苷A A分子结构中含分子结构中含9 9个单糖。个单糖。糖连接位置的测定15/45 6 6、碱水解结果：取得一个三糖苷（、碱水解结果：取得一个三糖苷（次级苷次级苷）说明皂角苷说明皂角苷A A分子结构中经过分子结构中经过酯苷键酯苷键 连有一个六糖结构。连有一个六糖结构。7 7、酸水解后，再经过气相色谱分析，、酸水解后，再经过气相色谱分析，结果以下：结果以下：皂角苷皂角苷A A中所含单糖为夫糖、半乳糖、中所含单糖为夫糖、半乳糖、木糖、鸡纳糖与鼠李糖；木糖、鸡纳糖与鼠李糖；各单糖相互间分子比为各单糖相互间分子比为1 1：1 1：4 4：1 1：1 1糖连接位置的测定16/458 8、薄薄层层酸酸水水解解后后，与与标标准准品品对对照照证证实实皂皂角角苷苷A A中尚含有另一个单糖中尚含有另一个单糖葡萄糖醛酸。葡萄糖醛酸。9 9、将将酸酸水水解解后后所所得得苷苷元元再再经经过过各各种种波波谱谱数数据对照证实，确认该苷元为据对照证实，确认该苷元为皂树皂树皂苷元。皂苷元。1010、ESI-MSESI-MS谱图数据谱图数据 m/z1699(Mm/z1699(M-H-132)-H-132)提醒：提醒：木糖木糖(M=150(M=150，150-16-2150-16-2=132)=132)为末端糖；为末端糖；糖连接位置的测定17/45 m/z=955m/z=955峰提醒：脱掉了是一个六碳糖，峰提醒：脱掉了是一个六碳糖，在在C C3 3或或C C1616位上连接是一个由葡萄糖醛酸、位上连接是一个由葡萄糖醛酸、半乳糖及木糖组成三糖。半乳糖及木糖组成三糖。1111、对全部、对全部1313CNMRCNMR、1 1HNMRHNMR信号进行归属信号进行归属 （很复杂！）（很复杂！）归属依据：归属依据：1 1HNMRHNMR、1313CNMRCNMR及其及其 1 1H-H-1 1H COSY,H COSY,1 1H-H-1313C COSY C COSY、NOESYNOESY等。等。糖连接位置的测定18/45从表从表2-42-4可看到：可看到：A A、有两个木糖、有两个木糖E E、F F端基质子化学位移值端基质子化学位移值完全一样，表示这两个氢信号重合在一起。完全一样，表示这两个氢信号重合在一起。B B、有一个木糖、有一个木糖HH与鸡纳糖端基质子化学与鸡纳糖端基质子化学位移值完全一样，表示这两个氢信号也重合位移值完全一样，表示这两个氢信号也重合在一起。在一起。糖连接位置的测定19/451212、经经过过HMBCHMBC（异异核核多多键键相相关关）谱谱确定糖与糖连接关系确定糖与糖连接关系1313、依依据据1 1J JC1-H1C1-H1、C C1 1-H-H与与C C2 2-H-H偶偶合合常常数以及数以及C C1 1化学位移值确定苷键构型。化学位移值确定苷键构型。糖连接位置的测定20/45糖连接位置的测定21/45端基碳化学位移值下降端基碳化学位移值下降-2-2-4-4-7-7糖连接位置的测定22/45 在被苷化糖分子结构中，通常与端基碳直接在被苷化糖分子结构中，通常与端基碳直接相连相连-C-C化学位移改变较大些，化学位移改变较大些，-C-C稍受影响，稍受影响，其它碳原子受到影响则较少。其它碳原子受到影响则较少。在确定了苷中糖种类以后，将苷在确定了苷中糖种类以后，将苷1313C C谱谱数据与对应单糖数据与对应单糖1313C C谱数据进行比较，利用谱数据进行比较，利用苷化位移规律可确定苷中糖连接位置。苷化位移规律可确定苷中糖连接位置。糖连接位置的测定23/45 比如：判断双糖苷中两单糖连接位置比如：判断双糖苷中两单糖连接位置 将双糖苷将双糖苷1313C C谱数据与对应单糖谱数据与对应单糖1313C C谱谱 数据数据进行比较；进行比较；假如内侧糖某个碳原子化学位移向假如内侧糖某个碳原子化学位移向 低场方向移动了（通常是低场方向移动了（通常是47ppm),47ppm),而与其而与其 相邻两个碳原子之化学位移值又略向高场相邻两个碳原子之化学位移值又略向高场 方向移动（约方向移动（约12ppm),12ppm),则内侧糖这个碳则内侧糖这个碳 原子就是糖连接位置。原子就是糖连接位置。糖连接位置的测定24/45三、红外光谱三、红外光谱IR IR 1.37001.37003100cm3100cm-1-1间有显著间有显著O-HO-H吸收峰。吸收峰。2.2.如糖分子中含羧基、酰基等，则对应官能团如糖分子中含羧基、酰基等，则对应官能团IRIR吸收峰可见。吸收峰可见。3.3.多糖在多糖在15001500960cm960cm-1-1有许多吸收峰，其中有许多吸收峰，其中970970730cm730cm-1-1间峰可用作端基碳构型判断。间峰可用作端基碳构型判断。比如：比如：840cm840cm-1-1吸收峰吸收峰 -L-L-吡喃糖苷吡喃糖苷 890cm890cm-1-1吸收峰吸收峰 -D-D-吡喃糖苷吡喃糖苷糖连接位置的测定25/45四、质谱四、质谱1 1、糖类难挥发，且热不稳定，需要制成挥发、糖类难挥发，且热不稳定，需要制成挥发性衍生物才能进行质谱分析。性衍生物才能进行质谱分析。2 2、糖立体异构体往往出现几乎相同质谱，、糖立体异构体往往出现几乎相同质谱，仅在碎片丰度上稍有区分（仅在碎片丰度上稍有区分（不能用质谱来区分不能用质谱来区分糖构型！糖构型！）。）。3 3、糖和苷分子量：可用、糖和苷分子量：可用CI(CI(化学电离化学电离),FD-MS),FD-MS、FAB-MSFAB-MS等方法取得分子离子峰后测出。等方法取得分子离子峰后测出。糖连接位置的测定26/454 4、软软电电离离方方式式得得到到碎碎片片峰峰极极少少，但但有有可可能能取取得得从从分分子子离离子子峰峰按按次次序序失失去去一一个个个个糖糖基基后后碎片离子峰。碎片离子峰。假假如如事事先先测测定定了了多多糖糖组组成成，则则可可依依据据质质谱碎片离子峰信息来推断原糖链连接次序。谱碎片离子峰信息来推断原糖链连接次序。糖连接位置的测定27/45第六节第六节 糖链结构测定糖链结构测定 主要处理四个问题主要处理四个问题 单糖组成；单糖组成；糖氧环大小；糖氧环大小；糖与糖之间连接位置和次序；糖与糖之间连接位置和次序；苷键构型。苷键构型。糖连接位置的测定28/45（一）纯度测定方法（一）纯度测定方法1 1、高压电泳法、高压电泳法 原理：因为中性多糖导电性差、分子量大、原理：因为中性多糖导电性差、分子量大、在电场中移动速度慢，常将其制成硼酸络合在电场中移动速度慢，常将其制成硼酸络合物进行高压电泳。物进行高压电泳。电泳支持体：玻璃纤维丝、纯丝绸布等。电泳支持体：玻璃纤维丝、纯丝绸布等。缓冲液：缓冲液：pH=9-12pH=9-12硼砂溶液。硼砂溶液。电压：电压：30-50V/cm30-50V/cm糖连接位置的测定29/45 时间：时间：30-120min30-120min 显色剂：显色剂：p-p-甲氧基苯胺甲氧基苯胺-硫酸。硫酸。注意：必须使用冷却系统，将温度维持在注意：必须使用冷却系统，将温度维持在 0,0,以免烧坏支持体。以免烧坏支持体。本法惯用本法惯用2 2、超离心法、超离心法 原理：因为微粒在离心力场中移动速度原理：因为微粒在离心力场中移动速度 与微粒密度、大小与形状相关，故将多糖与微粒密度、大小与形状相关，故将多糖糖连接位置的测定30/45溶液进行溶液进行密度梯度超离心密度梯度超离心时，假如是组成均一时，假如是组成均一多糖，则应展现单峰。多糖，则应展现单峰。详细做法：详细做法：将多糖样品制成将多糖样品制成1%-5%1%-5%氯化钠或氯化钠或tris-tris-盐盐溶液，接着进行溶液，接着进行密度梯度超离心，密度梯度超离心，待转速到达待转速到达恒定后（恒定后（60006000转转/min/min），采取），采取间隔照明法间隔照明法检测其是否为单峰。检测其是否为单峰。糖连接位置的测定31/453 3、旋光光度法、旋光光度法 在多糖水溶液中加入乙醇使其浓度到达在多糖水溶液中加入乙醇使其浓度到达10%10%左右，离心得沉淀。上清液再用乙醇使其浓度左右，离心得沉淀。上清液再用乙醇使其浓度到达到达20%-25%20%-25%左右，离心得到第二次沉淀。左右，离心得到第二次沉淀。比较两次沉淀比旋光度，假如比旋光度相同比较两次沉淀比旋光度，假如比旋光度相同则为纯品，不然为混合物。则为纯品，不然为混合物。4 4、其它方法、其它方法 如凝胶柱色谱、官能团摩尔比恒定法等。如凝胶柱色谱、官能团摩尔比恒定法等。糖连接位置的测定32/45（二）分子量测定（二）分子量测定1 1、测定多糖分子量物理方法：、测定多糖分子量物理方法：沉降法、光散射法、黏度法和渗透压法等。沉降法、光散射法、黏度法和渗透压法等。2 2、凝胶过滤法凝胶过滤法介绍：介绍：在凝胶柱上不一样分子量多糖与洗脱体积在凝胶柱上不一样分子量多糖与洗脱体积成一定关系。采取一系列结构相同已知分成一定关系。采取一系列结构相同已知分子量多糖做标准曲线，进而测定样品多糖子量多糖做标准曲线，进而测定样品多糖分子量。分子量。该法用量小、操作较简便。该法用量小、操作较简便。糖连接位置的测定33/453 3、单糖、低聚糖及其苷分子量测定、单糖、低聚糖及其苷分子量测定 最惯用最惯用FD-MSFD-MS、FAB-MSFAB-MS与电喷雾与电喷雾-MS-MS4 4、多糖分子量测定方法、多糖分子量测定方法 基质辅助激光解析电离质谱基质辅助激光解析电离质谱 （MALDI-MSMALDI-MS）基质辅助激光解析飞行时间质谱基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS).(MALDI-TOF-MS).糖连接位置的测定34/45（三）单糖判定（三）单糖判定 1 1纸层析纸层析 展开系统：惯用水饱和有机溶剂展开系统：惯用水饱和有机溶剂如：如：正丁醇：醋酸：水正丁醇：醋酸：水（4 4：1 1：5 5上层）上层）BAWBAW 正丁醇：乙醇：水（正丁醇：乙醇：水（4 4：1 1：2.22.2）BEWBEW 展开方式：上行、下行等展开方式：上行、下行等 显色剂：可利用糖还原性或形成糠醛后显色剂：可利用糖还原性或形成糠醛后引发一些呈色反应。比如，引发一些呈色反应。比如，糖连接位置的测定35/45 邻苯二甲酸苯胺邻苯二甲酸苯胺 硝酸银试剂（使还原糖显棕黑色）硝酸银试剂（使还原糖显棕黑色）三苯四氮唑盐试剂三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色）（单糖和还原性低聚糖呈红色）3,5-3,5-二羟基甲苯二羟基甲苯-盐酸试剂盐酸试剂 （酮糖呈红色）（酮糖呈红色）过碘酸过碘酸-联苯胺（糖、苷和多元醇中有联苯胺（糖、苷和多元醇中有邻二邻二-OH-OH结构显结构显兰底白斑兰底白斑）。）。糖连接位置的测定36/452 2薄层层析薄层层析 采取（硼酸液采取（硼酸液/无机盐）无机盐）+硅胶硅胶 制板制板 吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶 显色剂：显色剂：除纸层析应用以外，还有除纸层析应用以外，还有HH2 2SOSO4 4/H/H2 2O O或或乙醇液、茴香醛乙醇液、茴香醛-硫酸试剂、硫酸试剂、苯胺苯胺-二苯胺磷二苯胺磷酸试剂等。酸试剂等。糖连接位置的测定37/453 3气相层析气相层析 将糖制备成三甲基硅醚将糖制备成三甲基硅醚 醛醛糖糖用用NaBHNaBH4 4还还原原成成多多元元醇醇，制制成成乙乙酰酰化化物或三氟乙酰化物。物或三氟乙酰化物。4 4离子交换层析离子交换层析 原理：原理：糖硼酸络合物可进行离子交换层析糖硼酸络合物可进行离子交换层析糖连接位置的测定38/45 优点：无须制成衍生物，而直接用水溶液优点：无须制成衍生物，而直接用水溶液 进行分离（与气相比较）进行分离（与气相比较）需要仪器需要仪器糖自动分析仪糖自动分析仪5 5液相色谱液相色谱 填充材料填充材料化学修饰硅胶化学修饰硅胶 优点：无须制备成衍生物。适合分析对热优点：无须制备成衍生物。适合分析对热 不稳定、不挥发低聚糖和多糖。不稳定、不挥发低聚糖和多糖。缺点：灵敏度不及气相层析高。缺点：灵敏度不及气相层析高。糖连接位置的测定39/45 多糖组成判定多糖组成判定 1 1、必必要要性性：低低聚聚糖糖、多多糖糖结结构构分分析析，首首先先要要了了解由哪些单糖所组成、各种单糖之间百分比等。解由哪些单糖所组成、各种单糖之间百分比等。2 2、多多糖糖组组成成判判定定过过程程：将将苷苷键键全全水水解解，用用PCPC检检出出单单糖糖种种类类，经经显显色色后后用用薄薄层层扫扫描描仪仪求求得得各各种种糖糖分分子子比比（也也可可用用GCGC或或HPLCHPLC对对各各单单糖糖定定性性定量分析）。定量分析）。糖连接位置的测定40/45（四）糖连接位置测定（四）糖连接位置测定1 1、化学方法：多采取甲基化法、化学方法：多采取甲基化法过过程程：将将糖糖链链全全甲甲基基化化，然然后后水水解解全全部部苷苷键键，用用气气相相色色谱谱法法对对水水解解产产物物甲甲基基化化单单糖糖进进行行定性和定量分析。定性和定量分析。甲基化过程：惯用箱遵法甲基化过程：惯用箱遵法(Hakomori)(Hakomori)水水解解过过程程：通通常常先先用用90%90%甲甲酸酸全全水水解解，然然后后用用0.05mol/L H0.05mol/L H2 2SOSO4 4或三氟乙酸水解。或三氟乙酸水解。糖连接位置的测定41/45 气相色谱法定性和定量分析：气相色谱法定性和定量分析：选选择择各各种种单单糖糖标标准准品品，分分别别与与水水解解后后得得到到各各种种甲甲基基化化单单糖糖进进行行比比较较，含含有有游游离离-OH-OH部部位位就就是糖连接位置，而全甲基化单糖即为末端糖。是糖连接位置，而全甲基化单糖即为末端糖。计算过程：计算过程：算算出出所所得得各各甲甲基基化化产产物物相相互互之之间间百百分分比比，据据此可推测出糖链重复单位中各种单糖数目。此可推测出糖链重复单位中各种单糖数目。糖连接位置的测定42/45全甲基化全甲基化水解水解游离羟基游离羟基游离羟基游离羟基糖连接位置的测定43/452 2、NMRNMR谱法谱法（了解内容）（了解内容）1313CNMRCNMR谱法：谱法：当前用来确定糖连接位置惯用方法当前用来确定糖连接位置惯用方法 该该法法是是在在归归属属各各碳碳信信号号基基础础上上，以以游游离离苷苷元元和和甲甲基基糖糖苷苷作作为为参参考考化化合合物物，确确定定产产生生苷苷化化位位移移碳碳，然然后后利利用用苷苷化化位位移移规规则则，即即可可方方便便地地获获知各单糖连接位置。知各单糖连接位置。糖连接位置的测定44/45 1 1HNMRHNMR谱法：谱法：先先使使糖糖与与苷苷乙乙酰酰化化，再再比比较较不不一一样样类类型型质子化学位移。质子化学位移。比比 如如：CHOAcCHOAc中中 CHCH质质 子子 化化 学学 位位 移移 为为4.755.4ppm;4.755.4ppm;而而 CHCH2 2OAcOAc、CHCH2 2OROR中中 质质 子子 在在3.04.3ppm3.04.3ppm；端基质子介于这二者之间。；端基质子介于这二者之间。经经过过2D-NMR2D-NMR判判定定质质子子归归属属，从从而而得得出出糖糖连接位点。连接位点。糖连接位置的测定45/45