自身抗体的应用和研究进展专家讲座.pptx

本身抗体应用及研究进展本身抗体应用及研究进展 -04-13自身抗体的应用和研究进展第1页2酶联免疫吸附法（ELISA）1间接免疫荧光法（IFA Indirect Fluorescent Assay）3免疫印迹法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等自身抗体的应用和研究进展第2页全自动本身抗体分析仪全自动本身抗体分析仪u自动化检测自动化检测u检测定量化检测定量化u单个项目随时检测单个项目随时检测u多个项目同时检测多个项目同时检测u45-90分钟汇报结果分钟汇报结果u原厂质控和校正血清原厂质控和校正血清u准确温度调控系统准确温度调控系统u五点定标、三重检测五点定标、三重检测自身抗体的应用和研究进展第3页自身抗体的应用和研究进展第4页风湿病试验室诊疗血清学检验血清学检验 本身抗体本身抗体特异性特异性 非特异免疫相关指标非特异免疫相关指标滑液分析滑液分析普通试验室检验项目普通试验室检验项目自身抗体的应用和研究进展第5页项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见本本身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)自身抗体的应用和研究进展第6页(2)本身免疫肝炎七项ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见本本身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法自身抗体的应用和研究进展第7页抗Ku抗体（Ku)抗Mi抗体（Mi-2）抗PM-Scl抗体抗JO-1抗体（JO-1）多发性肌炎、皮肌炎抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）原发性胆汁性肝硬化抗nRNP抗体（U1-snRNP）混合性结缔组织病（MCTD）抗Scl-70抗体（Scl-70）抗着丝点B抗体（CENP-B）系统性硬化抗SSB/La抗体抗SSA/R052抗体抗SS-A/R060抗体干燥综合征/系统性红斑狼疮抗核糖体P蛋白（PO）抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA)抗Sm抗体抗组蛋白抗体抗核小体抗体抗双链DNA抗体IgG抗体系统性红斑狼疮项项 目目 名名 称称 疾疾 病病ANA谱谱17项（免疫印迹法）项（免疫印迹法）(3)常常见见本本身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法自身抗体的应用和研究进展第8页(一一)类风湿关节炎（类风湿关节炎（RARA）类风湿因子（RF）早期诊疗系列指标抗RA33/36抗体抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）自身抗体的应用和研究进展第9页类风湿因子（类风湿因子（RFRF）抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇特异性抗体,分为IgM、G、A、E型RF在RA中阳性率为70%，是诊疗RA主要标准之一RF含量与病情活动性和严重性成正比，连续高滴度RF常提醒RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提醒预后不良自身抗体的应用和研究进展第10页类风湿因子（RF）RF并非RA独有特异性抗体，对RA诊疗不具特异性 SLE 30%SS 70%90%SSc 20%30%MCTD 50%60%非风湿性疾病 5%以下正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA自身抗体的应用和研究进展第11页自身抗体的应用和研究进展第12页RF惯用检测方法RF 1：40阳性 乳胶凝集法（测IgM-RF）RF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）RF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法-IgM 200IU/ml自身抗体的应用和研究进展第13页RARA早期诊疗系列指标早期诊疗系列指标 敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8%99.6%APF 40%-80%70%-90%AKA 40%-55%85%-95%抗Sa抗体 40%-60%98.6%抗CCP 46%-70%96%自身抗体的应用和研究进展第14页抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体主要抗原决定簇对RA诊疗含有高度特异性（98%）可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏早期识别及预测自身抗体的应用和研究进展第15页(二)系统性红斑狼疮（SLE）是一个临床表现有多系统损害症状慢性系统性本身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主大量不一样本身抗体本身抗体（1）抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体抗RBC抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体（4）其它RF、p-ANCA自身抗体的应用和研究进展第16页抗核抗体（抗核抗体（ANA）定义以细胞核内物质为抗原抗体临床意义SLE筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异:风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用一些药品（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）自身抗体的应用和研究进展第17页抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）方法间接免疫荧光法结果判断:滴度1：100为阳性 常见核型5种 不一样核型临床意义不一样自身抗体的应用和研究进展第18页 核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA相关，相关，多见于多见于SLE，尤其是有肾炎者，尤其是有肾炎者 均质型均质型与与AHAAHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNADNA相关，相关，引发引发LELE形成主要见于形成主要见于SLESLE、药品性狼疮、药品性狼疮自身抗体的应用和研究进展第19页 斑点型斑点型 与抗与抗ENA相关，应深入查特异性抗体相关，应深入查特异性抗体核仁型核仁型多见于硬皮病多见于硬皮病自身抗体的应用和研究进展第20页 着丝点型着丝点型多见于多见于CREST综合征综合征自身抗体的应用和研究进展第21页ANA常见五种核型及临床意义核膜型与抗ds-DNA相关，多见于SLE，尤其是有肾炎者均质型与AHA、抗DNA相关，引发LE形成 主要见于SLE、药品性狼疮斑点型与抗ENA相关，应深入查特异性抗体核仁型多见于硬皮病着丝点型多见于CREST综合征自身抗体的应用和研究进展第22页ANA检测方法间接免疫荧光法印迹法ELISA法自身抗体的应用和研究进展第23页 抗核抗体谱（ANAs）定义：以细胞核内物质为抗原抗体定义：以细胞核内物质为抗原抗体 抗抗DNADNA抗体抗体抗抗ss-DNAss-DNA 抗抗ds-DNAds-DNA 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体HH1 1，H H2A2A，H H2B2B，HH3 3，HH4 4 抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体抗抗ENAENA抗体抗体 抗着丝点抗体抗着丝点抗体 抗核仁抗体抗核仁抗体 其它其它线粒体、溶酶体、高尔基体等线粒体、溶酶体、高尔基体等 自身抗体的应用和研究进展第24页抗抗ds-DNA抗体抗体临床意义临床意义 对对SLESLE诊疗有较高特异性诊疗有较高特异性 滴度与滴度与SLESLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与与SLESLE肾损害相关肾损害相关检测方法检测方法 放免法（放免法（Farr)Farr)敏感，有利于早期预测敏感，有利于早期预测 检测高亲协力抗检测高亲协力抗ds-DNAds-DNA 间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IF)(IF)特异特异 ELISA ELISA可检测低亲协力抗可检测低亲协力抗ds-DNAds-DNA 有利于中枢狼疮病情监测有利于中枢狼疮病情监测 金标免疫斑点法金标免疫斑点法自身抗体的应用和研究进展第25页抗抗ENAENA抗体抗体抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？抗Sm SLE标识性抗体，阳性率30%有利于早期、不经典及治疗缓解后SLE回顾性诊疗抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞降低、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS自身抗体的应用和研究进展第26页抗抗ENAENA抗体抗体抗Scl-70 硬皮病标识性抗体抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标识性抗体抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它本身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体消长相平行 但不会随病情缓解马上消失 可连续1-2年后才转阴自身抗体的应用和研究进展第27页抗核小体抗体（AnuA）核小体是细胞染色质中一个成份，它是由DNA和组蛋白以特殊方式相连而组成，在SLE诱导和致病中起主要作用对SLE早期诊疗有主要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%自身抗体的应用和研究进展第28页(三)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）免疫学检验免疫学检验ANAENA抗抗Jo-1阳性阳性其它检验其它检验肌酶谱肌酶谱肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌心肌和骨骼肌 MB-心肌心肌 BB-平滑肌和脑内平滑肌和脑内乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDH）谷草转氨酶（谷草转氨酶（AST）谷丙转氨酶（谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALP）自身抗体的应用和研究进展第29页(四)干燥综合征（SS）ANA阳性率40%70%ENA抗SSA抗体阳性率70%96%抗SSB抗体阳性率50%87%抗-Fordrin对于对于pSS或或sSS诊疗有一诊疗有一 定意义，但特异性和敏感性并不理想。定意义，但特异性和敏感性并不理想。RF阳性率75%100%高球蛋白血症WBC下降自身抗体的应用和研究进展第30页(五)系统性硬化病（pSS）ANA阳性率阳性率50%55%ENA抗抗Scl-70阳性率阳性率15%40%抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)阳性阳性自身抗体的应用和研究进展第31页(六)混合性结缔组织病（MCTD）ANA阳性ENA抗RNP高滴度阳性自身抗体的应用和研究进展第32页（七）血管炎（七）血管炎 抗中性粒抗中性粒细细胞胞胞胞浆浆抗体（抗体（ANCA）荧光图谱分型荧光图谱分型主要抗原成份胞浆型胞浆型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPO）非经典型（cANCA）不清不清自身抗体的应用和研究进展第33页ANCA临床意义c-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药品疗效和病情复发指标p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA含有诊疗特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关自身抗体的应用和研究进展第34页（八）抗磷脂抗体综合征（APS）是一个非炎症性本身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板降低等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体血清学检验抗心磷脂抗体（ACA）IgG、IgM、IgA（ELISA）抗2糖蛋白1抗体（抗2-GP1)狼疮抗凝物（LA）凝血酶原时间（PT）激活部分凝血活酶时间（APTT）白陶土凝集时间（KCT）蛇毒试验（RVVT）自身抗体的应用和研究进展第35页抗磷脂抗体抗2-GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更含有特异性，是造成APS主要抗体抗2GP1抗体只出现于本身免疫性疾病,而ACA也可出现于一些感染性疾病,如梅毒、AIDS、肝炎、结核等 自身抗体的应用和研究进展第36页（九）本身免疫性肝病我科开展本身免疫肝炎系列抗体包含：我科开展本身免疫肝炎系列抗体包含：抗核抗体（ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体（ASMA）抗肝肾微粒体抗体（抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LPLP抗体)抗可溶性肝细胞抗体（抗SLA）抗线粒体抗体（AMA）自身抗体的应用和研究进展第37页本身免疫性肝炎（AIH）ANA 抗平滑肌抗体（SMA）抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗线粒体抗体（AMA）M2原发性硬化性胆管炎 ANCA阳性本身免疫性肝病本身免疫性肝病自身抗体的应用和研究进展第38页风湿病试验室诊疗本身抗体特异性非特异免疫相关指标普通试验室检验项目血常规尿常规肝功效肾功效等自身抗体的应用和研究进展第39页注意事项选择做哪些检验项目时要重点突出 防止“大撒网”解释试验结果时应考虑以下几个问题试验方法本身敏感性、特异性、可靠性及试验室之间差异性结合临床应把与之相关一组试验结果放在一起考虑自身抗体的应用和研究进展第40页全国本身抗体检测质量控制总结全国本身抗体检测质量控制总结 u由中华医学会风湿病分会计划 u参加质控医院和检测项目逐年增多，多为三甲医院 本身抗体检测对于本身抗体检测对于风湿性疾病诊疗风湿性疾病诊疗、病情评定病情评定、治疗治疗和预后和预后都及其主要。但影响其检测原因很多，如都及其主要。但影响其检测原因很多，如检测方检测方法法、检测技术检测技术、操作人员操作人员、使用仪器使用仪器等等，这些都会造等等，这些都会造成出现假阳性或假阴性，所以对本身抗体进行检测质量成出现假阳性或假阴性，所以对本身抗体进行检测质量控制是非常必要。控制是非常必要。自身抗体的应用和研究进展第41页当前本身抗体检测过程中主要存在以下三个问题：当前本身抗体检测过程中主要存在以下三个问题：1.检测方法差异2.检测试剂盒不规范3.检测人员知识水平差异提议：提议：u统一检测方法以统一敏感性和特异性u统一所使用检测试剂盒u试验室操作人员应进行技术操作常规和风湿性疾病临床 知识培训自身抗体的应用和研究进展第42页 谢谢 谢！谢！自身抗体的应用和研究进展第43页