色谱分析方法导论概述历史色谱分离过程分市公开课金奖市赛课一等奖课件.pptx

第第15章章 色谱分析办法导论色谱分析办法导论15.1 概述概述历史、色谱分离过程、分类历史、色谱分离过程、分类15.2 色谱流出曲线色谱流出曲线色谱图及相关术语色谱图及相关术语15.3 色谱法基本原理色谱法基本原理描描述述分分派派过过程程参参数数、峰峰间间距距、峰峰形形状状和和峰峰宽宽理理论论描描述述(塔塔板板理理论论及及速速率率理理论论)15.4 分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程、影响分离原因分离度及色谱分离方程、影响分离原因第1页第1页15.1 概述 化学分析方法基本要求是其选择性要高。即，在分析过程中，待测物与潜在干扰物分离是最为主要步骤！20 世纪中期，大量采取一些经典分离方法：沉淀、蒸馏和萃取 当代分析中，大量采取色谱和电泳分离方法。迄今为止，色谱方法是最为有效分离手段！其应用包括每个科学领域。历史：19，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先创造。他采取填充有固体CaCO3细粒子玻璃柱，将植物色素混合物(叶绿素和叶黄素 chlorophylls&xanthophylls)加于柱顶端，然后以溶剂淋洗，被分 离组份在柱中显示了不同色带，他称之为色谱(希腊语中 “chroma”=color;“graphein”=write)。50年代，色谱发展最快（一些新型色谱技术发展；复杂组分分析发展要求。1937-1972年，中有12个Nobel奖是相关色谱研究！第2页第2页色谱分离基本原理：使用外力使含有样品流动相（气体、液体或超临界流体）经过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶固定相表面。样品中各组份在两相中进行不同程度作用。与固定相作用强组份随流动相流出速度慢，反之，与固定相作用弱组份随流动相流出速度快。因为流出速度差异，使得混合组份最终形成各个单组份“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出各个单组份物质可分别进行定性、定量分析。色谱分类方法：1.按固定相外形分：柱色谱（填充柱、空心柱）、平板色谱（薄层色谱和纸色谱。2.按组份在固定相上分离机理分：吸附色谱：不同组份在固定相吸附作用不同；分派色谱：不同组份在固定相上溶解能力不同；离子互换色谱：不同组份在固定相（离子互换剂）上亲和力不同；凝胶色谱（尺寸排阻色谱）不同尺寸分子在固定相上渗透作用。第3页第3页3.按两相状态分按两相状态分第4页第4页15.2 色谱流出曲线（色谱图）混合组分分离过程及检测器对各组份在不同阶段响应第5页第5页色谱术语：色谱术语：1）基基线线：在在试试验验条条件件下下，色色谱谱柱柱后后仅仅有有纯纯流流动动相相进进入入检检测测器器时时流流出出曲曲线线称称为为基基线线，S/N大大、稳稳定定基基线线为水平直线。为水平直线。2）峰峰高高：色色谱谱峰峰顶顶点点与与基线距离。基线距离。3）保留值）保留值(Retention value,R)a.死死时时间间(Dead time,t0)：不不与与固固定定相相作作用用物物质质从从进进样样到到出出现现峰峰极极大大值值时时时时间间，它它与与色色谱谱柱柱空空隙隙体体积积成成正正比比。由由于于该该物物质质不不与与固固定定相相作作用用，因因此此，其其流流速速与流动相流速相近。据与流动相流速相近。据 t0 可求出流动相平均流速可求出流动相平均流速 第6页第6页 b.保保留留时时间间tr：试试样样从从进进样样到到出出现现峰峰极极大大值值时时时时间间。它它包包括括组组份份随随流流动动相相通通过柱子时间过柱子时间t0和组份在固定相中滞留时间。和组份在固定相中滞留时间。c.调调整整保保留留时时间间 ：某某组组份份保保留留时时间间扣扣除除死死时时间间后后保保留留时时间间，它它是是组组份份在在固固定相中滞留时间。即定相中滞留时间。即 由由于于时时间间为为色色谱谱定定性性依依据据。但但同同一一组组份份保保留留时时间间与与流流速速相相关关，因因此此有有时时需需用保留体积来表示保留值。用保留体积来表示保留值。d.死死体体积积V0：色色谱谱柱柱管管内内固固定定相相颗颗粒粒间间空空隙隙、色色谱谱仪仪管管路路和和连连接接头头间间空空隙隙和和检测器间隙总和。勿略后两项可得到：检测器间隙总和。勿略后两项可得到：其中，其中，Fco为柱出口载气流速为柱出口载气流速（mL/min)，其值为：，其值为：F0-检测器出口流速；检测器出口流速；Tr-室温；室温；Tc-柱温；柱温；p0-大气压；大气压；pw-室温时水蒸汽压。室温时水蒸汽压。第7页第7页 e.保保留留体体积积Vr：指指从从进进样样到到待待测测物物在在柱柱后后出出现现浓浓度度极极大大点点时时所所通通过过流流动动相相体体积。积。f.调整保留体积调整保留体积 ：某组份保留体积扣除死体积后体积。：某组份保留体积扣除死体积后体积。g.相对保留值相对保留值r2,1：组份：组份2调整保留值与组份调整保留值与组份1调整保留值之比。调整保留值之比。注注意意：r2,1只只与与柱柱温温和和固固定定相相性性质质相相关关，而而与与柱柱内内径径、柱柱长长L、填填充充情情况况及及流流动动相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是相流速无关，因此，在色谱分析中，尤其是GC中广泛用于定性依据！中广泛用于定性依据！详详细细做做法法：固固定定一一个个色色谱谱峰峰为为原原则则s，然然后后再再求求其其它它峰峰 i 对对原原则则峰峰相相对对保保留留值值，此时以此时以 表示：表示：1,又称选择因子又称选择因子(Selectivity factor)。第8页第8页 h.区区域域宽宽度度：用用于于衡衡量量柱柱效效及及反反应应色色谱谱操操作作条条件件下下动动力力学学原原因因。通通常常有有三三种表示办法：种表示办法：原则偏差原则偏差：0.607倍峰宽处二分之一。倍峰宽处二分之一。半峰宽半峰宽W1/2：峰高二分之一处峰宽。：峰高二分之一处峰宽。W1/2=2.354 峰底宽峰底宽W：色谱峰两侧拐点上切线与基线交点间距离。：色谱峰两侧拐点上切线与基线交点间距离。W=4 色谱流出曲线意义：色谱流出曲线意义：色谱峰数色谱峰数=样品中单组份至少个数；样品中单组份至少个数；色谱保留值色谱保留值定性依据；定性依据；色谱峰高或面积色谱峰高或面积定量依据；定量依据；色谱保留值或区域宽度色谱保留值或区域宽度色谱柱分离效能评价指标；色谱柱分离效能评价指标；色谱峰间距色谱峰间距固定相或流动相选择是否适当依据。固定相或流动相选择是否适当依据。第9页第9页15.3 色谱法基本原理色谱法基本原理两组份峰间距足够远：由各组份在两相间分派系数决定，即由色谱过程两组份峰间距足够远：由各组份在两相间分派系数决定，即由色谱过程 热力学热力学性质决定。性质决定。每个组份峰宽足够小：由组份在色谱柱中传质和扩散决定，即由色谱过程每个组份峰宽足够小：由组份在色谱柱中传质和扩散决定，即由色谱过程 动力学动力学性质决定。性质决定。因此，研究、解释色谱分离行为应从热力学和动力学两方面进行。因此，研究、解释色谱分离行为应从热力学和动力学两方面进行。一、描述分派过程参数一、描述分派过程参数1.分派系数分派系数(Distribution constant,K)：2.描描述述组组份份在在固固定定相相和和流流动动相相间间分分派派过过程程或或吸吸附附-脱脱附附过过程程参参数数，称称为为分分派系数。派系数。3.K 只与固定相和温度相关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关。只与固定相和温度相关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关。第10页第10页2.分派比分派比(Retention factor or capacity factor,k)：在在一一定定温温度度和和压压力力下下，组组份份在在两两相相间间分分派派达达平平衡衡时时，分分派派在在固固定定相相和和流流动相中质量比，称为分派比。它反应了组分在柱中迁移速率。又称保留因子。动相中质量比，称为分派比。它反应了组分在柱中迁移速率。又称保留因子。其中其中Vm V0，Vs为固定相体积。为固定相体积。分派比分派比 k 求算：求算：1）组分滞留因子：）组分滞留因子：2）又，）又，3）因此，）因此，第11页第11页3.K 与 k 关系：称为相比率，它也是反应色谱柱柱型特点参数。对填充柱，=635；对毛细管柱，=60600。4.选择因子：色谱柱对A、B两组分选择因子 定义以下：A为先流出组分，B为后流出组分。注意：K 或 k 反应是某一组分在两相间分派；而 是反应两组分间分离情况！当两组分 K 或 k 相同时，=1 时，两组分不能分开；当两组分 K 或 k 相差越大时，越大，分离得越好。也就是说，两组分在两相间分派系数不同，是色谱分离先决条件。和 k 是计算色谱柱分离效能主要参数！第12页第12页二、峰间距、峰形状和峰宽理论描述二、峰间距、峰形状和峰宽理论描述1.塔板理论塔板理论（Plate theory)1952年年，Martin等等人人提提出出塔塔板板理理论论将将一一根根色色谱谱柱柱当当作作一一个个由由许许多多塔塔板板构构成成精精馏馏塔塔，用用塔塔板板概概念念来来描描述述组组分分在在柱柱中中分分派派行行为为。塔塔板板是是从从精精馏馏中中借借用用，是是一一个半经验理论，但它成功地解释了色谱流出曲线呈正态分布。个半经验理论，但它成功地解释了色谱流出曲线呈正态分布。塔板理论假定：塔板理论假定：1）塔板之间不连续；）塔板之间不连续；2）塔板之间无分子扩散；）塔板之间无分子扩散；3）组分在各塔板内两相间分派瞬间达至平衡，达一次平衡所需柱长为理论）组分在各塔板内两相间分派瞬间达至平衡，达一次平衡所需柱长为理论 塔板高度塔板高度H；4）某组分在所有塔板上分派系数相同；）某组分在所有塔板上分派系数相同；5）流动相以不连续方式加入，即以一个一个塔板体积加入。）流动相以不连续方式加入，即以一个一个塔板体积加入。当当塔塔板板数数n较较少少时时，组组分分在在柱柱内内达达分分派派平平衡衡次次数数较较少少，流流出出曲曲线线呈呈峰峰形形，但但不对称；当塔板数不对称；当塔板数n50时，峰形靠近正态分布。时，峰形靠近正态分布。第13页第13页 依依据据呈呈正正态态分分布布色色谱谱流流出出曲曲线线能能够够导导出出计计算算塔塔板板数数n公公式式，用用以以评评价价一一根根柱柱子子柱柱效。由于色谱柱并无真正塔板，故塔板数又称理论塔板数：效。由于色谱柱并无真正塔板，故塔板数又称理论塔板数：可见理论塔板数由组分保留值和峰宽决定。可见理论塔板数由组分保留值和峰宽决定。若柱长为若柱长为L，则每块理论塔板高度，则每块理论塔板高度H为为 由由上上述述两两式式知知道道，理理论论塔塔板板数数n越越多多、理理论论塔塔板板高高度度H越越小小、色色谱谱峰峰越越窄窄，则则柱柱效越高。效越高。但但上上述述两两式式包包括括死死时时间间t0，它它与与组组分分在在柱柱内内分分派派无无关关，因因此此不不能能真真正正反反应应色色谱谱柱柱柱效。通常以有效塔板数柱效。通常以有效塔板数neff 和有效塔板高度和有效塔板高度Heff 表示：表示：第14页第14页相关塔板理论阐明：相关塔板理论阐明：1）阐阐明明柱柱效效时时，必必须须注注明明该该柱柱效效是是针针对对何何种种物物质质、固固定定液液种种类类及及其其含含量、流动相种类及流速、操作条件等；量、流动相种类及流速、操作条件等；2）应定期对柱效进行评价，以防柱效下降、延长柱寿命。）应定期对柱效进行评价，以防柱效下降、延长柱寿命。3）塔塔板板理理论论描描述述了了组组分分在在柱柱内内分分派派平平衡衡和和分分离离过过程程、导导出出流流出出曲曲线线数数学模型、解释了流出曲线形状和位置、提出了计算和评价柱效参数。学模型、解释了流出曲线形状和位置、提出了计算和评价柱效参数。但但该该理理论论是是在在抱抱负负情情况况下下导导出出，未未考考虑虑分分子子扩扩散散原原因因、其其它它动动力力学学原因对柱内传质影响。因此它不能解释：原因对柱内传质影响。因此它不能解释：v 峰形为何会扩张？峰形为何会扩张？v 影响柱效动力学原因是什么？影响柱效动力学原因是什么？第15页第15页2.速率理论速率理论（Rate theory）1956年年，荷荷兰兰化化学学工工程程师师van Deemter提提出出了了色色谱谱过过程程动动力力学学速速率率理理论论：吸吸取取了了塔塔板板理理论论中中板板高高H概概念念，考考虑虑了了组组分分在在两两相相间间扩扩散散和和传传质质过过程，从而给出了程，从而给出了van Deemter方程：方程：u 为流动相线速度；为流动相线速度；A，B，C为常数，其中为常数，其中 A分别表示涡流扩散系数；分别表示涡流扩散系数；B分子扩散系数；分子扩散系数；C传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。该该式式从从动动力力学学角角度度较较好好地地解解释释了了影影响响板板高高（柱柱效效）各各种种原原因因！任任何何减少方程右边三项数值办法，都可减少减少方程右边三项数值办法，都可减少H，从而提升柱效。，从而提升柱效。第16页第16页1）涡流扩散项(Multipath term,A)在填充柱中，因为受到固定相颗粒妨碍，组份在迁移过程中随流动相不停改变方向，形成紊乱“涡流”：从图中可见，因填充物颗粒大小及填充不均匀性同一组分运行路线长短不同流出时间不同峰形展宽。展宽程度以A表示：A=2dp其中dp填充物平均直径；填充不规则因子。可可见见，使使用用细细粒粒固固定定相相并并填填充充均均匀匀可可减减小小A，提提升升柱柱效效。对对于于空空心心毛毛细细管管柱，无涡流扩散，即柱，无涡流扩散，即A=0。流动方向流动方向第17页第17页2）分子扩散项）分子扩散项(Longitudinal diffusion term,B/u)纵纵向向分分子子扩扩散散是是由由于于浓浓度度梯梯度度引引起起。当当样样品品被被注注入入色色谱谱柱柱时时，它它呈呈“塞塞子子”状状分分布布。伴伴随随流流动动相相推推动动，“塞塞子子”因因浓浓度度梯梯度度而而向向前前后后自自发发地地扩扩散散，使使谱峰展宽。其大小为谱峰展宽。其大小为B=2 D 称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散阻碍情况；称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散阻碍情况；D组分在流动相中扩散系数。组份为气体或液体时，分别以组分在流动相中扩散系数。组份为气体或液体时，分别以Dg或或Dm表示；表示；讨论：讨论：q 分子量大组分，分子量大组分，Dg小，即小，即B小小q Dg 随柱温升高而增长，随柱压减少而减小；随柱温升高而增长，随柱压减少而减小；q 流动相分子量大，流动相分子量大，Dg 小，即小，即 B 小；小；q u 增长，组份停留时间短，纵向扩散小；增长，组份停留时间短，纵向扩散小；（B/u）q 对于液相色谱，因对于液相色谱，因Dm 较小，较小，B 项可勿略。项可勿略。球状颗粒；球状颗粒；大分子量流动相；大分子量流动相；适当增长流速；适当增长流速；短柱；短柱；低温。低温。第18页第18页3）传质阻力项）传质阻力项(Mass-transfer term,Cu)因因传传质质阻阻力力存存在在，使使分分派派不不能能“瞬瞬间间”达达至至平平衡衡，因因此此产产生生峰峰形形展展宽宽。气气相相色色谱谱以以气气体体为为流流动动相相，液液相相色色谱谱以以液液体体为为流流动动相相，两两者者传传质质过过程程不不完完全全相相同同。下面分别作讨论。下面分别作讨论。a）气液色谱：传质阻力项）气液色谱：传质阻力项C包括气相传质阻力系数包括气相传质阻力系数Cs和液相传质阻力系数和液相传质阻力系数Cl。流动相流动相固液界面固液界面固定液固定液组分分子组分分子ClCg讨论：讨论：F 减小填充颗粒直径减小填充颗粒直径dp；F 采用分子量小流动相，使采用分子量小流动相，使Dg增长；增长；F 减小液膜厚度减小液膜厚度df，Cl下降。下降。但此时但此时k又减小。又减小。因此，当保持固定液含量不变时，可通过因此，当保持固定液含量不变时，可通过 增长固定液载体比表面来减少增长固定液载体比表面来减少df。但比。但比 表面过大又会因吸附过强使峰拖尾。表面过大又会因吸附过强使峰拖尾。F 增长柱温，可增长增长柱温，可增长Dl，但，但k值也减小，为保值也减小，为保 持适当持适当Cl值，应控制柱温。值，应控制柱温。第19页第19页b）液液液液色色谱谱：传传质质阻阻力力项项C包包括括流流动动相相传传质质阻阻力力系系数数Cm和和固固定定相相传传质质阻阻力力系系数数Cs。讨论：讨论：v 流动相传质阻力包括两方面：流动相中传质阻力流动相传质阻力包括两方面：流动相中传质阻力Cm、滞留流动相传、滞留流动相传 质阻力质阻力Cs。分别与填充物大小。分别与填充物大小 dp、扩散系数、扩散系数(Dm)、微孔大小及其数量等、微孔大小及其数量等 相关。相关。因此，减少流动相传质阻力办法有：细颗粒固定相、增长组分在因此，减少流动相传质阻力办法有：细颗粒固定相、增长组分在 固定相和流动相中扩散系数固定相和流动相中扩散系数D、适当减少线速度、短柱。、适当减少线速度、短柱。v 固定相传质阻力与液膜厚度固定相传质阻力与液膜厚度df、保留因子、保留因子 k 和扩散系数和扩散系数Ds等相关。等相关。因因此此，减减少少固固定定相相传传质质阻阻力力办办法法有有：与与气气液液色色谱谱中中液液相相传传质质阻阻力力表表述述相同。相同。sm第20页第20页4）流速）流速u 由由van Deemter方程方程 H=A+B/u+Cu知道：知道：当当u一一定定期期，仅仅在在A、B、C较较小小时时，H较较小小，柱柱效效较较高高；反反之之则则柱柱效效较较低低，色谱峰将展宽。色谱峰将展宽。以以u对对H作图，可得作图，可得H-u曲线（如图），从该曲线得到：曲线（如图），从该曲线得到：涡流扩散项涡流扩散项A与流速与流速u无关；无关；低流速区低流速区(u小小)，B/u大，分子扩散项占主导，大，分子扩散项占主导，此时选择分子量大气体如此时选择分子量大气体如N2和和Ar为载气，可为载气，可 减小扩散，提升柱效；减小扩散，提升柱效；高流速区高流速区(u大大)，Cu大，传质阻力项占主导，大，传质阻力项占主导，此时选择分子量小气体如此时选择分子量小气体如H2和和He为载气，为载气，可增长扩散系数，提升柱效；可增长扩散系数，提升柱效；曲线最低点相应最佳线速曲线最低点相应最佳线速uopt()下下 最小板高最小板高Hmin()；LCHmin和和uopt均比均比GC小一个数量级，即在小一个数量级，即在 LC中，较低流速可取得较大柱效。中，较低流速可取得较大柱效。板高，板高，H(cm)HminA+B/u+CuCmuCsuAB/u第21页第21页5）固定相颗粒大小对板高影响）固定相颗粒大小对板高影响 试试验验表表明明，颗颗粒粒越越细细，板板高高越越小小，受受线线速速影影响响越越小小。即即，在在HPLC分分析析中中采采用细粒作固定相理论依据！用细粒作固定相理论依据！但颗粒细造成柱流速慢，当采用高压技术，才干实现但颗粒细造成柱流速慢，当采用高压技术，才干实现HPLC分析要求。分析要求。上上面面分分别别简简介介了了影影响响色色谱谱分分离离基基本本原原理理以以及及影影响响柱柱效效各各种种原原因因，但但是是如如何何从从总总体体上上定定量量描描述述色色谱谱分分离离效效能能？如如何何将将各各种种影影响响原原因因对对分分离离影影响响定定量量地地表表述述出来呢？出来呢？板高板高,H(cm)第22页第22页15.4 分离度及色谱分离方程分离度及色谱分离方程一、分离度一、分离度(Resolution,R)同同时时反反应应色色谱谱柱柱效效能能和和选选择择性性一一个个综综合合指指标标。也也称称总总分分离离效效能能指指标标或或分分辨辨率率。其定义为：。其定义为：利用此式，可直接从利用此式，可直接从色谱流出曲线上求出分离度色谱流出曲线上求出分离度R。R 越越大大，相相邻邻组组分分分分离离越越好好。当当R=1.5时时，分分离离程程度度可可达达99.7%，因因此此R=1.5通惯用作是否分开判据。通惯用作是否分开判据。第23页第23页R=1.5R=0.75R=1.0响应信号保留时间保留时间 t,min第24页第24页二、色谱分离方程二、色谱分离方程 R 定定义义并并未未反反应应影影响响分分离离度度各各种种原原因因。也也就就是是说说，R 未未与与影影响响其其大大小小原原因因：柱效柱效n、选择因子、选择因子 和保留因子和保留因子 k 联系起来。联系起来。对对于于相相邻邻难难分分离离组组分分，由由于于它它们们分分派派系系数数 K 相相差差小小，可可合合理理假假设设k1 k2=k，W1 W2=W。因此可导出。因此可导出R与与n（neff）、）、和和 k 关系：关系：第25页第25页附附,详细推导过程下列：详细推导过程下列：第26页第26页相关色谱方程讨论：相关色谱方程讨论：1）分离度）分离度R与柱效关系与柱效关系 分离度分离度R与理论塔板数与理论塔板数n相关，即相关，即R受热力学性质影响。受热力学性质影响。对对具具一一定定相相对对保保留留值值 物物质质对对，R与与有有效效塔塔板板数数neff相相关关，阐阐明明neff可可正正确确代代表表柱效能。柱效能。由色谱方程可得：由色谱方程可得：因因此此可可通通过过增增长长柱柱长长提提升升分分离离度度。然然而而，分分析析时时间间也也相相应应增增长长，且且峰峰宽宽也也展展宽！为提升柱效，用减小塔板高度宽！为提升柱效，用减小塔板高度 H 办法比增长柱长更有效。办法比增长柱长更有效。2）分离度）分离度R与保留因子与保留因子 关系关系 越越大大，柱柱选选择择性性越越好好，对对分分离离有有利利。微微小小改改变变可可引引起起 R 较较大大改改变变。如如，当当 从从1.01增长至增长至1.10(增长增长9%)时，时，R 则增长则增长 9 倍倍(但但 1.5,R增长不大增长不大)。改变改变 办法有：减少柱温、办法有：减少柱温、改变流动相及固定相性质和构成改变流动相及固定相性质和构成。3）分离度）分离度R 分派比分派比 k 关系关系 k 增长，分离度增长，分离度R 增长，但当增长，但当k10，则，则R增长不明显。通常增长不明显。通常k在在210之间。之间。改改变变 k 办办法法有有：适适当当增增长长柱柱温温(GC)、改改变变流流动动相相性性质质和和构构成成(LC)以以及及固固定定相相含量。含量。第27页第27页70%CH3OH+30H2O60%CH3OH+40H2O50%CH3OH+50H2O40%CH3OH+60H2O溶剂溶剂(流动相流动相)构成对色谱分离影响构成对色谱分离影响(梯度淋洗梯度淋洗)1：9,10-蒽醌；蒽醌；2：2-甲基甲基-9,10-蒽醌；蒽醌；3：2-乙基乙基-9,10-蒽醌蒽醌4：1,4-二甲基二甲基-9,10-蒽醌；蒽醌；5：2-特丁基甲基特丁基甲基-9,10-蒽醌；蒽醌；改变构成使 k 最佳第28页第28页色谱分离中问题色谱分离中问题 由由于于分分析析物物构构成成复复杂杂，以以某某一一构构成成流流动动相相也也许许使使部部分分待待测测物物得得到到好好分分离离，但但同同时时出出使使其其它它待待测测物物分分离离不不令令人人满满意意！实实际际工工作作中中采采用用程程序序升升温温（GC）和和梯梯度度淋淋洗洗（LC）来处理这个问题。来处理这个问题。第29页第29页三、分析时间三、分析时间 t 分析时间通常指最后一个组分出峰时间。分析时间通常指最后一个组分出峰时间。由下列三式：由下列三式：得到得到 可可见见，分分析析时时间间与与R，k、H/u等等参参数数相相关关。R增增长长1倍倍，分分析析时时间间则则是是本来本来 4 倍。倍。实际工作中，即要能取得有效分离，又要在较短时间内完毕份析。实际工作中，即要能取得有效分离，又要在较短时间内完毕份析。第30页第30页概念、表示办法及计算公式汇总概念、表示办法及计算公式汇总表表-1第31页第31页表表-2第32页第32页例例：两两物物质质A和和B在在30cm长长色色谱谱柱柱上上保保留留时时间间分分别别为为16.4和和17.63min，有有一一不不与与固固定定相相作作用用物物质质，其其在在此此柱柱上上保保留留时时间间为为1.30 min。物物质质A和和B峰底宽分别为峰底宽分别为1.11和和1.21min。试问：。试问：1）柱分辨率）柱分辨率R；2）柱平均理论塔板数）柱平均理论塔板数nav3）平均塔板高度）平均塔板高度Hav4）若要求）若要求R达到达到1.5，则柱长至少应为多少？，则柱长至少应为多少？5）使用上述较长柱进行分析时，其分析时间为多长？）使用上述较长柱进行分析时，其分析时间为多长？6）不不增增长长柱柱长长，要要求求在在本本来来分分析析时时间间内内R达达到到1.5，该该柱柱塔塔板板高高度度应应为为多少？多少？第33页第33页1）2）3）4）第34页第34页5）6）第35页第35页