03红细胞血型检测.pptx

关爱生命 呵护健康第二章第二章 红细胞血型检测红细胞血型检测黄冈市中心医院 肖 华关爱生命 呵护健康目录目录第一节第一节 输血前免疫学检查输血前免疫学检查第二节第二节 盐水介质试验技术盐水介质试验技术第三节第三节 酶处理试验技术酶处理试验技术第四节第四节 抗球蛋白试验技术抗球蛋白试验技术第五节第五节 聚凝胺介质试验技术聚凝胺介质试验技术第六节第六节 微柱凝集试验技术微柱凝集试验技术第七节第七节 吸收放散技术吸收放散技术第八节第八节 凝集试验技术凝集试验技术第九节第九节 红细胞血型分子生物学检测技术红细胞血型分子生物学检测技术关爱生命 呵护健康学习要求学习要求1.输血前检查主要包括哪些内容？2.受血者标本接受时的注意事项有哪些？3.ABO血型和RhD血型鉴定时的注意事项有哪些？4.抗体筛选的目的和意义是什么？5.交叉配血试验的影响因素有哪些？6.抗球蛋白试验的临床应用有哪些方面？7.微柱凝聚试验技术的原理是什么？8.常见的吸收放散试验的方法有哪些？9.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？关爱生命 呵护健康 输血是临床上作为治疗或辅助治疗的手输血是临床上作为治疗或辅助治疗的手段，但不适当的血液制品输注将造成不良后段，但不适当的血液制品输注将造成不良后果，严重者可危急生命。因此在输血前，严果，严重者可危急生命。因此在输血前，严格按照相关程序对受血者和供血者的血液进格按照相关程序对受血者和供血者的血液进行准确的输血前血型血清学检查才能保证受行准确的输血前血型血清学检查才能保证受血者的安全。血者的安全。第一节第一节 输血前免疫学检查输血前免疫学检查关爱生命 呵护健康目的：目的：输入的血液成分在受血者的体内发挥其有效作用输入的血液成分在受血者的体内发挥其有效作用.在正常情况下，输入的红细胞在受血者体内不溶血，输入的在正常情况下，输入的红细胞在受血者体内不溶血，输入的的血浆成分不破坏受血者的红细胞，即输入的血液与受血者血液的血浆成分不破坏受血者的红细胞，即输入的血液与受血者血液在免疫血液学方面在免疫血液学方面“相容相容”，才能使受血者获益。，才能使受血者获益。关爱生命 呵护健康主要程序：主要程序：1 1、受血者血液标本的处理；、受血者血液标本的处理；2 2、ABOABO血型和血型和RhDRhD血型定型；血型定型；3 3、红细胞同种抗体筛查和鉴定；、红细胞同种抗体筛查和鉴定；4 4、交叉配血试验；、交叉配血试验；5 5、血小板输注前的抗体检查和配合试验；、血小板输注前的抗体检查和配合试验；6 6、不规则抗体的筛选和鉴定；、不规则抗体的筛选和鉴定；7 7、交叉配血结果的报告和发血等。、交叉配血结果的报告和发血等。关爱生命 呵护健康一、受血者标本的处理一、受血者标本的处理（一）（一）标本的采集标本的采集 输血除了需要达到预期的治疗效果外，必须确保输血安全。血输血除了需要达到预期的治疗效果外，必须确保输血安全。血样由临床护士完成，应严格遵守一次只能为一位受血抽取标本，样由临床护士完成，应严格遵守一次只能为一位受血抽取标本，标本不得从输液管或输液侧静脉中抽取。标本不得从输液管或输液侧静脉中抽取。（二）标本的接收（二）标本的接收 输血科技师接收血样标本时，应认真核对受血者的相关信息，尽输血科技师接收血样标本时，应认真核对受血者的相关信息，尽可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况。如果有可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况。如果有输血史，这有必要进一步了解最后一次输血的日期，若输血史，这有必要进一步了解最后一次输血的日期，若3 3个月内个月内输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消失，可能依然存输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消失，可能依然存在于血液循环中，导致血型定型试验中出现混合凝集的结果。在于血液循环中，导致血型定型试验中出现混合凝集的结果。关爱生命 呵护健康（三）标本的要求（三）标本的要求1.对输血前检查的血液标本应严格要求能代表受血者当前的免疫对输血前检查的血液标本应严格要求能代表受血者当前的免疫学状况，标本还需经鉴定和标记，保证其准确无误地来自受血学状况，标本还需经鉴定和标记，保证其准确无误地来自受血者和供血者，应和血液申请单上的内容一致。者和供血者，应和血液申请单上的内容一致。2.防止受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过程中发生溶防止受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过程中发生溶血则不能使用。血则不能使用。3.受血者配血试验对的血液标本必须是输血前受血者配血试验对的血液标本必须是输血前3天采集的天采集的4.若受血者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮等治疗，应注意洗涤若受血者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮等治疗，应注意洗涤被检红细胞。被检红细胞。5.每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于28至少至少7天。天。关爱生命 呵护健康二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 关爱生命 呵护健康关爱生命 呵护健康 上述两种试验可以互相验证，如果两个结果不符，应通过上述两种试验可以互相验证，如果两个结果不符，应通过进一步试验确认血型。进一步试验确认血型。新生儿和出生后新生儿和出生后6个月之内的婴儿由于血液中无个月之内的婴儿由于血液中无ABO抗体抗体或抗体很弱，该人群可只做正定型。新生儿血浆中可能存在来或抗体很弱，该人群可只做正定型。新生儿血浆中可能存在来自母体的抗体，应注意鉴别。自母体的抗体，应注意鉴别。ABO定型有时会出现异常结果，其主要原因有技术和操定型有时会出现异常结果，其主要原因有技术和操作失误，还有受血者方面的因素。作失误，还有受血者方面的因素。关爱生命 呵护健康1.ABO1.ABO定型定型 最适的反应温度为最适的反应温度为44，但在室温反应良好，所以常，但在室温反应良好，所以常规的规的ABOABO定型试验仅在室温进行。定型试验仅在室温进行。(1)(1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍被认为是最可定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍被认为是最可信赖的信赖的ABOABO定型方法。定型方法。1)1)定型试剂：有些定型试剂：有些ABOABO血型诊断试剂是以人的血清汇聚而制成的，血型诊断试剂是以人的血清汇聚而制成的，但必须具备以下条件：但必须具备以下条件：第一，高效价第一，高效价(1(1：128)128)的的IgMIgM抗抗A A或抗或抗B B。第二，具较好的亲和性并不含冷凝集素。第二，具较好的亲和性并不含冷凝集素。第三，必需具有检测第三，必需具有检测A2A2，A2BA2B血型的能力。血型的能力。第四，血清必须通过第四，血清必须通过HIVHIV，HCVHCV，HBVHBV等检查或经病毒灭活。另等检查或经病毒灭活。另外一些外一些ABOABO定型试剂是由来自培养细胞株的单克隆抗体所制成。定型试剂是由来自培养细胞株的单克隆抗体所制成。关爱生命 呵护健康正反定型不符分析的基本程序正反定型不符分析的基本程序1、出现正反定型不符时，首先重复试验；、出现正反定型不符时，首先重复试验；2、重新采集血液标本；、重新采集血液标本；3、查询受血者既往病史及输血史和用药史等；、查询受血者既往病史及输血史和用药史等；4、多次洗涤标本红细胞或试剂红细胞，应换用新开启的确定、多次洗涤标本红细胞或试剂红细胞，应换用新开启的确定为无细菌污染的生理盐水洗涤红细胞；为无细菌污染的生理盐水洗涤红细胞；5、应用抗、应用抗-AB、抗、抗-A1或抗或抗-H检测红细胞；检测红细胞；6、分析、分析O型筛选细胞检测结果，确定是否是同种异型或冷自型筛选细胞检测结果，确定是否是同种异型或冷自身抗体干扰正反定型结果。身抗体干扰正反定型结果。关爱生命 呵护健康ABO正反定型的临床应用正反定型的临床应用1、实施输血治疗的首要步骤；、实施输血治疗的首要步骤；2、组织器官移植；、组织器官移植；3、母、子、母、子ABO系统血型不合造成的新生儿溶血病的筛查。系统血型不合造成的新生儿溶血病的筛查。关爱生命 呵护健康ABO血型正反定型的意义血型正反定型的意义：1、反定型能够复检正定型血型结果的准确性，纠正漏检、反定型能够复检正定型血型结果的准确性，纠正漏检、误报；误报；2、发现正定型时难以发现的具有弱抗原的亚型；、发现正定型时难以发现的具有弱抗原的亚型；3、能够纠正某些患者因疾病原因造成的红细胞抗原减弱而、能够纠正某些患者因疾病原因造成的红细胞抗原减弱而造成的血型错误；造成的血型错误；4、能够排除获得性抗原（如类、能够排除获得性抗原（如类B抗原）和冷凝集现象对红抗原）和冷凝集现象对红细胞定型的干扰；细胞定型的干扰；5、发现一些亚型中的不规则抗体。、发现一些亚型中的不规则抗体。关爱生命 呵护健康2)ABO2)ABO亚型的鉴定：亚型的鉴定：1 1、常见亚型、常见亚型A A亚型有：亚型有：A A2 2、A A3 3、A AX X、A AM M、A AY Y B B亚型有：亚型有：B B2 2、B B3 3、B BX X、B BM M ABAB亚型有：亚型有：A A2 2B B、A A3 3B B、A AX XB B、ABAB2 2、ABAB3 3、CISCISAB AB 2 2、ABOABO亚型的鉴定通常使用下列试剂亚型的鉴定通常使用下列试剂 抗抗A A、抗、抗B B、抗、抗A A1 1、抗、抗H H、抗、抗A AB B、A A1 1红细胞、红细胞、A A2 2红细胞、红细胞、B B型红型红细胞和细胞和O O型红细胞。型红细胞。有些工作者在定型试验中，常规地选择应用抗有些工作者在定型试验中，常规地选择应用抗ABAB抗血清，抗血清，以避免错误地把弱反应性以避免错误地把弱反应性A A或或B B型红细胞分类为型红细胞分类为O O型。一般抗型。一般抗ABAB试剂对试剂对AxAx型红细胞可增加凝集反应的强度。型红细胞可增加凝集反应的强度。关爱生命 呵护健康(一一)ABO)ABO定型试验中的常见问题：造成这种正反定型不一致的定型试验中的常见问题：造成这种正反定型不一致的原因主要有：原因主要有：1)1)技术和管理错误：这是技术和管理错误：这是ABOABO定型中产生异常结果的主要原因，定型中产生异常结果的主要原因，包括：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心包括：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。2)2)血清异常：血清蛋白引起缗钱状形成，影响反定型结果血清异常：血清蛋白引起缗钱状形成，影响反定型结果3)3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。质的试剂中，可发生凝集。4)4)异常基因型：异常基因型：ABOABO亚型的检查中，亚型的检查中，A A、B B抗原可能为弱抗原，抗原可能为弱抗原，难以检出。难以检出。关爱生命 呵护健康5)5)近期输血：试验前曾输入过其它近期输血：试验前曾输入过其它ABOABO血型不一致的血液，使血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外混合外观凝集观凝集”现象。现象。6)6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现型时可以出现“混合外观凝集混合外观凝集”现象。现象。7)7)疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患者中，者中，ABOABO血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。8)8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。发生多凝集现象。9)9)获得性获得性B B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类类B”B”的活性。的活性。关爱生命 呵护健康10)10)血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的浓度很高，可中和抗浓度很高，可中和抗A A和抗和抗B B定型试剂，要得到正确的正定定型试剂，要得到正确的正定型结果，必须洗涤红细胞多次。型结果，必须洗涤红细胞多次。11)11)近期内进行大量的血浆置换治疗：由于使用大量的非同近期内进行大量的血浆置换治疗：由于使用大量的非同型的血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供的抗型的血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供的抗A A或抗或抗B B抗体，造成反定型错误。抗体，造成反定型错误。12)12)异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致缗钱状形成，造成假凝比例和高浓度的纤维蛋白原等导致缗钱状形成，造成假凝集现象。集现象。13)13)不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有ABOABO血型抗体以血型抗体以外的不规则抗体，与试剂红细胞上其他血型抗原系统的抗外的不规则抗体，与试剂红细胞上其他血型抗原系统的抗原起反应。原起反应。关爱生命 呵护健康14)14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减丙种球蛋白量减低低)病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。凝集或弱凝集反应。15)15)药物等因素：药物、右旋糖醉及静脉注射某些造影剂可药物等因素：药物、右旋糖醉及静脉注射某些造影剂可引起红细胞凝集或类似凝集。引起红细胞凝集或类似凝集。16)16)年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的结果。结果。17)17)防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中的成分或对防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中的成分或对混悬介质的抗体，导致混悬介质的抗体，导致ABOABO定型差错定型差错。关爱生命 呵护健康（二）（二）Rh(D)Rh(D)定型和定型试验中应注意的问题：定型和定型试验中应注意的问题：RhRh定型主要鉴定型主要鉴定定D D抗原（抗原（IgGIgG抗抗D D和和IgMIgM抗抗D D）。）。RhRh系统是最为复杂得多一个系统，抗原达系统是最为复杂得多一个系统，抗原达5050多种，涉及临多种，涉及临床的主要有床的主要有D D、C C、c c、E E、e e五个抗原，其中五个抗原，其中D D抗原的免疫原性抗原的免疫原性最强，仅次于最强，仅次于A A或或B B抗原。抗原。DEcCeDEcCe1 1、RhRh定型定型 血型鉴定方法有：玻片法、试管法、微量板法、血型鉴定方法有：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等。目前大部分医院都使用微柱凝胶卡式血型鉴微柱凝胶法等。目前大部分医院都使用微柱凝胶卡式血型鉴定，方法简便快捷，准确度较高。定，方法简便快捷，准确度较高。关爱生命 呵护健康关爱生命 呵护健康(1)(1)导致导致RhRh血型鉴定可能出现假阳性的原因：血型鉴定可能出现假阳性的原因：1)1)受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子。红细胞凝集的因子。2)2)受检细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试受检细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起缗钱状形成。剂会引起缗钱状形成。3)3)标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维蛋白凝标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。块，误判为阳性。4)4)定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，造成定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。假阳性定型结果。5)5)多凝集细胞造成定型的假阳性。多凝集细胞造成定型的假阳性。6)6)鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。关爱生命 呵护健康(2)(2)可能出现假阴性的原因可能出现假阴性的原因1)1)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。2)2)漏加或错加定型血清。漏加或错加定型血清。3)3)定型血清的使用方法错误，没有按说明书进行。定型血清的使用方法错误，没有按说明书进行。4)4)离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微弱的凝集。离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微弱的凝集。5)5)抗血清保存不当，导致失效。抗血清保存不当，导致失效。关爱生命 呵护健康(三三)弱弱D D型型(Du(Du型型)血型及其鉴定：血型及其鉴定：DuDu型抗原是型抗原是RhO(D)RhO(D)的弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗的弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗D D试剂不产生直接凝集反应，而与部分的试剂不产生直接凝集反应，而与部分的IgGIgG抗抗D D血型用间接血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。因此当我们初次得到抗球蛋白试验反应阳性。因此当我们初次得到RhRh阴性结果时，阴性结果时，必须进行作必须进行作RhRh阴性确认试验，即用三种不同批号的阴性确认试验，即用三种不同批号的IgGIgG抗抗D D定定型，如果全部阴性方可认为该被检者为型，如果全部阴性方可认为该被检者为RhRh阴性，否则，只要阴性，否则，只要有一批为阳性，则可认为是有一批为阳性，则可认为是DuDu型。型。弱弱D D人群作为献血者按照人群作为献血者按照RhDRhD阳性对待，其血液只能给阳性对待，其血液只能给RhRh阳性阳性受血者输注；作为受血者按照受血者输注；作为受血者按照RhDRhD阴性对待，只能接受阴性对待，只能接受RhDRhD阴阴性血液。性血液。关爱生命 呵护健康三、不规则抗体筛选和鉴定三、不规则抗体筛选和鉴定一、一、概念：概念：1 1、不规则抗体：、不规则抗体：是指血清中抗是指血清中抗-A-A、抗、抗-B-B以外的其他血型抗体，以外的其他血型抗体，也称意外抗体。不规则抗体包括同种抗体和自身抗体。也称意外抗体。不规则抗体包括同种抗体和自身抗体。2 2、自身抗体：、自身抗体：受血者体内产生的抗体，针对自己本身的红细受血者体内产生的抗体，针对自己本身的红细胞抗原这类抗体不仅仅与自身红细胞凝集，通常也与多数红胞抗原这类抗体不仅仅与自身红细胞凝集，通常也与多数红细胞发生凝集反应。细胞发生凝集反应。3 3、同种抗体：、同种抗体：不是针对自身抗原，而是与同种异基因的红细不是针对自身抗原，而是与同种异基因的红细胞发生反应，即与某些献血者的红细胞出现凝集反应。胞发生反应，即与某些献血者的红细胞出现凝集反应。关爱生命 呵护健康二、二、不规则抗体的筛查方法不规则抗体的筛查方法抗体筛选试验的原则是让受检的血清与已知血型的试剂红抗体筛选试验的原则是让受检的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞起反应，以发现在细胞即筛选红细胞起反应，以发现在3737中有反应的抗体中有反应的抗体1.1.盐水介质法：主要用于盐水介质法：主要用于IgMIgM类抗体的筛查。类抗体的筛查。优点是：方法简单、操作简单、成本低廉。优点是：方法简单、操作简单、成本低廉。缺点是：灵敏度低缺点是：灵敏度低2.2.聚凝胺法：优点：与水盐介质法比灵敏度有所提高。聚凝胺法：优点：与水盐介质法比灵敏度有所提高。3.3.抗球蛋白试验：缺点：操作繁琐、工作量大、耗时等抗球蛋白试验：缺点：操作繁琐、工作量大、耗时等4.4.酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测。但可能酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测。但可能 会破坏有些抗原，影响检测。目前临床是已不用会破坏有些抗原，影响检测。目前临床是已不用5.5.微柱凝胶卡式检测法微柱凝胶卡式检测法关爱生命 呵护健康三、不规则抗体的鉴定三、不规则抗体的鉴定抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是2 2或或3 3个人份的个人份的O O型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：以下常见的抗原：D D、C C、E E、c c、e e、M M、N N，条件不足的实，条件不足的实验室不一定具备验室不一定具备LuaLua、V V、CwCw、KpaKpa、Jsa Jsa 类的抗原。类的抗原。一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。抗体鉴定实验包含以下主要内容：抗体鉴定实验包含以下主要内容：(1)(1)自身细胞检查：观察患者自身细胞检查：观察患者(受者受者)的血清与患者的血清与患者(受者受者)自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时存在。抗体和同种抗体二者同时存在。(2)(2)谱红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用各种抗体谱红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用各种抗体检查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。检查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。关爱生命 呵护健康抗体鉴定试验结果的解释及处理：抗体鉴定试验结果的解释及处理：1.1.与谱细胞反应明显，确定为单一抗体或无法确定为单一与谱细胞反应明显，确定为单一抗体或无法确定为单一抗体，应加以鉴别。抗体，应加以鉴别。2.2.与谱细胞呈弱反应，结果不明确与谱细胞呈弱反应，结果不明确（1 1）分析结果：）分析结果：是否符合剂量效应是否符合剂量效应 是否有某些是否有某些个体差异抗原的抗体个体差异抗原的抗体 谱细胞是否新鲜谱细胞是否新鲜（2 2）改变试验方法）改变试验方法:使用高灵敏度的方法重复试验使用高灵敏度的方法重复试验 添加试剂后重复实验添加试剂后重复实验带抗体增强后重复试验带抗体增强后重复试验适当增适当增加血清与红细胞比例，适当增加孵育时间加血清与红细胞比例，适当增加孵育时间关爱生命 呵护健康3.3.与所有谱细胞反应，自身细胞阴性与所有谱细胞反应，自身细胞阴性（1 1）强度不一致：可能存在混合抗体）强度不一致：可能存在混合抗体（2 2）强度一致：）强度一致：抗体可能为专于抗体可能为专于O O细胞反应的抗体（如：抗细胞反应的抗体（如：抗-I-I、抗、抗-H-H、抗抗-HI-HI）可能针对高频抗原的抗体可能针对高频抗原的抗体可能针对谱细胞的抗体可能针对谱细胞的抗体4.4.与所有谱细胞反应，自身细胞阳性与所有谱细胞反应，自身细胞阳性（1 1）存在自身抗体）存在自身抗体（2 2）同种和自身抗体同时存在）同种和自身抗体同时存在（3 3）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集红细胞）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集红细胞关爱生命 呵护健康（4 4）假凝剂：在干扰因子的作用下一可造成红细胞假凝）假凝剂：在干扰因子的作用下一可造成红细胞假凝集集（5 5）酶引起的多凝集）酶引起的多凝集（6 6）补体的影响）补体的影响5.与谱细胞不反应，自身细胞阳性 可能是自身抗体或可能是自身抗体或C C 阳性阳性关爱生命 呵护健康四、抗体筛查和鉴定的影响因素四、抗体筛查和鉴定的影响因素1.1.抗体筛查和鉴定细胞的质量抗体筛查和鉴定细胞的质量 筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原。筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原。谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。在选择不规则抗体筛查或鉴定细胞时，应符合本地区不规在选择不规则抗体筛查或鉴定细胞时，应符合本地区不规则抗体分布的特点。则抗体分布的特点。2.2.试验方法试验方法 IgMIgM抗体在抗体在4 4，凝集强度明显大于室温，凝集强度明显大于室温，3737会有减弱会有减弱3.3.抗体的特异性抗体的特异性抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体体筛查细胞漏检筛查细胞漏检ABOABO亚型抗体（如抗亚型抗体（如抗-A-A）关爱生命 呵护健康五五 不规则抗体鉴定时遇见的的问题不规则抗体鉴定时遇见的的问题1 1.不规则抗体筛查阴性，输血后发现溶血不规则抗体筛查阴性，输血后发现溶血（1 1）交叉配血假阴性）交叉配血假阴性（2 2）抗球蛋白试验不规则抗体筛查假阴性）抗球蛋白试验不规则抗体筛查假阴性试剂保存不当试剂保存不当洗涤不充分洗涤不充分实验操作实验操作红细胞浓度过红细胞浓度过高造成凝集减弱或红细胞浓度过低造成凝集不易被观察高造成凝集减弱或红细胞浓度过低造成凝集不易被观察到到2.2.不规则抗体筛查阳性，抗体特异性难以鉴定不规则抗体筛查阳性，抗体特异性难以鉴定（1 1）抗体筛查假阳性：）抗体筛查假阳性：离心不当离心不当试管污染试管污染硅胶管硅胶管引起的凝集引起的凝集（2 2）谱细胞单一：应采用）谱细胞单一：应采用3 3个以上不同供应商的谱细胞系，个以上不同供应商的谱细胞系，排查抗体的特异性。排查抗体的特异性。关爱生命 呵护健康四、交叉配血试验四、交叉配血试验（一）要求和内容（一）要求和内容 交叉配血的要求：交叉配血的要求：主侧配血要求：主侧配血要求：主侧配血要求：主侧配血要求：绝对不可以有凝集或绝对不可以有凝集或绝对不可以有凝集或绝对不可以有凝集或溶血现象。溶血现象。溶血现象。溶血现象。次测配血要求：次测配血要求：次测配血要求：次测配血要求：供血者血清加受血者供血者血清加受血者供血者血清加受血者供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，红细胞在允许范围内，红细胞在允许范围内，红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但可以有凝集现象，但可以有凝集现象，但可以有凝集现象，但不可以有溶血不可以有溶血不可以有溶血不可以有溶血。凝凝集集不不凝凝集集关爱生命 呵护健康 交叉配血试验的内容交叉配血试验的内容患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧主侧配血主侧配血主侧配血主侧配血 用患者血清与供用患者血清与供用患者血清与供用患者血清与供者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验次测配血次测配血次测配血次测配血 供血者血清与患供血者血清与患供血者血清与患供血者血清与患者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验关爱生命 呵护健康交叉配血的目的交叉配血的目的 交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是为了防止输血后产生溶血性反应。为了防止输血后产生溶血性反应。为了防止输血后产生溶血性反应。为了防止输血后产生溶血性反应。尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长的存活时间。的存活时间。的存活时间。的存活时间。关爱生命 呵护健康（二）结果的解释及处理（二）结果的解释及处理1.抗体筛查阴性，交叉配血相容：抗体筛查阴性，交叉配血相容：绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容的。绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容的。2.抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性（1）复查血型）复查血型（2）主侧凝集类）主侧凝集类B抗原抗原（3）血清中可能含有一种）血清中可能含有一种ABO抗体，必要时可以做抗体，必要时可以做ABO亚型鉴定亚型鉴定（4）受血者血清中含有同种抗体）受血者血清中含有同种抗体关爱生命 呵护健康3.3.抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性（1 1）自身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗）自身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗体。体。（2 2）自身对照试验阳性：受血者血清内可能有自身抗）自身对照试验阳性：受血者血清内可能有自身抗体或同时存在不规则抗体。体或同时存在不规则抗体。（三）影响因素（三）影响因素 离子干扰离子干扰 温度温度 操作不规范操作不规范 离心不当离心不当 关爱生命 呵护健康第二节第二节 盐水介质实验技术盐水介质实验技术盐水介质试验技术常用于血型鉴定、血清中盐水介质试验技术常用于血型鉴定、血清中IgMIgM类抗体的类抗体的筛查和鉴定、盐水介质的交叉配血等。筛查和鉴定、盐水介质的交叉配血等。基本方法基本方法1.1.平板法平板法 用于用于ABOABO血型和血型和RhDRhD抗原的定型抗原的定型 特点：简单、快速，但易污染环境。特点：简单、快速，但易污染环境。2.2.试管法试管法 为定型试验方法，也可于半定量试验。为定型试验方法，也可于半定量试验。是输血前检验最常用的试验方法。是输血前检验最常用的试验方法。特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。3.3.微孔板法微孔板法 为定性试验方法。为定性试验方法。关爱生命 呵护健康 盐水介质配血方法盐水介质配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性关爱生命 呵护健康第三节第三节 酶处理实验技术酶处理实验技术原理：在酶的作用下切断带有负电荷的羧基基团原理：在酶的作用下切断带有负电荷的羧基基团的唾液酸，降低的唾液酸，降低ZetaZeta电位，缩短红细胞之间的距电位，缩短红细胞之间的距离。增强离。增强IgGIgG抗体对红细胞的凝集。抗体对红细胞的凝集。常用对的酶：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶常用对的酶：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶关爱生命 呵护健康酶介质配血方法酶介质配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧主次侧主次侧均加酶均加酶关爱生命 呵护健康37水浴水浴30分钟分钟37 37 离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性关爱生命 呵护健康结果的判断结果的判断（1 1）阳性对照管凝集，阴性对照管凝集，被检管凝集为）阳性对照管凝集，阴性对照管凝集，被检管凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。阳性，不出现凝集判定为阴性。（2 2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，实验）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，实验失败分析原因，重新实验。失败分析原因，重新实验。关爱生命 呵护健康第四节抗球蛋白实验技术第四节抗球蛋白实验技术一、基本原理一、基本原理抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（CoombsCoombs实验）实验）主要用于检测血清中的不完全抗体如：主要用于检测血清中的不完全抗体如：IgGIgG、IgAIgA和和（或）补体如：（或）补体如：C3C3、C4C4。在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞出现可见的凝集反应，加入抗球蛋白试剂后，抗球蛋细胞出现可见的凝集反应，加入抗球蛋白试剂后，抗球蛋白分子的白分子的FabFab片段与红细胞表面的受体结合，而产生红细片段与红细胞表面的受体结合，而产生红细胞凝集，因此采用此方法可以检测出血清中是否存在不完胞凝集，因此采用此方法可以检测出血清中是否存在不完全抗体。全抗体。关爱生命 呵护健康抗球蛋白试验原理图抗球蛋白试验原理图关爱生命 呵护健康 二、分类及应用二、分类及应用 抗球蛋白试验抗球蛋白试验直接直接间接间接致敏红细胞的不完全抗体、补体致敏红细胞的不完全抗体、补体血清中的不完全抗体血清中的不完全抗体应用应用HDN的诊断、的诊断、AIHADE的诊断、药物诱发型溶血病的诊断的诊断、药物诱发型溶血病的诊断交叉配血及血型鉴定、器官移植、等交叉配血及血型鉴定、器官移植、等关爱生命 呵护健康 抗球蛋白配血方法抗球蛋白配血方法患患者者献献血血者者主主侧侧次次侧侧37 37水浴水浴30分钟分钟三洗三洗 关爱生命 呵护健康抗球蛋白配血方法抗球蛋白配血方法加加抗抗球球蛋蛋白白离心离心看结果看结果阳阳性性阴阴性性关爱生命 呵护健康三、结果的判断三、结果的判断直接抗球蛋白试验：直接抗球蛋白试验：（1 1）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性。判定为阳性。（2 2）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝 集，须做阴性确认后判定结果。集，须做阴性确认后判定结果。（3 3）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不能发出报告，分析原因后重做试验。信不能发出报告，分析原因后重做试验。关爱生命 呵护健康间接抗球蛋白试验：间接抗球蛋白试验：（1 1）阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管不呈现凝集反）阳性对照管呈现凝集反应，阴性对照管不呈现凝集反应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中应，被检管呈现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中含有抗体。含有抗体。（2 2）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，实）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，实验失败，分析原因重做试验。验失败，分析原因重做试验。关爱生命 呵护健康 四、四、注意事项注意事项（一）直接抗球蛋白试验（一）直接抗球蛋白试验1.抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，避免出现前带现象而误抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，避免出现前带现象而误判为阴性。判为阴性。2.结果判读时应转动拖拉，细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反结果判读时应转动拖拉，细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反应物涂于玻片上，在在显微镜下观察确认阴性。应物涂于玻片上，在在显微镜下观察确认阴性。3.被检标本需用被检标本需用EDTA抗凝，避免出现假阳性；标本不宜久置，防止红抗凝，避免出现假阳性；标本不宜久置，防止红细胞上已致敏的抗体游离到血浆中，造成假阴性或阳性程度降低。细胞上已致敏的抗体游离到血浆中，造成假阴性或阳性程度降低。4.红细胞表面存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。因此受检红细胞一定红细胞表面存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。因此受检红细胞一定要充分洗涤，除去血清蛋白，避免假阴性的产生。要充分洗涤，除去血清蛋白，避免假阴性的产生。5.如需进一步分析体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，可以分别以如需进一步分析体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，可以分别以抗抗IgG、抗、抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。单价抗球蛋白血清进行试验。关爱生命 呵护健康（二）间（二）间接抗球蛋白试验接抗球蛋白试验1.1.红细胞洗涤过程中不宜中途停止，每次加生理盐水前要是红细胞完全悬红细胞洗涤过程中不宜中途停止，每次加生理盐水前要是红细胞完全悬浮；洗涤过程中防止交叉污染；应充分洗涤，避免残留抗体部分中和抗球浮；洗涤过程中防止交叉污染；应充分洗涤，避免残留抗体部分中和抗球蛋白试剂而产生假阴性。蛋白试剂而产生假阴性。2.2.振摇试管不宜用力过大，避免将松散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误振摇试管不宜用力过大，避免将松散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果观察细胞扣是判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果观察细胞扣是否出现缺口来判读。否出现缺口来判读。3.3.离心后应立即看结果，不宜久置。离心后应立即看结果，不宜久置。4.4.致敏时间：致敏时间：30-6030-60分钟，不超过分钟，不超过9090分钟分钟 关爱生命 呵护健康三、抗球蛋白实验的影响因素三、抗球蛋白实验的影响因素一、亲和力一、亲和力 亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段的抗体水平越高亲和力常数越高，抗原抗体反应致