药典无菌检查方法验证及操作要点.pptx

药典无菌检验法方法验证及操作关键点饶春意药典无菌检查方法验证及操作要点第1页n n1 序言序言n n1.1 定义定义 无菌检验法系用于检验药典要求无菌药无菌检验法系用于检验药典要求无菌药品、原料、辅料及其它品种是否无菌一个方品、原料、辅料及其它品种是否无菌一个方法。若供试品符合无菌检验法要求，仅表明法。若供试品符合无菌检验法要求，仅表明了供试品在该检验条件下未发觉微生物污染。了供试品在该检验条件下未发觉微生物污染。药典无菌检查方法验证及操作要点第2页1.2 试验环境条件要求试验环境条件要求 无菌检验应在环境洁净度无菌检验应在环境洁净度10 000级下级下局部洁净度局部洁净度100级单向流空气区域内或隔级单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格恪守无离系统中进行，其全过程必须严格恪守无菌操作，预防微生物污染。单向流空气区、菌操作，预防微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定时按医药工业洁净工作台面及环境应定时按医药工业洁净室室(区区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法现行国家标准进行洁净度验证。隔法现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关要求进行验证，其内部环离系统按相关要求进行验证，其内部环境洁净度须符合无菌检验要求。境洁净度须符合无菌检验要求。药典无菌检查方法验证及操作要点第3页n n2.培养基培养基n n2.1 培养基灭菌培养基灭菌 配制后应采取验证合格灭菌程序灭菌。配制后应采取验证合格灭菌程序灭菌。n n2.2 培养基保留培养基保留 制备好培养基应保留在制备好培养基应保留在225、避光、避光环境。培养基若保留于非密闭容器中，普通在三环境。培养基若保留于非密闭容器中，普通在三周内使用；若保留于密闭容器中普通可在一年内周内使用；若保留于密闭容器中普通可在一年内使用。使用。药典无菌检查方法验证及操作要点第4页n n2.3 培养温度培养温度 硫乙醇酸盐流体培养基置硫乙醇酸盐流体培养基置3035培养。培养。改良马丁培养基置改良马丁培养基置2328培养。培养。2.4 2.4 培养基适用性检验培养基适用性检验 无菌检验用硫乙醇酸盐流体培养基及改良无菌检验用硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基无菌性检验及灵马丁培养基等应符合培养基无菌性检验及灵敏度检验要求。敏度检验要求。2.4.1无菌性检验无菌性检验 每批培养基随机取不少于每批培养基随机取不少于5支支(瓶瓶)，培养，培养14天，应无菌生长。天，应无菌生长。药典无菌检查方法验证及操作要点第5页2.4.2 2.4.2 灵敏度检验灵敏度检验菌种菌种菌种菌种 金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿铜绿铜绿铜绿假假假假单单单单胞菌、胞菌、胞菌、胞菌、枯草芽枯草芽枯草芽枯草芽孢孢孢孢杆菌、生杆菌、生杆菌、生杆菌、生孢孢孢孢梭菌、白色梭菌、白色梭菌、白色梭菌、白色念珠菌、黑曲霉念珠菌、黑曲霉念珠菌、黑曲霉念珠菌、黑曲霉菌株菌株菌株菌株传传传传代次数代次数代次数代次数 不得超出5代培养基接种培养基接种培养基接种培养基接种 每种菌接种至2管对应培养基，另取一支不接种作空白对照，按要求温度时间培养。结结结结果判断果判断果判断果判断 空白对照管应无菌生长，每种菌接种后2管培养基管均生长良好，该培养基灵敏度检验符合要求。药典无菌检查方法验证及操作要点第6页n n金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢枯草芽孢杆菌、生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养杆菌、生孢梭菌接种至硫乙醇酸盐流体培养基中基中3035培养培养3天；天；n n白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基白色念珠菌、黑曲霉接种至改良马丁培养基中中2328培养培养5天。天。药典无菌检查方法验证及操作要点第7页n n3.稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液及其制备方法 0.1蛋白胨水溶液蛋白胨水溶液 pH7.0氯化钠氯化钠蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液药典无菌检查方法验证及操作要点第8页n n4.方法验证试验方法验证试验 目标目标:1)证实所采取方法适合于该药品无证实所采取方法适合于该药品无 菌检验菌检验 2)确认供试品在该试验条件下无抑菌活确认供试品在该试验条件下无抑菌活性或其抑菌活性能够忽略不计。性或其抑菌活性能够忽略不计。3)确保在实际检验条件下，该供试品确保在实际检验条件下，该供试品无菌检验法准确性、有效性和重现性。无菌检验法准确性、有效性和重现性。验证时，按验证时，按“供试品无菌检验供试品无菌检验”要求及以下要求及以下要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。药典无菌检查方法验证及操作要点第9页 4.1 4.1 菌种菌种菌种菌种n n 1 1）金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌）金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26 003(Staphylococcusaureus)CMCC(B)26 003n n 2 2）铜绿假单胞菌）铜绿假单胞菌）铜绿假单胞菌）铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaerugznosa)CMCC(B)10 104 (Pseudomonasaerugznosa)CMCC(B)10 104n n 3 3）枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌）枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)CMCC(B)63 501 (Bacillussubtilis)CMCC(B)63 501n n 4 4）生孢梭菌）生孢梭菌）生孢梭菌）生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)CMCC(B)64 941(Clostridiumsporogenes)CMCC(B)64 941n n 5 5）白色念珠菌）白色念珠菌）白色念珠菌）白色念珠菌 (Candidaalbicans)CMCC(F)98 001 (Candidaalbicans)CMCC(F)98 001n n 6 6）黑曲霉）黑曲霉）黑曲霉）黑曲霉 (Aspergillusniger)CMCC(F)98 003 (Aspergillusniger)CMCC(F)98 003 药典无菌检查方法验证及操作要点第10页n n4.2 菌液制备菌液制备 制备菌液，普通当日使用。制备菌液，普通当日使用。金黄色葡萄球菌（铜绿假单胞菌、枯草芽金黄色葡萄球菌（铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌孢杆菌)营养肉汤（或营养琼脂培养基）营养肉汤（或营养琼脂培养基）生孢梭菌生孢梭菌 硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基 3035培养培养18二十四小二十四小时；时；白色念珠菌白色念珠菌 改良马丁培养基（或改良改良马丁培养基（或改良 马丁琼脂培养基）马丁琼脂培养基）2328培养培养2448小时小时 上述培养物上述培养物 用用0.9无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于含菌数小于l00cfu(菌落形成单位菌落形成单位)菌悬液。菌悬液。药典无菌检查方法验证及操作要点第11页 黑曲霉黑曲霉黑曲霉黑曲霉 改良马丁琼脂斜面培养基上，改良马丁琼脂斜面培养基上，改良马丁琼脂斜面培养基上，改良马丁琼脂斜面培养基上，23 232828培养培养培养培养5 57 7天，天，天，天，加入加入加入加入3 35ml 0.95ml 0.9无菌氯化钠溶液，将孢子洗无菌氯化钠溶液，将孢子洗无菌氯化钠溶液，将孢子洗无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱脱脱脱 吸出孢子悬液吸出孢子悬液吸出孢子悬液吸出孢子悬液(用管口带有薄无菌用管口带有薄无菌用管口带有薄无菌用管口带有薄无菌棉花或纱布能过滤菌丝无菌毛细吸管棉花或纱布能过滤菌丝无菌毛细吸管棉花或纱布能过滤菌丝无菌毛细吸管棉花或纱布能过滤菌丝无菌毛细吸管)至无菌至无菌至无菌至无菌试管内试管内试管内试管内 用用用用0.90.9无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每无菌氯化钠溶液制成每lmllml含孢含孢含孢含孢子数小于子数小于子数小于子数小于l00cful00cfu孢子悬液。孢子悬液。孢子悬液。孢子悬液。药典无菌检查方法验证及操作要点第12页n n4.3 薄膜过滤法薄膜过滤法 将要求量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，将要求量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最终一次冲洗液中加入试验菌（小于在最终一次冲洗液中加入试验菌（小于100cfu），过滤。取出滤膜接种至对应培养），过滤。取出滤膜接种至对应培养基中，或将培养基加至滤筒内。基中，或将培养基加至滤筒内。另取一滤桶，不过滤供试品，其它操作同另取一滤桶，不过滤供试品，其它操作同上，作为对照上，作为对照.将含培养基容器按要求温度培养将含培养基容器按要求温度培养35天。天。各试验菌及对应培养基逐一进行验证。各试验菌及对应培养基逐一进行验证。药典无菌检查方法验证及操作要点第13页金金葡葡铜铜绿绿白白念念金金葡葡铜铜绿绿白白念念加加供供试试品品对对照照管管枯枯草草生生孢孢黑黑曲曲霉霉枯枯草草生生孢孢黑黑曲曲霉霉药典无菌检查方法验证及操作要点第14页n n4.4 直接接种法直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求硫乙醇取符合直接接种法培养基用量要求硫乙醇酸盐流体培养基酸盐流体培养基8管，分别接人小于管，分别接人小于l00cfu金金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各菌、生孢梭菌各2管；管；取符合直接接种法培养基用量要求改良马取符合直接接种法培养基用量要求改良马丁培养基丁培养基4管，分别接入小于管，分别接入小于l00cfu白色念珠白色念珠菌、黑曲霉各菌、黑曲霉各2管。其中管。其中1管接人要求量供试管接人要求量供试品，另品，另1管作为对照，按要求温度培养管作为对照，按要求温度培养35天。天。药典无菌检查方法验证及操作要点第15页n n4.5 结果判断结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中试与对照管比较，如含供试品各容器中试验菌均生长良好，则供试品该检验量在该检验菌均生长良好，则供试品该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用能够忽略验条件下无抑菌作用或其抑菌作用能够忽略不计，照此检验法和检验条件进行供试品无不计，照此检验法和检验条件进行供试品无菌检验。菌检验。如含供试品任一容器中微生物生长微弱、如含供试品任一容器中微生物生长微弱、迟缓或不生长，则供试品该检验量在该检验迟缓或不生长，则供试品该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采取条件下有抑菌作用，可采取1)增加冲洗量，增加冲洗量，或增加培养基用量，或增加培养基用量，2)使用中和剂，或更换使用中和剂，或更换滤膜品种等方法，消除供试品抑菌作用，并滤膜品种等方法，消除供试品抑菌作用，并重新进行方法验证。重新进行方法验证。药典无菌检查方法验证及操作要点第16页n n5.供试品无菌检验供试品无菌检验 5.1 无菌检验法包含薄膜过滤法和直接接种无菌检验法包含薄膜过滤法和直接接种 法。法。只要供试品性状允许，应采取薄膜过滤只要供试品性状允许，应采取薄膜过滤 法。法。进行供试品无菌检验时，所采取检验进行供试品无菌检验时，所采取检验 方法和检验条件应与验证方法相同方法和检验条件应与验证方法相同 药典无菌检查方法验证及操作要点第17页n n5.2 5.2 检验数量与检验量检验数量与检验量检验数量与检验量检验数量与检验量 检验数量检验数量检验数量检验数量 抗生素类药品没有单列开，抗生素类药抗生素类药品没有单列开，抗生素类药抗生素类药品没有单列开，抗生素类药抗生素类药品没有单列开，抗生素类药与非抗生素类药品最少检验量是相同。表与非抗生素类药品最少检验量是相同。表与非抗生素类药品最少检验量是相同。表与非抗生素类药品最少检验量是相同。表1 1、表、表、表、表2 2、表、表、表、表3 3中最少检验数量不包含阳性对照试验供试品用中最少检验数量不包含阳性对照试验供试品用中最少检验数量不包含阳性对照试验供试品用中最少检验数量不包含阳性对照试验供试品用量，也不包含验证试验用量。量，也不包含验证试验用量。量，也不包含验证试验用量。量，也不包含验证试验用量。普通情况下，供试品无菌检验若采取薄膜过滤法普通情况下，供试品无菌检验若采取薄膜过滤法普通情况下，供试品无菌检验若采取薄膜过滤法普通情况下，供试品无菌检验若采取薄膜过滤法，应增加，应增加，应增加，应增加l l2 2最小检验数量作阳性对照用。最小检验数量作阳性对照用。最小检验数量作阳性对照用。最小检验数量作阳性对照用。只要供只要供只要供只要供试品特征允许，应将全部容器内全部内容物过滤。试品特征允许，应将全部容器内全部内容物过滤。试品特征允许，应将全部容器内全部内容物过滤。试品特征允许，应将全部容器内全部内容物过滤。若采取直接接种法，应增加供试品若采取直接接种法，应增加供试品若采取直接接种法，应增加供试品若采取直接接种法，应增加供试品1 1支支支支(或瓶或瓶或瓶或瓶)作作作作阳性对照用。阳性对照用。阳性对照用。阳性对照用。药典无菌检查方法验证及操作要点第18页检验量检验量检验量检验量 每份培养基接种供试品量按表每份培养基接种供试品量按表每份培养基接种供试品量按表每份培养基接种供试品量按表2 2、表、表、表、表3 3要求。要求。要求。要求。表表2 上市抽上市抽验样验样品品(液体制液体制剂剂)最少最少检验检验量量供供供供试试试试品装量品装量品装量品装量V V (ml)(ml)每支样品接入每管培养基最少样品量 最少最少最少最少检验检验检验检验数量（瓶或支）数量（瓶或支）数量（瓶或支）数量（瓶或支）最少最少最少最少检验检验检验检验数量（不数量（不数量（不数量（不含阳性含阳性含阳性含阳性对对对对照照照照试验试验试验试验）供试品检验（包含阳性对照试验）薄膜薄膜薄膜薄膜过滤过滤过滤过滤法法法法直接接种法直接接种法直接接种法直接接种法111V51V55V205V2020V5020V5050V10050V10050V10050V100（静脉（静脉（静脉（静脉给药给药给药给药）100V500100V500V V500500500500全量全量全量全量半量半量半量半量2ml2ml5ml5ml10ml10ml半量半量半量半量半量半量半量半量500ml500ml 20 2010101010101010101010101010101010101010106 6 6 66 6 6 620+1020+1010+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+510+56+36+36+36+36+36+36+36+320+120+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+110+16+16+16+16+16+16+16+16+1药典无菌检查方法验证及操作要点第19页表表表表3 3 上市抽验样品（固体制剂）最少检验量上市抽验样品（固体制剂）最少检验量上市抽验样品（固体制剂）最少检验量上市抽验样品（固体制剂）最少检验量供供供供试试试试品装量品装量品装量品装量M M（瓶或支）（瓶或支）（瓶或支）（瓶或支）每支样品接入每管培养基最少样品量 最少最少最少最少检验检验检验检验数量（瓶或支）数量（瓶或支）数量（瓶或支）数量（瓶或支）最少最少最少最少检验检验检验检验数量数量数量数量（不含（不含（不含（不含阳性阳性阳性阳性对对对对照照照照试验试验试验试验）供试品检验（包含阳性对照试验）薄膜薄膜薄膜薄膜过滤过滤过滤过滤法法法法直接接种直接接种直接接种直接接种法法法法M50mgM50mg50mgM 300mg50mgM 300mg300mgM 5g300mgM 5gMM5555 g g一次性使用含一次性使用含一次性使用含一次性使用含药产药产药产药产品品品品全量全量全量全量半量半量半量半量150mg150mg500mg500mg整个整个整个整个产产产产品品品品2020101010101010101020+1020+1010+510+510+510+510+510+510+510+520+120+110+110+110+110+110+110+110+110+1药典无菌检查方法验证及操作要点第20页n n5.4 供试品处理及接种培养基供试品处理及接种培养基n n5.4.1 薄膜过滤法薄膜过滤法 薄膜过滤法应优先采取封闭式薄膜过滤器，也薄膜过滤法应优先采取封闭式薄膜过滤器，也可使用普通薄膜过滤器。可使用普通薄膜过滤器。水溶性供试液过滤前先将少许冲洗液过滤以润水溶性供试液过滤前先将少许冲洗液过滤以润湿滤膜。湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。干燥。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为膜，每张滤膜每次冲洗量为l00ml，且总冲洗量，且总冲洗量不宜过大，以防止滤膜上微生物受损伤。不宜过大，以防止滤膜上微生物受损伤。药典无菌检查方法验证及操作要点第21页n n水溶液供试品水溶液供试品 取要求量，直接过滤，或混合至取要求量，直接过滤，或混合至含适量稀释液无菌容器内，混匀，马上过滤。如含适量稀释液无菌容器内，混匀，马上过滤。如供试品含有抑菌作用或含防腐剂，须用适量冲洗供试品含有抑菌作用或含防腐剂，须用适量冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。n n冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将l00ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入对硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入对应滤筒内。应滤筒内。n n如采取普通薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成如采取普通薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成3等份，分别置于含等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。用。药典无菌检查方法验证及操作要点第22页n n可溶于水固体制剂供试品可溶于水固体制剂供试品n n-内内酰酰胺胺类类供试品供试品n n非水溶性制剂供试品非水溶性制剂供试品n n油性供试品油性供试品药典无菌检查方法验证及操作要点第23页n n5.4.2 5.4.2 直接接种法直接接种法直接接种法直接接种法 每个容器中培养基用量应符合接种供试品每个容器中培养基用量应符合接种供试品每个容器中培养基用量应符合接种供试品每个容器中培养基用量应符合接种供试品体积不得大于培养基体积体积不得大于培养基体积体积不得大于培养基体积体积不得大于培养基体积1010，同时硫乙醇酸，同时硫乙醇酸，同时硫乙醇酸，同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于盐流体培养基每管装量不少于盐流体培养基每管装量不少于盐流体培养基每管装量不少于15ml15ml，改良马丁培，改良马丁培，改良马丁培，改良马丁培养基每管装量不少于养基每管装量不少于养基每管装量不少于养基每管装量不少于lOmllOml。培养基用量和高度。培养基用量和高度。培养基用量和高度。培养基用量和高度同方法验证试验；每种培养基接种管数同供试同方法验证试验；每种培养基接种管数同供试同方法验证试验；每种培养基接种管数同供试同方法验证试验；每种培养基接种管数同供试品检验数量。品检验数量。品检验数量。品检验数量。药典无菌检查方法验证及操作要点第24页 若符合直接接种法供试品装量若符合直接接种法供试品装量若符合直接接种法供试品装量若符合直接接种法供试品装量V(ml)V(ml)，1V51V5时，要求最少检验数量为时，要求最少检验数量为时，要求最少检验数量为时，要求最少检验数量为1010支，即供试品作无支，即供试品作无支，即供试品作无支，即供试品作无菌菌菌菌检验时，最少检验数量为检验时，最少检验数量为检验时，最少检验数量为检验时，最少检验数量为1111支，以无菌操作各将支，以无菌操作各将支，以无菌操作各将支，以无菌操作各将1111支支支支供供供供试品取半量分别接种于试品取半量分别接种于试品取半量分别接种于试品取半量分别接种于1111管硫乙醇酸盐流体培养基中，管硫乙醇酸盐流体培养基中，管硫乙醇酸盐流体培养基中，管硫乙醇酸盐流体培养基中，取其中取其中取其中取其中1 1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液（菌量小于管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液（菌量小于管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液（菌量小于管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液（菌量小于l00cful00cfu），作阳性对照，再将），作阳性对照，再将），作阳性对照，再将），作阳性对照，再将1010支供试品中剩下半量支供试品中剩下半量支供试品中剩下半量支供试品中剩下半量分别接种于分别接种于分别接种于分别接种于1010管改良马丁培养基中，按要求温度和时管改良马丁培养基中，按要求温度和时管改良马丁培养基中，按要求温度和时管改良马丁培养基中，按要求温度和时间培养。间培养。间培养。间培养。药典无菌检查方法验证及操作要点第25页n n可溶于水固体制剂供试品可溶于水固体制剂供试品n n-内内酰酰胺胺类类供试品供试品n n非水溶性制剂供试品非水溶性制剂供试品药典无菌检查方法验证及操作要点第26页n n5.5 培养培养 含硫乙醇酸盐流体培养基容器于含硫乙醇酸盐流体培养基容器于3035、含改良马丁培养基容器于含改良马丁培养基容器于2328,均培养均培养14天。天。药典无菌检查方法验证及操作要点第27页 5.6 结果判断结果判断n n符合要求符合要求 供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确 证无菌生长，判供试品符合要求。证无菌生长，判供试品符合要求。n n不符合要求不符合要求 供试品管中任何一管显浑浊并确供试品管中任何一管显浑浊并确 证有菌生长，判供试品不符合要求。证有菌生长，判供试品不符合要求。（不得复试）（不得复试）药典无菌检查方法验证及操作要点第28页 除非能充分证实试验结果无效，即生长微生物非除非能充分证实试验结果无效，即生长微生物非除非能充分证实试验结果无效，即生长微生物非除非能充分证实试验结果无效，即生长微生物非供试品所含。当符合以下最少一个条件时，方可判试供试品所含。当符合以下最少一个条件时，方可判试供试品所含。当符合以下最少一个条件时，方可判试供试品所含。当符合以下最少一个条件时，方可判试验结果无效：验结果无效：验结果无效：验结果无效：n n (1)(1)无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果无菌检验试验所用设备及环境微生物监控结果不符合无菌检验法要求；不符合无菌检验法要求；不符合无菌检验法要求；不符合无菌检验法要求；n n (2)(2)回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污回顾无菌试验过程，发觉有可能引发微生物污染原因；染原因；染原因；染原因；n n (3)(3)阴性对照管有菌生长；阴性对照管有菌生长；阴性对照管有菌生长；阴性对照管有菌生长；n n（4 4）供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌）供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌）供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌）供试品管中生长微生物经判定后，确证是因无菌试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。试验中所使用物品和（或）无菌操作技术不妥引发。药典无菌检查方法验证及操作要点第29页