药物分析抗生素专家讲座.pptx

抗生素类药品抗生素类药品分析分析进入进入返回主目录返回主目录药物分析抗生素第1页思索与练习第一节 概 述第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素第五节 抗生素类药品中高分 子杂质检验基本要求基本要求药物分析抗生素第2页基本要求基本要求一一、掌掌握握抗抗生生素素类类药药品品结结构构特特点点与与分分析析方方法法之之间关系。间关系。二、掌握抗生素类药品判别原理与方法。二、掌握抗生素类药品判别原理与方法。三三、掌掌握握抗抗生生素素类类药药品品法法定定含含量量测测定定方方法法原原理理、测定方法与计算。测定方法与计算。四、熟悉抗生素类药品杂质检验方法。四、熟悉抗生素类药品杂质检验方法。五、了解抗生素类药品中高分子聚合物检验。五、了解抗生素类药品中高分子聚合物检验。返返 回回药物分析抗生素第3页第一节第一节 概述概述1.抗生素药品特点抗生素药品特点化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差药物分析抗生素第4页2.微生物学法与理化法比较微生物学法与理化法比较微生物检定法微生物检定法理化法理化法以抗生素对微生物杀伤或抑制程以抗生素对微生物杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素生物效价度为指标衡量抗生素生物效价 依据抗生素结构特点，利用其依据抗生素结构特点，利用其特有理化性质测定其含量特有理化性质测定其含量已知或新发觉抗生素、精巧品或已知或新发觉抗生素、精巧品或粗制品均能测定粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯测定化学结构已知、已提纯抗生素抗生素灵敏度高、样品需用量小、反应抗灵敏度高、样品需用量小、反应抗生素医疗价值，但操作步骤多、生素医疗价值，但操作步骤多、费时、费时、误差大误差大 快速、准确、专属性高、样品快速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时需用量小、操作简单、省时药物分析抗生素第5页3.3.抗生素活性以效价单位来表示：抗生素活性以效价单位来表示：每每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素有效成份中含有某种抗生素有效成份多少，用单位（多少，用单位（u u）或）或g g 表示。表示。1 1mgmg青霉素青霉素G G钠盐定为钠盐定为16671667单位单位 1 1mgmg青霉素青霉素G G钾盐单位（钾盐单位（u u）=1667356.4/372.5=1595u/mg=1667356.4/372.5=1595u/mg药物分析抗生素第6页分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）：内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其它抗生素类林可霉素类、其它抗生素类返返 回回药物分析抗生素第7页第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（母核（6-6-氨基青霉烷酸）氨基青霉烷酸）AB药物分析抗生素第8页头孢菌素类头孢菌素类AB药物分析抗生素第9页青霉素青霉素（青霉素钾、钠）（青霉素钾、钠）药物分析抗生素第10页氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）药物分析抗生素第11页阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）药物分析抗生素第12页普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素药物分析抗生素第13页头孢氨苄头孢氨苄药物分析抗生素第14页头孢拉啶头孢拉啶药物分析抗生素第15页头孢羟氨苄头孢羟氨苄药物分析抗生素第16页头孢噻吩钠头孢噻吩钠药物分析抗生素第17页酸性酸性结构特点与性质结构特点与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na(Na+、K K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 药物分析抗生素第18页与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素药物分析抗生素第19页（二）（二）手性手性C C 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性药物分析抗生素第20页 （三）共轭体系（三）共轭体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无显著母核无显著UVUV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 UVUV药物分析抗生素第21页（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性原因性原因四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 药物分析抗生素第22页青霉素类青霉素类 一些氧化剂一些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶（一些金属离子）（一些金属离子）（温度）（温度）降解降解失效失效药物分析抗生素第23页例例青霉素降解反应青霉素降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2药物分析抗生素第24页头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类-内酰胺酶内酰胺酶降解降解失效失效药物分析抗生素第25页（一）呈色反应（一）呈色反应1.1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+判别试验判别试验 二、二、NaOH2 2HClNOHH-内酰胺类内酰胺类药物分析抗生素第26页H+Fe3+/3（红、棕、褐）（红、棕、褐）药物分析抗生素第27页2.茚三酮茚三酮反应反应-氨基氨基-氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝紫色蓝紫色药物分析抗生素第28页3.双缩脲反应双缩脲反应似肽键似肽键（开环分解）（开环分解）-内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜紫紫药物分析抗生素第29页4.与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸-5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮药物分析抗生素第30页5.与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林（分解分解）变色酸变色酸显色显色药物分析抗生素第31页1.K+、Na+火焰反应火焰反应（二）各种盐反应（二）各种盐反应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac白白 K+药物分析抗生素第32页2.沉淀反应（青霉素盐）沉淀反应（青霉素盐）遇酸遇酸在过量在过量HClHCl或或有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾緘緘+H药物分析抗生素第33页3.重氮化重氮化 -偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基药物分析抗生素第34页4.与三硝基苯酚反应与三硝基苯酚反应 二苄基乙二胺二苄基乙二胺药物分析抗生素第35页mp三硝基苯酚三硝基苯酚药物分析抗生素第36页光谱法光谱法（三）（三）1、UV法法样品、分解产物样品、分解产物Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50药物分析抗生素第37页pH3.8分子重排分子重排药物分析抗生素第38页药物分析抗生素第39页2、IR法法3180cm-1 N-H内酰胺内酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林为例以阿莫西林为例药物分析抗生素第40页色谱法色谱法（四）（四）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法2、HPLC法法药物分析抗生素第41页三、杂质检验三、杂质检验 药品药品 检验项目检验项目 检验方法检验方法 头孢他啶头孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 头孢曲松钠头孢曲松钠 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 相关物质和异构体相关物质和异构体 HPLCHPLC法法 头孢氨苄头孢氨苄 相关物质相关物质 反相反相TLCTLC法法 青霉素钾（钠）青霉素钾（钠）吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 药物分析抗生素第42页 1.1.头孢他啶聚合物测定头孢他啶聚合物测定 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10G-10（4012040120m m）流动相流动相A A：3.5%3.5%硫酸铵硫酸铵0.01mol/L0.01mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 流动相流动相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品对照品溶液：头孢他啶对照品 100100g/mlg/ml药物分析抗生素第43页1 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml1mg/ml蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖、流动相、流动相A A测定；重复性用对测定；重复性用对照品溶液、流动相照品溶液、流动相B B测定。测定。N N不低于不低于900900，拖尾，拖尾因子因子0.0.751.5.5，峰面积，峰面积RSDRSD应小于应小于5.0%5.0%。2 2）测定方法）测定方法 进样供试液，用流动相进样供试液，用流动相A A；进样对照液，用；进样对照液，用流动相流动相B B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超出头孢他啶计不得超出0.3%0.3%。药物分析抗生素第44页2.2.头孢呋辛酯中相关物质和异构体检验头孢呋辛酯中相关物质和异构体检验 固定相：固定相：ODSODS 流动相：流动相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氢铵磷酸二氢铵-甲醇（甲醇（62:3862:38）1 1）头孢呋辛酯）头孢呋辛酯2 2-异构体制备：头孢呋辛酯对异构体制备：头孢呋辛酯对 照品照品+流动相流动相 头孢呋辛酯头孢呋辛酯2 2-异构体。异构体。2 2）系统适用性试验：各异构体之间）系统适用性试验：各异构体之间R1.5R1.5，以，以 头孢呋辛酯头孢呋辛酯A A异构体计算异构体计算n1500n1500。药物分析抗生素第45页 3 3）异构体：）异构体：t tR1R1 相对保留时间相对保留时间 r r1212=-1-=-1-被测物被测物 t tR2 R2 2-2-标准物标准物异构体异构体 相对保留时间相对保留时间 判断判断B B异构体异构体 0.85 0.85 供试液谱图中供试液谱图中A A异构体峰面积异构体峰面积A A异构体异构体 1.0 1.0 与与A A、B B异构体峰面积和之比应异构体峰面积和之比应 为为0.0.480.55.55。药物分析抗生素第46页3.3.头孢氨苄中相关物质检验头孢氨苄中相关物质检验-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后硅胶固定相：活化后硅胶G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷正己烷溶液中，展至顶部，凉干烷正己烷溶液中，展至顶部，凉干 展开剂：展开剂：0.1mol/L0.1mol/L枸橼酸枸橼酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氢二磷酸氢二 钠钠-丙酮（丙酮（120120：8080：3 3）供试液：本品供试液：本品 50mg/ml 50mg/ml 对照液（对照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 对照液（对照液（2 2）：）：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 对照液（对照液（3 3）：）：7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸氨基去乙酰氧基头孢烷酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml药物分析抗生素第47页结果判断结果判断：供试液如显杂质斑点，与对：供试液如显杂质斑点，与对照液（照液（2 2）（）（3 3）位置相同上所斑点比较，）位置相同上所斑点比较，其颜色不得更深；如显其它杂质斑其颜色不得更深；如显其它杂质斑 点，点，与对照液（与对照液（1 1）所显主斑点比较，其颜色）所显主斑点比较，其颜色不得更深。不得更深。药物分析抗生素第48页4.4.青霉素钠（钾）吸收度检验：青霉素钠（钾）吸收度检验：供试液供试液 1.80mg/ml1.80mg/ml，结果判断：结果判断：A A280280不得大于不得大于0.100.10药物分析抗生素第49页-8 8I2 24 4I碘量法碘量法（一一）1.原理原理水解产物水解产物定量过量定量过量剩下剩下ChP四、含量测定四、含量测定（水解水解）NaOH头孢菌素族头孢菌素族青霉素族青霉素族药物分析抗生素第50页反应分两步进行：反应分两步进行：1.1.水解反应水解反应(按化学计算量进行按化学计算量进行)2.2.氧氧化化-还还原原反反应应(无无固固定定量量关关系系，受受温温度度、PHPH值值和和时时间间等等原原因因影影响响，应应严严格格控控制制反反应应条条件件并并采采取取标标准准品平行对照测定品平行对照测定)药物分析抗生素第51页第一步第一步第二步第二步药物分析抗生素第52页V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2.方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴药物分析抗生素第53页 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物干扰消除样品已降解产物干扰B、消除样品中其它消耗碘杂消除样品中其它消耗碘杂 质干扰质干扰C、消除碘挥发造成误差消除碘挥发造成误差 以未经水解样品作空白测定以未经水解样品作空白测定药物分析抗生素第54页空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2药物分析抗生素第55页 采取标准品平行对照测定采取标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pHpH、操作、环、操作、环 境等条件影响境等条件影响B、使本法测定结果与微生物检定使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致药物分析抗生素第56页3.条件条件（1）弱酸性弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3-+I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀（2）温度温度 2426温度温度38 未水解供试品亦消耗碘未水解供试品亦消耗碘药物分析抗生素第57页（3）水解时间水解时间以水解以水解2020分钟后分钟后耗碘量最大耗碘量最大（4）反应时间反应时间反应反应2020分钟后，分钟后，耗碘量随时间耗碘量随时间改变较小，可减小含量测定误改变较小，可减小含量测定误差。差。药物分析抗生素第58页4.特点特点（1）灵敏度高灵敏度高样品样品:碘碘 =1:8（2）反应条件、试验操作要求高反应条件、试验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-药物分析抗生素第59页5.计算计算原料原料制剂制剂药物分析抗生素第60页电位配位滴定法（汞量法）电位配位滴定法（汞量法）（二二）1.原理原理SHROH-青霉素族青霉素族（水解水解）青霉素族青霉素族ChP药物分析抗生素第61页2.方法方法醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解(降降)空空醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液V(NO3)2HgpH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解样品作空白测定以未经水解样品作空白测定药物分析抗生素第62页3、讨论讨论（1）水解必须完全水解必须完全（2）汞盐滴定液用汞盐滴定液用EDTAEDTA标定标定（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品药物分析抗生素第63页4、计算计算药物分析抗生素第64页可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（三三）1、酸水解酸水解-铜盐法铜盐法稳定剂稳定剂nmCupHpHA3203204 4+2 2青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）药物分析抗生素第65页药物分析抗生素第66页2、硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理原理青霉烯酸硫醇汞盐青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族青霉素族HgCl2（咪唑咪唑）药物分析抗生素第67页咪唑咪唑药物分析抗生素第68页（2）方法方法对照品法对照品法计算计算pH 9药物分析抗生素第69页（3）注意注意 侧链有侧链有-NH-NH2 2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述将其乙酰化后才能发生上述 反应反应药物分析抗生素第70页pH9药物分析抗生素第71页3、羟肟酸比色法羟肟酸比色法Fe3+/3H+红色红色NaOHHClNOHH2-内酰胺类内酰胺类羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物药物分析抗生素第72页HPLCHPLC法法（四四）ChPChP 内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（判别、检验、含测）一法多用（判别、检验、含测）返返 回回药物分析抗生素第73页第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素药物分析抗生素第74页链霉素链霉素链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺药物分析抗生素第75页链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺药物分析抗生素第76页链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺药物分析抗生素第77页巴龙霉素巴龙霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+脱氧链霉胺脱氧链霉胺+D-+D-核糖核糖+巴龙霉糖巴龙霉糖巴龙胺巴龙胺苷元苷元巴龙二糖胺巴龙二糖胺 糖糖 药物分析抗生素第78页D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脱氧链霉胺脱氧链霉胺D-D-核糖核糖巴龙霉糖巴龙霉糖药物分析抗生素第79页庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 药物分析抗生素第80页绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺药物分析抗生素第81页绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺药物分析抗生素第82页庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1=R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3药物分析抗生素第83页一一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3 3个个庆大霉素庆大霉素 5 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）药物分析抗生素第84页链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定稳定性稳定性（四四）UV（三三）药物分析抗生素第85页坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应药物分析抗生素第86页二二、判别判别 茚三酮反应茚三酮反应（一一）羟基胺结构羟基胺结构药物分析抗生素第87页 Molisch 试验试验（二二）氨基糖苷类氨基糖苷类H+糠醛糠醛羟甲基糠醛羟甲基糠醛-萘酚萘酚 蒽酮蒽酮呈色呈色药物分析抗生素第88页红紫色红紫色药物分析抗生素第89页N-N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（三三）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素水解水解-N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应反应）庆大霉素庆大霉素药物分析抗生素第90页(缩合缩合)药物分析抗生素第91页红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+药物分析抗生素第92页 麦芽酚反应麦芽酚反应（四四）链霉素特征反应链霉素特征反应H+分子重排分子重排药物分析抗生素第93页紫红紫红麦芽酚麦芽酚药物分析抗生素第94页链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（五五）-萘酚萘酚药物分析抗生素第95页药物分析抗生素第96页（六六）反应反应H+UV法法（七七）庆大霉素无庆大霉素无UVUV吸收吸收nmmax230230=l l链霉素链霉素药物分析抗生素第97页（八）色谱法（八）色谱法（1 1）TLCTLC法：硫酸庆大霉素判别法：硫酸庆大霉素判别 点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色 对照液对照液 判断：供试液与对照液所显斑点颜色与位判断：供试液与对照液所显斑点颜色与位 置应一致。置应一致。点样：供试液点样：供试液 对照液对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 对照液对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 +硫酸硫酸 新霉素标准品新霉素标准品+硫酸卡那霉素标准品硫酸卡那霉素标准品药物分析抗生素第98页判定法：供试液中主斑点位置、颜色、大小判定法：供试液中主斑点位置、颜色、大小 应与对照液应与对照液 相同，相同，对照液对照液应显示分离清楚应显示分离清楚3 3个斑点个斑点 不然试验无效。不然试验无效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸庆大霉素判别法：硫酸庆大霉素判别 比较供试液与对照液各组分保留时比较供试液与对照液各组分保留时间。间。药物分析抗生素第99页三三、特殊杂质检验特殊杂质检验链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉素链霉素B B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）2.方法方法 TLCTLC中对照品法（中对照品法（BPBP）1.起源起源 反应中间体反应中间体药物分析抗生素第100页对微生物活性无显著差异对微生物活性无显著差异毒副作用和耐药性不一样毒副作用和耐药性不一样发酵菌种不一样发酵菌种不一样工艺差异工艺差异C C组分百分比组分百分比不一致不一致要求控制各组分相对百分含量要求控制各组分相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C C组分测定组分测定（二二）药物分析抗生素第101页+4 41010.pH吲哚衍生物吲哚衍生物巯基醋酸巯基醋酸邻苯二醛邻苯二醛氨基氨基max=330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.药物分析抗生素第102页1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物药物分析抗生素第103页RPHPLC方法方法 2.要求要求 C1 2550%C1a 1540%C2a+C2 2050%计算计算 3.峰面积归一化法峰面积归一化法药物分析抗生素第104页药物分析抗生素第105页四四、含量测定含量测定微生物检定法微生物检定法 各国药典主要采取各国药典主要采取HPLC法法 惯用于体内药分惯用于体内药分 返返 回回药物分析抗生素第106页第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD药物分析抗生素第107页123456789101112药物分析抗生素第108页四环素四环素（TC）tetracycline药物分析抗生素第109页金霉素金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素氯四环素药物分析抗生素第110页土霉素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素氧四环素药物分析抗生素第111页多西环素多西环素(DOXC)doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素药物分析抗生素第112页美他环素美他环素（METC）metacycline药物分析抗生素第113页药物分析抗生素第114页一、一、结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性药物分析抗生素第115页与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+UV UV和荧光性质和荧光性质（三三）与金属离子络合与金属离子络合（四四）pH3 7.5 荧光荧光（二）（二）旋光性旋光性药物分析抗生素第116页药物分析抗生素第117页不稳定性不稳定性（五）（五）1.差向异构化差向异构化差向金霉素差向金霉素差向四环素差向四环素金霉素金霉素四环素四环素-4 4-4 46 62 2pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光药物分析抗生素第118页差向四环素差向四环素药物分析抗生素第119页（土霉素、多西环素不易差向异构化土霉素、多西环素不易差向异构化）药物分析抗生素第120页2.降解反应降解反应（1）酸性下降解酸性下降解max=445nmmax=435nm橙黄色橙黄色脱水金霉素脱水金霉素脱水四环素脱水四环素金霉素金霉素四环素四环素 2 2pH药物分析抗生素第121页脱水四环素脱水四环素药物分析抗生素第122页TCETCATCEATC药物分析抗生素第123页（2）碱性下降解碱性下降解异四环素异四环素四环素四环素-OH药物分析抗生素第124页二二、判别试验判别试验 浓浓H H2 2SOSO4 4反应反应（一一）黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素4 42 2SOH盐酸美他环素盐酸美他环素橙红色橙红色药物分析抗生素第125页FeCl3反应反应（二二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素3 3FeCl药物分析抗生素第126页TLCTLC法法（三三）盐酸土霉素判别盐酸土霉素判别 HPLC HPLC法法（五五）EDTAEDTA 克服痕量金属造成克服痕量金属造成 拖尾现象拖尾现象比较保留时间比较保留时间药物分析抗生素第127页三三、特殊杂质检验特殊杂质检验 4-4-差向四环素（差向四环素（ETCETC）脱水四环素脱水四环素（ATCATC）差向脱水四环素差向脱水四环素（EATCEATC）盐酸金霉素盐酸金霉素（CTCCTC）相关物质相关物质（一一）HPLCHPLC法（法（版）版）盐酸四环素盐酸四环素药物分析抗生素第128页四环素相关物质四环素相关物质TLCTLC图图I.供试液供试液(5 mg/ml)II.ETC(0.2 mg/ml)III.ATC(0.025 mg/ml)IV.EATC(0.025 mg/ml)V.CTC(0.1 mg/ml)VI.混合液混合液40.50.52药物分析抗生素第129页吸收度吸收度（二）（二）nmmax355355268268l l、盐酸四环素盐酸四环素药物分析抗生素第130页杂质吸收度杂质吸收度 取取供供试试品品配配成成每每毫毫升升10mg/ml10mg/ml溶溶液液至至4cm4cm吸吸收收池池中中，在在530nm530nm处处测测定定，其其吸吸收收度不得超出度不得超出0.120.12。应严格控制温度和时间应严格控制温度和时间药物分析抗生素第131页四四、含量测定含量测定HPLCHPLC法法 盐酸四环素测定盐酸四环素测定 系统适用性试验：盐酸四环素、相关系统适用性试验：盐酸四环素、相关 物质及物质及ATCATC峰间峰间 分离度分离度均应符合要均应符合要 求。求。定量方法：外标法以峰面积计定量方法：外标法以峰面积计。返返 回回药物分析抗生素第132页第五节 抗生素类药品中高分子 杂质检验1.1.高分子杂质高分子杂质 分子量大于药品本身杂质总称。分子量大于药品本身杂质总称。药物分析抗生素第133页 蛋白、多肽、多糖或抗生素蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖结合物。主要来自于与蛋白、多肽、多糖结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。噻唑多肽。药品本身聚合物，来自于生药品本身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。产、贮存过程。可引发过敏。外源性杂质外源性杂质内源性杂质内源性杂质药物分析抗生素第134页药物分析抗生素第135页药物分析抗生素第136页药物分析抗生素第137页 3.3.高分子杂质质控方法高分子杂质质控方法（1 1）凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质）凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质 与药品分离。与药品分离。（2 2）高分子杂质控制方法）高分子杂质控制方法-本身对照外标法本身对照外标法 原理原理：测定在：测定在K Kavav=0=0处处 药品缔合物峰响应药品缔合物峰响应 指标指标 样品中高分子杂质响应指标样品中高分子杂质响应指标 按外标法计算，得样品中高分子杂质按外标法计算，得样品中高分子杂质 相当于药品本身相对含量。相当于药品本身相对含量。药物分析抗生素第138页（3 3）高分子杂质分析方法）高分子杂质分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶简单测定系统：葡聚糖凝胶G-10G-10（4040 120m120m）柱）柱.HPLCHPLC系统系统:葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10G-10柱柱.返返 回回药物分析抗生素第139页练习与思索练习与思索AA型题型题 1.1.硫酸链霉素、硫酸青大霉素判别方法是硫酸链霉素、硫酸青大霉素判别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.茚三酮反应茚三酮反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应药物分析抗生素第140页2.2.青青霉霉素素钠钠中中国国药药典典要要求求含含量量测测定定方法为方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.E.汞量法汞量法药物分析抗生素第141页BB型题型题 A A。焰色反应。焰色反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.E.麦芽酚和坂口反应反应麦芽酚和坂口反应反应 1.1.青霉素钠青霉素钠 2.2.硫酸链霉素硫酸链霉素 3.3.维生素维生素B B1 1 4.4.维生素维生素A AAEBD药物分析抗生素第142页XX型题型题 1.1.用汞量法测定药品有用汞量法测定药品有A A。青霉素钠。青霉素钠 B.B.青霉素青霉素V V钾钾 C.C.维生素维生素C C D.D.青霉素青霉素V V钾片钾片 E.E.维生素维生素C C注射液注射液药物分析抗生素第143页 2.2.可用微生物法测定含量药品有可用微生物法测定含量药品有A A硫酸链霉素硫酸链霉素 B.B.硫酸青大霉素硫酸青大霉素 C.C.罗红霉素罗红霉素D.D.青霉素钠青霉素钠 E.E.青霉素青霉素V V钾钾 返返 回回药物分析抗生素第144页