遗传药理学例.pptx

遗传药理学例1/29前前 言言遗传药理学例2/29华法林缺点法林缺点 优点优点缺点缺点治疗窗窄，治疗窗窄，难以掌握用药合理剂难以掌握用药合理剂量，量，易出现抗凝不足或过量易出现抗凝不足或过量作用时间长、服用方便、副作用作用时间长、服用方便、副作用小小,价低价低预防和治疗血栓形成和复发预防和治疗血栓形成和复发华华法法林林用途用途研究背景 遗传药理学例3/29遗传药理学遗传药理学分子生物学分子生物学基因个体化给药方案基因个体化给药方案个体差异个体差异研究背景 遗传药理学例4/29 VKORC华法林华法林无活性无活性凝血因子凝血因子VitK环氧型环氧型由由VKORC1编码编码有活性有活性凝血因子凝血因子VitK氢醌型氢醌型药品代谢酶药品代谢酶CYP2C9*3遗传药理学例5/29研究目标 本研究选取中国汉族人群为研究对象，探讨本研究选取中国汉族人群为研究对象，探讨CYP2C9*3、VKORC1基因在中国汉族人群分基因在中国汉族人群分布情况，同时分析这些基因多态性（遗传原因）布情况，同时分析这些基因多态性（遗传原因）以及患者基线信息（非遗传原因）与华法林用以及患者基线信息（非遗传原因）与华法林用药剂量之间关系，以期建立适合中国汉族人群药剂量之间关系，以期建立适合中国汉族人群华法林基因给药模型。华法林基因给药模型。遗传药理学例6/29材料与方法材料与方法遗传药理学例7/29主要试剂主要试剂DNA提取试剂盒提取试剂盒 DNA纯化试剂盒纯化试剂盒引物引物dNTP、buffer、Taq酶酶限制性内切酶限制性内切酶琼脂糖琼脂糖Tris、硼酸、硼酸、EDTA上海赛百盛基因技术有限企业TIANGEN上海英潍捷基贸易有限企业北京全式金生物技术有限企业FermentasGENE TECHSunshine 遗传药理学例8/29主要仪器主要仪器F2-Q2型旋涡混合器型旋涡混合器台式高速离心机台式高速离心机-20冰箱冰箱电子天平电子天平电泳仪电泳仪PCR仪仪微量移液器微量移液器DNA测序仪测序仪 江苏泰县医疗器械厂江苏泰县医疗器械厂Eppendorf GermanyHairSartorious USABio-radApplied Biosystems 2720Thermo ElectronABI 3130 x 遗传药理学例9/29病例选择病例选择年纪大于年纪大于18周岁，需要华法林治疗并要求维持周岁，需要华法林治疗并要求维持INR在在1.82.5之间；患者需要长久服用抗凝药华法林最少之间；患者需要长久服用抗凝药华法林最少3个月以上，个月以上，INR值稳定（连续值稳定（连续3次复查次复查INR均到达目均到达目标标INR范围内）；中国汉族人。范围内）；中国汉族人。心功效心功效级或以上；妊娠期及哺乳期妇女；近级或以上；妊娠期及哺乳期妇女；近30天天内参加其它干预试验者；长久合并应用与华法林有内参加其它干预试验者；长久合并应用与华法林有相互作用药品者，如：三周内服用利福平者；因伴相互作用药品者，如：三周内服用利福平者；因伴有合并症而不能使用标准剂量者（如：肝、肾功效有合并症而不能使用标准剂量者（如：肝、肾功效不全等）。不全等）。纳入纳入排除排除遗传药理学例10/29试验流程样本取血（样本取血（228例）例）目标基因片段目标基因片段PCR扩增扩增（CYP2C9、VKORC1）纳入及排除目标纳入及排除目标病例病例搜集病人基线信息搜集病人基线信息基因组基因组DNA提取提取确定病例基因型确定病例基因型伦理委员会，研究注册伦理委员会，研究注册由遗传及非遗传原因由遗传及非遗传原因建立华法林给药模型建立华法林给药模型比较不一样基因型个体比较不一样基因型个体用药剂量差异用药剂量差异数据统计数据统计遗传药理学例11/29试验内容 采集患者信息采集患者信息 基因分型基因分型基线信息基线信息DNA采集采集CYP2C9*3VKORC1确定基因类型确定基因类型PCR扩增扩增遗传药理学例12/29基因多态性与华法林用药剂量之间关系基因多态性与华法林用药剂量之间关系试验内容 比较不一样种族间比较不一样种族间CYP2C9*3、VKORC1基因分布频率基因分布频率 分析分析CYP2C9*3、VKORC1基因多态性基因多态性与华法林维持剂量间关系与华法林维持剂量间关系遗传药理学例13/29试验内容 因变量为华法林日剂量（因变量为华法林日剂量（mg/d）自变量包含年纪、性别、身高、体重、自变量包含年纪、性别、身高、体重、CYP2C9、VKORC1基因型基因型多元回归统计方法，制订给药模型多元回归统计方法，制订给药模型遗传药理学例14/29统计学分析试验数据采取试验数据采取SPSS17.0统计软件分析统计软件分析应用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率应用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,基因频率基因频率 和等位基因频率采取同组中组成比比较和等位基因频率采取同组中组成比比较2检验。检验。患者与患者与Hardy-Weinberg（H-W）平衡符合程度采取）平衡符合程度采取2 检验，检验，P0.05 样本含有群体代表性。样本含有群体代表性。计量资料数据采取计量资料数据采取mean SD。不一样基因型间华法林剂量比较采取不一样基因型间华法林剂量比较采取t检验。检验。P0.05，差异有统计学意义。，差异有统计学意义。遗传药理学例15/29结果与讨论结果与讨论遗传药理学例16/29 表表1 CYP2C9*3基因分布频率（基因分布频率（n=228，%）CYP2C9*3 AA AC CC C A 基因型基因型频频率率 219（96.05）9（3.95）0（0.00）等位基因等位基因频频率率 1.98 98.02试验结果注：华法林抗凝治疗人群中，注：华法林抗凝治疗人群中，CYP2C9*3基因以基因以AA型为主，型为主，AC和和CC型少见型少见遗传药理学例17/29表表2 患者患者CYP2C9*3基因多态性与基因多态性与H-W平衡平衡符合程度检验（符合程度检验（n=228）基因型基因型 观观察察值值 期望期望值值 AA 219 219.08 AC 9 8.82 CC 0 0.09 2 0.09 P 0.05 遗传药理学例18/29表表3 不一样种族不一样种族CYP2C9*3基因型频率及等位基因型频率及等位基因分布频率对比（基因分布频率对比（%）地域CYP2C9*3基因型频率基因型频率CYP2C9*3等位基因分布等位基因分布频频率率AAACCCAC中国中国汉汉族族11.7.1594.105.300.6097.003.00我国我国维维吾吾尔尔族族1680.322.6617.0281.6518.35美国美国1784.5814.740.6891.958.05意大利意大利1880.9517.461.5989.6810.32俄俄罗罗斯斯1985.6013.980.4292.587.42此次研究96.053.950.0098.021.98遗传药理学例19/29表表4 VKORC1基因分布频率（基因分布频率（n=228，%）VKORC1 AA AG GG G A 基因型基因型频频率率 191（83.77）35（15.35）2（0.88）等位基因频率等位基因频率 8.55 91.45注：华法林抗凝治疗人群中，注：华法林抗凝治疗人群中，VKORC1基因以基因以AA和和AG型为主，型为主，GG型少见型少见遗传药理学例20/29表表5 患者患者VKORC1基因多态性与基因多态性与H-W平衡平衡符合程度检验（符合程度检验（n=228）基因型基因型 观观察察值值 期望期望值值 AA 191 190.67 AG 35 35.66 GG 2 1.66 2 0.09 P 0.05 遗传药理学例21/29表表6 不一样种族不一样种族 VKORC1基因频率分布情况对比（基因频率分布情况对比（%）研究人群研究人群AA型型AG型型GG型型高加索人高加索人20中国中国汉汉族人族人20我国台湾我国台湾20我国我国维维吾吾尔尔族族21日本日本2214.20-19.0079.8081.3074.0083.7039.50-56.0018.3018.7026.0015.5025.00-45.501.900.000.000.80此次研究83.7715.350.88遗传药理学例22/29表表7 不一样基因型间患者基本情况比较不一样基因型间患者基本情况比较 注：注：#CYP2C9*3 AA和和AC型华法林平均剂量比较，型华法林平均剂量比较，P0.05；#VKORC1 AA和和AG/GG华法林平均剂量比较，华法林平均剂量比较，P0.05基因型（例数）基因型（例数）年纪(age)体重（体重（kg）身高（身高（cm）平均日平均日剂剂量量(mg/d)CYP2C9*3 AA（219）AC/CC（9）VKORC1 AA（191）AG/GG（37）49.411.855.112.350.310.446.512.760.011.558.211.060.211.258.312.6162.38.0158.76.5161.77.8164.18.42.951.371.700.60#2.651.04 4.182.01#遗传药理学例23/29表表8 不一样年纪段患者华法林用药剂量比较不一样年纪段患者华法林用药剂量比较 患者情况患者情况年纪50(113)年纪50(115)P平均体重（平均体重（kg）平均身高（平均身高（cm）平均日平均日剂剂量（量（mg/d）59.411.1 60.411.8 0.05 160.07.3 161.28.0 0.05 2.541.1 3.261.5 0.05遗传药理学例24/29图图1 不一样不一样CYP2C9*3/VKORC1基因型患者间剂量比较基因型患者间剂量比较AA and AA AA and AG AA and GG AC and AA AC and AG n=183 n=34 n=2 n=8 n=1遗传药理学例25/29 表表9 患者基线信息单原因回归分析患者基线信息单原因回归分析 变量变量 平均值平均值 相关系数相关系数 P值值 性别（性别（sex）年纪（年纪（age）身高（身高（cm）体重（体重（kg）CYP2C9*3VKORC10.001-0.0380.0350.008-1.2491.6440.9940.010.010.3090.010.0149.6511.87162.117.9559.9311.42遗传药理学例26/29表表10 多元回归统计方法制订给药模型多元回归统计方法制订给药模型方程方程R2P值值Dose(mg/d)=1.390.034A0.021HDose(mg/d)=2.3780.033A0.02H0.992CDose(mg/d)=0.350.29A0.014H1.5 VKDose(mg/d)=1.5450.028A0.012H0.955C 1.495VK Dose(mg/d)=-2.330.306S0.027A0.008W 0.017H0.063C1.501 VK0.1210.140.3080.3260.3340.010.010.010.010.01遗传药理学例27/29结 论本试验条件下：本试验条件下：228例华法林抗凝治疗患者中，例华法林抗凝治疗患者中，CYP2C9*3、VKROC1基基因存在多态性，基因频率与其它种族存在一定差异。因存在多态性，基因频率与其它种族存在一定差异。CYP2C9*3基因突变个体所需华法林日平均剂量低于野生基因突变个体所需华法林日平均剂量低于野生基因型个体。基因型个体。VKROC1基因突变造成患者服用华法林剂量增加。基因突变造成患者服用华法林剂量增加。非遗传原因中，患者年纪、身高与华法林用药剂量存在相非遗传原因中，患者年纪、身高与华法林用药剂量存在相关性。关性。遗传药理学例28/29本试验条件下：本试验条件下：本研究得出华法林个体化给药模型本研究得出华法林个体化给药模型 Dose(mg/d)=-2.330.306Sex0.027Age0.008Weight0.017Height0.063CYP2C9*31.501 VKORC1可解可解释释 33.4%剂量差异。剂量差异。本研究只能解释本研究只能解释33.4%华法林剂量差异，这提醒我们要华法林剂量差异，这提醒我们要就影响华法林发挥抗凝活性遗传及非遗传原因进行扩大就影响华法林发挥抗凝活性遗传及非遗传原因进行扩大研究。研究。结 论遗传药理学例29/29