PVDF转印膜在WB中的应用.pptx

PVDF转印膜在WesternBlot中的应用OwenOwen,20142014年年年年8 8月月月月PVDF转印膜的概念、特点、应用和市场竞争分析 聚偏二氟乙烯（英文名称：polyvinylidene difluoride，简称PVDF），主要是指偏氟乙烯均聚物或者偏氟乙烯与其他少量含氟乙烯基单体的共聚物。聚偏二氟乙烯分子结构 聚偏二氟乙烯(PVDF)作为一种新型氟碳热塑型塑料，具有极好的耐气候性和化学稳定性，波长为20400nm的紫外灯照射一年，其性能基本不变，室温下不受酸、碱等强氧化剂和卤素等腐蚀。鉴于以上优点，PVDF膜从80年代中期开始得到了大量的应用。聚偏二氟乙烯（PVDF）是由 millipore 公司在1985年首创并应用于蛋白质转印。目前国外已经能够生产出各种性能优良的PVDF膜。国内的PVDF微滤和超滤膜也己形成了一定的生产规模，但是对于蛋白质转印方面的PVDF膜的生产几乎为零，而国际上目前也鲜有这方面的文献报道。PVDFPVDF转印膜是疏水性膜，主要有两种孔径形式存在：转印膜是疏水性膜，主要有两种孔径形式存在：0.2 m PVDF转印膜：适用于低分子量蛋白(20KD)、核酸(20KD)、核酸(300bp)0.2m PVDF 膜0.45m PVDF 膜 聚聚偏二氟乙烯（偏二氟乙烯（PVDFPVDF）采用通过）采用通过疏水键和正电荷与靶疏水键和正电荷与靶分子结合分子结合（1）机械强度高，耐腐蚀，保质期长（2）低背景，灵敏度高，优异的信噪比（3）对大范围的化学溶剂具有抵抗性(例如丙酮、DMSO，二甲基甲先胺等）（4）蛋白结合能力强。BSA125g/cm，山羊IgG125g/cm，胰岛素125g/cm。（5）相容染色剂广：考马斯亮蓝染色剂、酰胺黑、印度墨水、丽春红、胶体 金、CPTS、甲苯胺蓝、透射显影和Syproruby等。（6）应用范围广：Western BlotWestern Blot、Northern Blot、Southern Blot、吸附分析、氨基酸分析、N 端蛋白质测序、Dot/Slot blotting、糖蛋白显色等。（7）适用多种显色方：化学发光、常规显色、同位素、标准染色、免疫荧光等。PVDF转印膜特点性能性能性能性能NCNC膜膜膜膜PVDFPVDF膜膜膜膜材料质地易脆机械强度高溶剂耐受性无有背景低低SDS存在下蛋白质结合80-100g/cm2125-300g/cm2操作程序缓冲液润湿,避免气泡使用前100%甲醇润湿检测方式常规染色，可用放射性和非放射性检测常规染色，比较于NC膜，可用考马斯亮蓝染色，可用于ECL检测，快速免疫检测。适用范围0.45m一般蛋白0.2m分子量小于20kD蛋白糖蛋白检测和蛋白质测序 PVDF PVDF膜在几乎所有性能方面都超越了膜在几乎所有性能方面都超越了膜在几乎所有性能方面都超越了膜在几乎所有性能方面都超越了传统传统NCNC膜，因膜，因膜，因膜，因此目前此目前此目前此目前PVDFPVDF膜逐膜逐膜逐膜逐渐渐在取代在取代在取代在取代NCNC膜成膜成膜成膜成为为主流蛋白主流蛋白主流蛋白主流蛋白质转质转印膜材印膜材印膜材印膜材料。料。料。料。WesternBlot中PVDF膜与NC膜的选择 由于PVDF膜与硝酸纤维素膜相比有许多突出的优点，包括更好的蛋白质保留率、更高的机械强度和更广的化学相容性，因此被广泛使用于免疫检测实验当中。其中更高的机械强度和更优的化学相容性使PVDF膜成为免疫检测中染色和二次免疫检测时的理想选择。-滤纸滤纸凝胶凝胶膜膜滤纸滤纸+原理：原理：蛋白因结合SDS而带电荷，转膜即在电场作用下从胶中转至膜上的过程。PVDF转印膜在WB中的应用 湿转湿转湿式成功率高并特别适合用于分子量大于 100KD的蛋白半干式转膜速度快，适合与小分子量蛋白方法方法仪器仪器特点特点转膜半干转半干转 为检测转膜是否成功，可用相关染料对膜进行染色。1x立春红5min染色前染色后转转膜后膜后检测检测：（立春：（立春红红染色）染色）暗室操作！显色（结果检测）A液B液11:膜ECL工作混合液滴加ECL工作液 显影、定影免疫反应医疗卫生行业医疗卫生行业生物生物制药行业制药行业高校及科研院所高校及科研院所PVDF转印膜应用行业MSPVDF转印膜分析表MSPVDF转印膜销售术语Application:Northern,Southern,and Western Blot Protein sequencing Dot/slot blots Amino acid analysis,solid phase assay systems AdvantagesWestern blottingPVDF transfer membranes manufactured especially for protein transfer and Western blot applications with high sensitivity and low background.Compatible and durablePolyvinyl difluoride(PVDF)is compatible with most organic solvents,acids and mild bases.High protein retention even after hard washing steps.Easy to useCompatible with commonly used transfer conditions and detection methods such as staining,immunodetection,fluorescence,or radiolabeling.Lot-to-lot consistencyQuality checks ensure consistent binding for dependable results every time.Low extractablesEnsures tests will be clean with consistent results