1、融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生细细胞胞壁壁杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B回顾植物体细胞杂交过程回顾植物体细胞杂交过程去去 壁壁动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交。也称细胞杂交。是指是指两个或多个两个或多个动物细动物细胞结合形成胞结合形成一个一个细胞的细胞的过程。过程。杂交细胞：融合后形成杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞的具有两个或多个细胞遗传信息的遗传信息的单核细胞单核细胞。概念：概念：动物细胞融合动物细胞融合细胞膜的流动性细胞
2、膜的流动性原理：原理：诱导融合方法：诱导融合方法：物理法物理法:化学法化学法:生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒离心、振动、电刺激离心、振动、电刺激聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）为什么灭活的病毒能作为诱导剂？为什么灭活的病毒能作为诱导剂？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具
3、有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解胞桥的变化过程图解动物动物细胞融合技术细胞融合技术的的意义意义打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；动物细胞融合动物细胞融合广泛应用广泛应用细胞学，遗传学，免疫学及生物细胞学，遗传学，免疫学及生物新品种培育等多个学科领域新品种培育等多个学科领域；重要用途：重要用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体。单克隆抗体单克隆抗体1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？.一个淋巴细胞一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种抗
4、体能分泌多种抗体吗？吗？.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？.这种方法获得的抗体有什么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？单克隆抗体单克隆抗体n传统血清抗体的制备：传统血清抗体的制备：方法：向动物体内方法：向动物体内反复注射反复注射某种某种抗原抗原，然后从然后从动物血清动物血清中分离所需要的中分离所需要的抗体抗体。特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏n传统血清抗体的制备的缺陷：传统血清抗体的制备的缺陷：、单克隆抗体单克隆抗体McAb（概念）（概念）由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆），形（克隆），形成基因型相同
5、的细胞群，成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的这一细胞群所产生的化学化学性质单一、特异性强的抗体性质单一、特异性强的抗体称为称为单克隆抗体。单克隆抗体。那么，如何那么，如何大量获得化学性质单一、特异大量获得化学性质单一、特异性强的抗体性强的抗体？（即？（即单克隆抗体单克隆抗体）单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术、设计思路：、设计思路：动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能
6、大量繁殖体，又能大量繁殖单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备n制备过程：制备过程：1.注射抗原的目的是什么？注射抗原的目的是什么？2.诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞？融合后培养液中有几种细胞？4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点？优点？5.为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选？多次筛选？6.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法?单克单克隆抗隆抗体的体的制备制备单克单克隆抗隆抗体的体的制备制备单克隆抗体的制备
7、单克隆抗体的制备有限稀释法：有限稀释法：将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行稀释，一般需进行3 34 4次，次，直至确信每个孔中增殖的细直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。为杂交瘤细胞的克隆化培养。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种
8、植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较单克隆抗体单克隆抗体n单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：作为诊断试剂：准确识别
9、各种抗原作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合物质，并与特异性结合 用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于治疗疾病：主要用于癌症癌症治疗治疗一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.
10、A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 AD4.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D
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