1、动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合一、动物细胞融合1 1、概念、概念指指两个或多个两个或多个动物细胞结合形成动物细胞结合形成一个一个细胞的过程细胞的过程2 2、原理、原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性3 3、过程：、过程：用用物理法物理法、化学法化学法或者或者 生物法生物法 进行诱导进行诱导灭活的病毒灭活的病毒细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核4 4、意义和用途、意义和用途意义：意义：突破了有性杂交方法的局限，使突破了有性杂交方法的局限，使远缘远缘杂交杂交成为可能成为可能应用：应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种
2、培育等的重要手段。特别是制造生物新品种培育等的重要手段。特别是制造单单克隆抗体克隆抗体什么是单克隆抗体？怎么样制备？什么是单克隆抗体？怎么样制备？二、单克隆抗体二、单克隆抗体由共同的祖先，通过无性繁殖的方法，得到遗传特性相同的DNA、细胞或个体什么是克隆？什么是克隆？回顾回顾什么是抗体？什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。抗体是如何产生的？传统获取抗体的方法抗体是如何产生的？传统获取抗体的方法是什么？有什么缺点？（自主阅读课本是什么？有什么缺点？（自主阅读课本P52-53）该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低产量低、纯度
3、低且抗体的且抗体的特异性差、灵敏度低特异性差、灵敏度低1 1、单克隆抗体的概念：、单克隆抗体的概念：由单个B淋巴细胞经过克隆，形成基因型相同的细胞群，这一细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体B淋巴细胞在体外能无限增殖吗？淋巴细胞在体外能无限增殖吗？能不能想办法，让一个细胞既能够在体外无限增殖产生后代，又能产生单一的抗体呢？1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒设计了一个极富想象力的方案：科勒设计了一个极富想象力的方案：把一种B淋巴细胞淋巴细胞与一种能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞进行融合杂交，所得的杂交细胞既能无限增殖，又能产生大量的单一的抗
4、体2、单克隆抗体产生的过程、单克隆抗体产生的过程注射特定抗原注射特定抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合细胞几种融合细胞几种类型类型？（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）特定培养基特定培养基第一次筛选，得第一次筛选，得到到杂交瘤细胞杂交瘤细胞专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性杂交瘤细胞杂交瘤细胞有何特点？有何特点？第二次筛选，得第二次筛选，得到能产生到能产生特定特定抗抗体的杂交细胞体的杂交细胞融合融合B-B杂交杂交B-瘤杂交瘤杂交瘤瘤-瘤杂交瘤杂交单克隆抗体单克隆抗体3 3、单克隆抗体的应用（、单克隆抗体的应用（阅读课本阅读课本5454页页）a a、作为诊断试剂：准确识别各种抗原物
5、质，、作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合并与特异性结合优点：准确、高效、简易、快速优点：准确、高效、简易、快速b b、用于治疗疾病和运载药物、用于治疗疾病和运载药物治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”1 1、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比、动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是较中，正确的是（）A.A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.B.所用的技术手段完全相同所用的技术手段完全相同 C.C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞D2 2、单克隆
6、抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B B淋巴细淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A A A A、B B B B、C C C C、D D D D、CC A A、杂交细胞；杂交瘤细胞、杂交细胞；杂交瘤细胞B B、杂交瘤细胞；杂交细胞、杂交瘤细胞；杂交细胞C C、杂交瘤细胞；
7、能产生特定抗体的杂交、杂交瘤细胞；能产生特定抗体的杂交瘤细胞瘤细胞D D、产生抗体的、产生抗体的B B淋巴细胞；杂交瘤细胞淋巴细胞；杂交瘤细胞3 3、单克隆抗体制备中，两次筛选的目的、单克隆抗体制备中，两次筛选的目的分别是获得（分别是获得（）两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个新细胞一个优势一个优势课堂课堂小结小结灭活的病毒灭活的病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞特定培养基特定培养基杂交瘤细胞杂交瘤细胞（B-B-瘤细胞）瘤细胞）单一抗体阳单一抗体阳性检测性检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体课堂课堂小结小结作业：作业：1、对应的课时作业2、对比动植物细胞杂交的异同
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