DB62∕T 2686-2023 羊巴氏杆菌病防治技术规范(甘肃省).pdf

ICS 11.220CCS B 43B62甘 肃 省 地 方 标 准DB62/T 26862023代替 DB62/T 268 6-2016羊巴氏杆菌病防治技术规范Technical specification for prevention and treatment of Ovis pasteurellosis2023-08-23 发布2023-09-25 实施甘肃省市场监督管理局 发布DB62/T 268 62023T I 刖 B本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。本文件代替DB62/T 268 6-2016羊巴氏杆菌病防治技术规范，与DB62/T 268 6-2016相比，除结构 调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a）删除了引言；b）更改了规范性引用文件；c）增加了实验室诊断中的PCR鉴定；增加了 PCR鉴定所需的引物序列；增加了种属PCR及分 型鉴定；d）增加了结果判定；e）修改了药物治疗。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省动物卫生标准化技术委员会归口。本文件起草单位：甘肃农业大学、甘肃省动物疫病预防控制中心、甘肃省畜牧技术推广总站、碌曲 县动物疫病预防控制中心、甘肃省绵羊繁育技术推广总站、静宁县畜牧兽医中心雷大畜牧兽医站、渭源 县庆坪镇畜牧兽医站、碌曲县玛艾镇畜牧兽医工作站、临泽县农业农村局、定西市岷县禾驮镇畜牧兽医 工作站、临泽县蓼泉镇畜牧兽医工作站、临泽县新华镇畜牧兽医工作站、山丹县动物疫病预防控制中心、山丹县东乐镇农业农村综合服务中心。本文件主要起草人：王文莉、李岩、马胡赛、王鹏程、黄耀华、戴雄雄、张芳玲、索南卓玛、王耀 东、包苏琴、崔家仁、马吉军、杨明国、程博、马应举、王新武、张宝林。本文件所代替文件的历次版本发布情况为：2016年首次发布为DB62/T 268 6-2016,本次为第一次修订。本文件由甘肃省动物疫病预防控制中心解释。IDB62/T 268 62023羊巴氏杆菌病防治技术规范1范围本文件规定了羊巴氏杆菌病的诊断、结果判定、预防、治疗的技术要求。本文件适用于羊巴氏杆菌病的防治。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB/T 27530牛出血性败血病诊断技术NY/T 5030无公害农产品兽药使用准则中华人民共和国兽药典（2020年版）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1羊巴氏杆菌病由多杀性巴氏杆菌引起以败血症和和炎性出血过程为主要特征的一种羊的传染病。4诊断4.1流行特点4.1.1 易感动物多发生于羔羊，山羊也可感染，较少发病。4.1.2 传染源患病动物和耐过动物是主要传染源。多杀性巴氏杆菌存在于患病动物全身各组织、体液、分泌物及 排泄物里。健康羊的上呼吸道也可能带菌。4.1.3 传播途径多杀性巴氏杆菌随患病动物分泌物和排泄物排出体外，主要经消化道感染，也可经呼吸道感染（飞 沫传播），皮肤、黏膜伤口也可感染。在牧区，吸血昆虫叮咬也是传播疾病的重要途径。健康带菌羊在 受寒、长途运输、饲养管理不当等情况导致抵抗力降低时，可发生内源性感染，出现临床症状。4-1-4发病季节1DB62/T 268 62023一年四季均可发，气候寒冷（冬春）、闷热潮湿的季节（6月8月）多发。4.2临床症状及病理变化4.2.1最急性型多见于哺乳羔羊，往往突然发病，呈现寒战、虚弱、呼吸困难等临诊症状，于数分钟至数小时内死 亡。往往难以见到特征性变化。4.2.2急性型病羊精神沉郁，食欲废绝，体温升高至4142。呼吸急促、咳嗽、鼻孔常有出血，有时血液混 杂与黏性分泌物中；眼结膜潮红，有黏性分泌物；初期便秘，后期腹泻，有时粪便为血水；颈部、胸下 部位发生水肿；病羊常在严重腹泻后虚脱而死；病程2d5 d。4.2.3慢性型病羊消瘦，食欲减退，流黏脓性鼻液；颈胸部有时发生水肿；咳嗽；呼吸困难并有角膜炎临诊症状；病羊腹泻，粪便恶臭，临死前极度虚弱，体温下降，四肢厥冷。一般在皮下有液体浸润和小出血点；胸腔内有黄色渗出物，肺淤血，有小出血点和肝变，偶有黄豆 至胡桃大的化脓灶；胃肠道有出血性炎症；其他器官水肿和淤血，间有小点出血.，但脾脏不肿大。病期 较长者尸体消瘦，皮下胶样浸润，常有纤维素性胸膜肺炎，肝有坏死灶。4.3实验室诊断4.3.1病原学诊断4.3.1.1病料采集无菌采集病死羊的心、脾、肝、肺、淋巴结及体腔渗出液。4.3.1.2染色镜检取实质器官病料作涂片或触片，革兰染色呈阴性，球杆状或短杆状，两端钝圆，长0.6tim2.5国11,宽0.25Mm0.6阿，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。瑞特氏或美蓝染色呈典型的两极着色。4.3.1.3细菌分离培养按照GB/T 27530执行。4.3.2血清学诊断按照GB/T 27530执行。4.3.3动物接种诊断取病死动物的肺、肝、脾等组织病料制成1：10乳剂皮下或腹腔接种小鼠，剂量为每只0.2mL0.5 mL,胸腔液、心包液可直接用于接种。接种后24h72h死亡，死后及时剖检，观察病变并进行病原学确诊。4.3.4 PCR 鉴定4.3.4.1 引物2DB62/T 268 62023多杀性巴氏杆菌属特异性16SrRNA基因、种特异性KMT1及荚膜基因capA、capB、capD、capE capF 引物序列应按照表1合成。表1引物序列信息表基因Gene引物Primer引物序列(55)Primer sequence片段大小Fragment size退火温度 Tm16SrRNAFACGCGTCGACAGAGTTTGATCCTGGCT1500bp55RCGCGGATCCGCTACCTTGTTACGACTTPm-KMT 1FATCCGCTATTTACCCAGTGG460bp55RGCTGTAAACGAACTCGCCACPm-AFTGCCAAAATCGCAGTGAG1044bp55RTTCCCATCATTGTCAGTGPm-BFCATTTATCCAAGCTCCACC760bp55RGCCCGAGAGTTTCAATCCPm-DFTTACAAAAGAAAGACTAGGAGCCC657bp55RCATCTACCCACTCAACCATATCAGPm-EFTCCGCAGAAAATTATTGACTC511bp55RGCTTGCTGCTTGATTTTGTCPm-FFAATCGGAGAACGCAGAAATCAG851 bp55RTTCCGCCGTCAATTACTCTG4.3.4.2多杀性巴氏杆菌种的PCR鉴定将染色鉴定为可疑多杀性巴氏杆菌的菌株在固体培养基上纯化，取细菌培养物2mL,用试剂盒提取 菌液DNA。反应体系为：PremixTaq12.5 piL,KMT1基因通用引物上、下游引物(lOjimol/L)各0.5rL,DNA模板IrL,无菌无酶水补至总体积25 ML。反应条件为：预变性95。(3,5 mm；扩增循环30 x(95 60s,55 30s,72 60s)；延伸720C 7min。PCR扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳。KMT1基因扩增 产物大小为460bp。对KMT1基因PCR阳性的样品进一步用相同的方法进行5个荚膜型的鉴定。5结果判定根据4.1流行特点、4.2临床症状及病理变化可做出初步诊断，确诊需按照4.3进行实验室诊断。6预防6.1 定期预防接种，春秋两季用市售合格的羊巴氏杆菌疫苗进行预防接种。6.2 紧急预防接种，发生本病后，对同群羊进行紧急免疫接种。6.3 加强饲养管理，提高饲料营养水平，保持饮水清洁；强化兽医卫生消毒，保持环境卫生，增强羊 群抵抗力。消除诱发因素；避免牛羊受寒中暑。6.4 严格检疫，避免引入患病动物和带毒动物。DB62/T 268 620237治疗7.1 发现病羊和可疑病羊立即隔离治疗。7.2 对病羊按照以下药物进行治疗：氨基糖昔类、头抱类及磺胺类药物等。庆大霉素，按每kg体重 1000U-15 00U,头抱睡吠l.lmg/kg2.2mg/kg,l日1次，20%磺胺喀咤钠5 mL10mL,均肌内注射,每日2次。或使用复方新诺明或复方磺胺喀咤，口服，每次每kg体重25 mg30mg,1日2次。直到体 温下降，食欲恢复为止。在应用抗菌消炎疗法的同时，采取解热、镇痛、补液、强心、解毒等对症治疗。药物的选用应符合NY/T 5030和中华人民共和国兽药典（2020年版）的规定。OOZ 0 Z I 9 8 9 N 1/N 9 8 a4