高效液相色谱仪验证方案.docx

1.目的
标题
Subject
Waters e269高效液相色谱仪验收报告
文件编码
Document code
07-G-091
版本号
Edition number

起草
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日期
Date

审核
E*amined by

日期
Date

日期
Date

日期
Date

批准
Approved by

日期
Date

2. 围
3. 责任
4. 验证
4. 1.公用系统检查
4. 2运行确认
4. 2.1目的
4.2.2式
4.2.3容
4.2.3. 1设备使用原理

4. 2. 3. 2确认标准操作规程的可行性
4. 2. 3. 3确认设备正常运行的工程
4. 3性能确认
4. 3. 1输液系统
4. 3. 1. 1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4. 3. 1. 2定性、定量测量重复性误差
4. 3. 1. 3系统适用性试验
4. 3. 2紫外检测器性能
4. 3. 2. 1基线漂移与基线噪声
5. 拟订验证期
6. 验证结果评价与结论
7.
1目的：
为确认Alliance26哩高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证案，对高效液相色谱仪进展验证。验证过程应格按照本案规定的容进展，假设因特殊原因确需变更时，应填写验证案变更申请及批准书，报验证委员会批准。
2围：
适用于美国Waters公司Alliance269型高效液相色谱仪系统的再验证。
3责任：
3. 1验证委员会
3. 1. 1负责验证案的批准。
3. 1. 2负责验证的协调工作，以保证本验证案规定工程的顺利实施。

3. 1. 3负责验证数据及结果的审核。
3. 1. 4负责验证报告的审批。
3. 1. 5负责发放验证证书。
3. 1. 6负责验证期确实认。
3. 2设备部。
3. 2. 1负责建立设备档案。
3. 2. 2负责仪器、仪表的校正。
3. 3质量保证部
3. 3. 1负责制定验证案。
3. 3. 2负责验证的实施。
3. 3. 3负责拟定验证期。
3. 3. 4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证委员会。
4验证：
4. 1公用系统检查
名 称
设计要求
实际
结论
确认人
日期
备注
电压〔V〕
220伏、单相

功率
5W

频率
50HZ

接地保护
有

检查工程
标准
结果
检查人
日期
备注

生产厂商
美国Waters公司

设备名称
Alliance 26型5 HPLC 系统

安装地点
液相色谱室220

公司部设备编号
ZJ-LH-201

主要性能参数
2695型溶剂与样品管理系统参#
电源
220V/50Hz , 250W

流速围
0.- 45ml/min

压力围
0〜60Psi

流速精度
+ 0.01ml

工作温度
4〜38°C

工作湿度
20- 90%

重量
42.3Kg

PD
A检测器参数
电源
220V/50Hz, 250W

波长围
190- 8nm

波长精度
± 1nm

基线噪音
5 x 10-5AU254nm

漂移值
1 x 10-3AU/hour254nm

线性围

光谱分析
1.2nm/光电二极管

工作温度
4-40C

工作湿度
20- 80%

重量
15.4Kg

复核人：日期:

4. 2运行确认
4. 2. 1目的
试验并证明设备的各局部及整体，能在预期的及设计围准确的运行，并能完全到达规定
的技术指标和使用要求。
4. 2. 2 式
通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4. 2. 3 容
4. 2. 3. 1设备概述
4. 2. 3. 1. 1本仪器为Waters公司Alliance26哩高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，
2996检测器和自动进样器、Millennium3色谱管理工作站及打印机组成。
4. 2. 3. 1. 2高压液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为
流动相，用泵将流动相注入分析色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱进展别离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进展数据处理，得到测定结果，然后分别进展收集。
4. 2. 3. 2确认高效液相色谱系统标准操作规程的可行性测试过程：
A. 前提：安装确认结果使得设备安装稳固，电源连接完好，仪器自检完毕。
B. 仪器操作运行：仪器运行，整个操作过程完全按"10-G-082 Alliance2型高效液相
色谱仪标准操作规程”进展。
C.在整个系统运转的同时，运行确认以下工程，以证明设备符合要求。
4. 2. 3. 3高效液相色谱仪运行确认
项 目
要求
结论
确认人
日期
备注
泵流量设定值测定
误差S <±2%

泵流量稳定性测定
误差S <±2%

系统重复性测定
误差 RSD <1.5%

基线漂移与基线噪声
测定
基线漂移<5乂103〔AU/h〕
基线噪声<5乂104〔AU〕

4. 3性能确认
4. 3. 1输液系统
4. 3. 1. 1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4. 3. 1. 1. 1要求：泵流量设定值误差Ss<± 2% ;流量稳定性误差Sr<±2%。
4. 3. 1. 1. 2检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，以甲醇为流动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出用事先清洗枯燥称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10〜25分钟，称重，按下式计算Ss和Sr。

SS= F、Fs1%
s
1%
F F―maxmin
F
式中：ss为流量设定值误差〔％〕；
F = L_ 为流量实测值〔ml/min〕;mt t
W为容量瓶+流动相的重量〔g〕；
2
W ］为容量瓶的重量〔g〕；
Fs为流量设定值〔ml/min〕；
Pt为实验温度下流动相的密度〔g/cm3〕；
t为收集流动相的时间〔min〕sr为流量稳定性误差〔％〕
Fma*为同一组测量中流量最大值〔ml/min〕；
Fmin为同一组测量中流量最小值〔ml/min〕
F为同一组测量值的算术平均值〔ml/min〕
流量设定值〔ml/min〕
0.5
1.0
1.5
测量次数
3
3
3
收集流动相时间〔min〕
25
15
10
允误差
S
S
3%
2%
2%
S
R
3%
2%
2%
表1 S’、SR的检定

4. 3. 1. 2定性、定量测量重复性误差
4. 3. 1. 2. 1检定法：将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，使

之处于正常工作状态，注入注射用胸腺五肽样品溶液20^1,记录保存时间和峰面积，连续测量5次，计算相对标准偏差RSD。
4. 3. 1. 2. 2 可承受标准:RSD <1.5%。
测定次数
1
2
3
4
5
保存时间

峰面积

实测RSD
保存时间(min)
标准RSD
<1.5%
峰面积：
按下式计算相对标准偏差RSD。

I 1—
,1 Xi X 2
1
RSD = = 1%
n 1 X
式中：RSD为定性、定量测量重复性的相对标准偏差
Xi为第i次测得的保存时间或峰面积
X为n次测量结果的算术平均值
i为测量序号
n为测量次数
4. 3. 1. 3系统适用性试验
选定注射用胸腺五肽含量测定的色谱条件作为系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mo1/L磷酸盐缓冲液〔pH7. 0： -甲醇〔90: 10〕为流动相；检测波长为275nm。精细量取20^1,注入液相色谱仪，连续测定3次，依据图谱，记录理论板数。
4. 3. 1. 3. 1可承受标准：记录色谱图理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于20。
4. 3. 2紫外检测器性能
4. 3. 2. 1基线漂移与基线噪声

4. 3. 2. 1. 1 要求：基线漂移 <5x10-3 CAU/h〕；基线噪声 <5x10-4〔AU〕。
4. 3. 1. 1. 2检定法：将仪器各局部联接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为1%甲醇，流速为1.0ml/min^收度围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20-30分钟，计算基线漂移和噪声。
5. 拟订再验证期
设备验证期拟订为：一年一次。
6. 验证结果评价与结论
由设备动力部负责收集各项验证试验结果记录，根据验证试验结果起草验证报告，报验证委员会，验证委员会对验证结果进展综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认验证期。对验证结果的评审应包括：
6. 1验证实验是否有遗漏.
6. 2验证实验过程中对验证案有无修改.修改案的依据以及修改是否经过批准.
6. 3验证记录是否完整.
6.4验证试验结果是否符合要求.偏差及对偏差的说明是否合理.是否需要进一步补充试验.
7.

高效液相色谱仪验证结果及记录〔1〕
验证工程名称
设备性能确认
验证案编码
07-G-091
设备名称
Alliance 269效液相色谱仪
规格型号
Alliance 2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号

制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
22
泵流量设定值误差与流量稳定性误差
流量设定值〔ml/min〕
0.5
1.0
1.5
操作人
日期
测量次数
3
3
3
收集流动相时间〔min〕
25
15
10

允误差
S
S
3%
2%
2%
S
R
3%
2%
2%
实测误差
S
S

S
R

结果评价及建议：
设备动力部：日期：
结果评价及建议
中心化验室：日期：
结果评价及建议
质量保证部：日期：
备注：
2

高效液相色谱仪验证结果及记录〔2〕
..
验证工程名称
设备性能确认
验证案编码
07-G-091
设备名称
Alliance 269效液相色谱仪
规格型号
Alliance 2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号

制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
22
定性、定量重复性检定
测定次数

操作人
日期
保存时间(min)

峰面积

实测RSD
保存时间(min)
标准
RSD
<1.5%
峰面 积：
结果评价及建议：
设备动力部：日期：
结果评价及建议
中心化验室：日期：
结果评价及建议
质量保证部：日期：
备注：
3

高效液相色谱仪验证结果及记录〔3〕

验证工程名称
设备性能确认
验证案编码
07-G-091
设备名称
Alliance 269效液相色谱仪
规格型号
Alliance 2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号

制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
22
系统适用性试验
测定次数
1
2
3
操作人
日期
色谱图理论塔板数
〔n〕

可承受标准
n不低于20

结果评价及建议：
设备动力部：日期：
结果评价及建议
中心化验室：日期：
结果评价及建议
质量保证部：日期：
备注：
4

高效液相色谱仪验证结果及记录〔4〕
验证工程名称
设备性能确认
验证案编码
07-G-091
设备名称
Alliance 2695效液相色谱仪
规格型号
Alliance 2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号

制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
22
紫外检测器性能试验

测定
工程
标准要求
实测数据及结果计算
操作人
日期
备注
基线漂移与基线噪声
波长254nm，流动相为1%甲醇，流速为1.0ml/min,吸收度围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20〜30分钟，计算基线漂移和噪声
判定标准：
基线漂移 <5x10-3 CAU/h〕基线噪声<5x10-4 CAU〕。
基线漂移：
基线噪声：

结果评价及建议：
设备动力部：日期：
结果评价及建议
中心化验室：日期：
结果评价及建议
质量保证部：日期：
备注：

验证最终评价报告
验证案名称
Alliance269型高效液相色谱仪再验证案
验证案编码
07-G-091
设备名称
Alliance 269效液相色谱仪
规格型号
Alliance 2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号

制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
22

部 门
最终评价
设备动力部
负责人：
日期：

负责人：
日期：
质量保证部
负责人：
日期：
批准
负责人：
日期：
备注：