免疫诊断.pptx

免疫的临床应用免疫的临床应用免疫的临床应用免疫的临床应用 第一节第一节 免疫学诊断免疫学诊断一、抗原或抗体的检测一、抗原或抗体的检测 抗原抗原抗原抗原-抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、抗体反应包括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等。溶解反应、补体结合反应和中和反应等。溶解反应、补体结合反应和中和反应等。溶解反应、补体结合反应和中和反应等。抗原抗原抗原抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检抗体反应可用已知的特异性抗体检抗体反应可用已知的特异性抗体检抗体反应可用已知的特异性抗体检测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的测未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的抗体。抗体。抗体。抗体。免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原术、发光免疫分析等免疫标记技术提高了抗原抗体反应的敏感性。抗体反应的敏感性。抗体反应的敏感性。抗体反应的敏感性。（一）、抗原（一）、抗原-抗体反应的特点抗体反应的特点1、特异性：、特异性：抗原抗原-抗体的结合抗体的结合是特异性结合是特异性结合2、可逆行：、可逆行：抗原抗体结合是分子表面抗原抗体结合是分子表面的非的非 共价键结合共价键结合3、可见性：、可见性：抗原和抗体结合是否呈抗原和抗体结合是否呈现可见的反应现象，于两者的分子比例密切现可见的反应现象，于两者的分子比例密切相关相关抗原抗体比例对反应现象的影响抗原抗体比例对反应现象的影响（二）、抗原（二）、抗原-抗体反应受多种抗体反应受多种因素影响因素影响1 电解质电解质：抗原：抗原-抗体反应通常应用抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液的氯化钠作为稀释液，以供给适，以供给适应浓度的电解质。应浓度的电解质。2 温度温度：一般常使用反应在：一般常使用反应在37度水浴度水浴 或或孵育箱中进行。孵育箱中进行。3.酸碱度酸碱度：抗原：抗原-抗体反应适应的酸碱度抗体反应适应的酸碱度 为为PH68。（三）、常见的抗原抗体反应类型（三）、常见的抗原抗体反应类型1、凝集反应、凝集反应(Agglutination)细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝聚反应。结合后形成凝集现象，称为凝聚反应。（1）、直接凝集反应：）、直接凝集反应：将细菌或红细胞与相应的抗体将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。凝集现象。又分为玻片法和试管法。（2）、间接凝集反应：）、间接凝集反应：将可溶性抗原包被在红细胞或将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。现颗粒凝集现象。血血 球球 凝凝 集集（3）、间接凝集抑制试验2、沉淀反应、沉淀反应（Precipitation)血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液这一类反应称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用体中进行，如絮状沉淀。大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也半固体琼脂凝胶为介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。称免疫扩散。称免疫扩散。称免疫扩散。(1)、单向免疫扩散、单向免疫扩散(Single Immunodiffusion)是将一定量已知抗体混是将一定量已知抗体混是将一定量已知抗体混是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，于琼脂凝胶中制琼脂板，于琼脂凝胶中制琼脂板，于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗在适当位置打孔后将抗在适当位置打孔后将抗在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原原加入孔中扩散。抗原原加入孔中扩散。抗原原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中在扩散过程中与凝胶中在扩散过程中与凝胶中在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗的抗体相遇，形成以抗的抗体相遇，形成以抗的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，原孔为中心的沉淀环，原孔为中心的沉淀环，原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成环的直径与抗原含量成环的直径与抗原含量成环的直径与抗原含量成正比相关。本法常用于正比相关。本法常用于正比相关。本法常用于正比相关。本法常用于测定血清测定血清测定血清测定血清IgGIgG、IgMIgM、IgA IgA 和和和和 C C 3 3等的含量。等的含量。等的含量。等的含量。含抗体的凝胶含抗体的凝胶沉淀环沉淀环（2）、双向免疫扩散）、双向免疫扩散（Double Immunodiffusion)是将抗原与抗体分别加是将抗原与抗体分别加是将抗原与抗体分别加是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，入琼脂凝胶的小孔中，入琼脂凝胶的小孔中，入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并二者自由向周围扩散并二者自由向周围扩散并二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形相遇，在比例合适处形相遇，在比例合适处形相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体成沉淀线。如果反应体成沉淀线。如果反应体成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原系中含两种以上的抗原系中含两种以上的抗原系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可抗体系统，则小孔间可抗体系统，则小孔间可抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。出现两条以上的沉淀线。出现两条以上的沉淀线。出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体本法常用于抗原或抗体本法常用于抗原或抗体本法常用于抗原或抗体的定性的定性的定性的定性 、组成和两种抗、组成和两种抗、组成和两种抗、组成和两种抗原相关性分析的检测。原相关性分析的检测。原相关性分析的检测。原相关性分析的检测。3、免疫标记技术、免疫标记技术 用荧光素、同位素或酶等示踪用荧光素、同位素或酶等示踪物质物质 标记抗体（或抗原）进行抗原标记抗体（或抗原）进行抗原-抗抗体反应。标记物质与抗体（或抗原）的体反应。标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变抗体（或抗原）的免疫化学连接未改变抗体（或抗原）的免疫学特性，同时标记物的性质依然存在，学特性，同时标记物的性质依然存在，因而极大的提高了反应的灵敏度，可以因而极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性或定位检测。对微量物质进行定量、定性或定位检测。免疫标记技术主要有三种基本类型：免免疫标记技术主要有三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记疫荧光技术、免疫酶技术和同位素标记技术。技术。（1）、免疫荧光显微技术）、免疫荧光显微技术(Immunofluorescence Technique)是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光是用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，素，FITC)与抗体连接成荧光抗体，再与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗原反应，置荧光显微与待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。借此对标本中的抗原作鉴定和定位。包括直接荧光法、间接荧光法和补体包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。法。直接荧光法：直接荧光法：直接荧光法：直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染将荧光素直接标记抗体作标本染将荧光素直接标记抗体作标本染将荧光素直接标记抗体作标本染色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。间接荧光法：间接荧光法：间接荧光法：间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用一抗与标本中的抗原结合，再用一抗与标本中的抗原结合，再用一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感用荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可性比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增用于多种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。加。加。加。补体结合免疫荧光法：补体结合免疫荧光法：补体结合免疫荧光法：补体结合免疫荧光法：此法是在间接法的第一此法是在间接法的第一此法是在间接法的第一此法是在间接法的第一步抗原步抗原步抗原步抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3C3抗抗抗抗体进行示踪。体进行示踪。体进行示踪。体进行示踪。间间接接免免疫疫荧荧光光法法示示意意图图免免疫疫荧荧光光显显微微技技术术（2）、酶免疫测定）、酶免疫测定(Enzyme Immunoassay,EIA)是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，HRP和碱性磷酸酶，和碱性磷酸酶，AP)标记的抗体进标记的抗体进行的抗原抗体反应。行的抗原抗体反应。EIA将抗原抗体反将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。常用的方法有酶联免疫吸附试验和果。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，抗体，后者测定组织中或细胞表面的抗后者测定组织中或细胞表面的抗原。原。酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间接法心法、间接法BAS-ELISA等。等。ELISA 检测抗体检测抗体（3）、放射免疫测定法）、放射免疫测定法(Radioimmunoassay,RIA)是用放射性核素标记抗原进行的免疫学是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技术。它将放射性核素显示的高灵检测技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达检测的敏感性达pg水平。常用于标记的水平。常用于标记的放射性核素有放射性核素有I125和和I131。常用于胰岛素、。常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的测定。生长激素、药物等微量物质的测定。Ag*Ab Ag 标记抗原 特异性抗体 待测抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗体复合物分离Ag*-Ab 和游离Ag*从标准曲线上读知含量测定Ag*-Ab和/或游离Ag*放射性 放放射射免免疫疫测测定定法法(RIA)示示意意图图二、二、淋巴细胞淋巴细胞 的测定的测定 检测各群体淋巴细胞的数量与检测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。为标本进行检查。（一）、免疫细胞数量检测（一）、免疫细胞数量检测1、T细胞数量检测细胞数量检测（1）、花结试验：）、花结试验：E花结试验可用花结试验可用于检测于检测T细胞数目。细胞数目。70%-80%2、B细胞数量检测细胞数量检测（2）、）、EA花结试验可用于检测花结试验可用于检测B细细胞数目。胞数目。8%-15%花结试验示意图花结试验示意图（二）、免疫细胞功能检测（二）、免疫细胞功能检测1、T细胞功能测定细胞功能测定体外法体外法体外法体外法 ：T T细胞增殖试验细胞增殖试验细胞增殖试验细胞增殖试验 形态学检查形态学检查形态学检查形态学检查 3 3H-TdRH-TdR掺入法掺入法掺入法掺入法 MTTMTT法法法法体内法体内法体内法体内法 ：用生物抗原或化学抗原作皮内试验。用生物抗原或化学抗原作皮内试验。用生物抗原或化学抗原作皮内试验。用生物抗原或化学抗原作皮内试验。OT-PPDOT-PPD皮试皮试皮试皮试 SD-SKSD-SK皮试皮试皮试皮试 淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验（形态学示意图）（形态学示意图）原理：人原理：人T细胞表面有细胞表面有PHA或或ConA受体，受体，T细胞在体外受细胞在体外受PHA或或ConA的刺激后能的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。细胞的功能。PHA刺激4872小时淋巴细胞增殖淋巴细胞增殖3H-TdR掺入法掺入法原理：将单个核细胞中加入原理：将单个核细胞中加入PHA共共同培养，在终止培养前同培养，在终止培养前815小时加小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR),经经-液体闪烁仪检测淋巴细液体闪烁仪检测淋巴细胞胞DNA的的3H-TdR掺入量，推测淋掺入量，推测淋巴细胞增殖的程度。巴细胞增殖的程度。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图掺入法）示意图靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时细胞毒试验（细胞毒试验（51Cr释放法）示意图释放法）示意图第二节第二节 免疫学防治免疫学防治提提 要要 免疫预防有人工主动免疫和人工被动免疫。免疫预防有人工主动免疫和人工被动免疫。人工自动免疫是人为地给机体注射含有具有抗原性的人工自动免疫是人为地给机体注射含有具有抗原性的物质（疫苗），使机体主动产生特异性免疫力；人工物质（疫苗），使机体主动产生特异性免疫力；人工被动免疫是直接给机体注射抗原特异性抗体等，使机被动免疫是直接给机体注射抗原特异性抗体等，使机体被动获得特异性抵抗力。体被动获得特异性抵抗力。一、人工主动免疫一、人工主动免疫 1 1、死疫苗死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。2 2、减毒活疫苗减毒活疫苗：是用减毒或无毒力的活病原体是用减毒或无毒力的活病原体是用减毒或无毒力的活病原体是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。是常用的减毒活疫苗。是常用的减毒活疫苗。是常用的减毒活疫苗。3 3、类类 毒毒 素素：细菌外毒素经甲醛处理后，失细菌外毒素经甲醛处理后，失去毒性而保留其免疫原性即为类毒素。常用的类毒素去毒性而保留其免疫原性即为类毒素。常用的类毒素有破伤风类毒素、白喉类毒素等。有破伤风类毒素、白喉类毒素等。4、新型疫苗亚单位疫苗 提取病原微生物中的有效抗原成分，制成疫苗。基因工程疫苗 利用基因工程技术，将编码有效抗原的目的基因与载体重组后导入宿主细胞，随宿主细胞的增殖，目的基因表达大量的有效的抗原成分。死疫苗和活疫苗的比较死疫苗和活疫苗的比较死疫苗死疫苗死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗活疫苗活疫苗接种途径接种途径接种途径接种途径多采取皮下注射多采取皮下注射多采取皮下注射多采取皮下注射多为模拟自然感染途多为模拟自然感染途多为模拟自然感染途多为模拟自然感染途径、少数经皮下注射径、少数经皮下注射径、少数经皮下注射径、少数经皮下注射接种剂量接种剂量接种剂量接种剂量较大较大较大较大较小较小较小较小接种次数接种次数接种次数接种次数二次或多次二次或多次二次或多次二次或多次一般一般一般一般 只需一次只需一次只需一次只需一次免疫效果免疫效果免疫效果免疫效果较差较差较差较差可靠可靠可靠可靠免疫力维持时间免疫力维持时间免疫力维持时间免疫力维持时间 数月数月数月数月11年年年年长达长达长达长达3535年以上年以上年以上年以上疫苗保存疫苗保存疫苗保存疫苗保存易于保存易于保存易于保存易于保存不易保存不易保存不易保存不易保存不良反应不良反应不良反应不良反应较大较大较大较大较小较小较小较小制品类型制品类型制品类型制品类型可多种疫苗混合使用可多种疫苗混合使用可多种疫苗混合使用可多种疫苗混合使用一般单独使用一般单独使用一般单独使用一般单独使用 二、人工被动免疫二、人工被动免疫 是给人体注射含特异性抗体的免疫血清是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染疾或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染疾病。人工被动免疫力维持的时间短，约病。人工被动免疫力维持的时间短，约23周。周。常用制剂有：常用制剂有：抗毒素抗毒素 人免疫球蛋白制剂人免疫球蛋白制剂 细胞因子制剂细胞因子制剂 单抗单抗/基因工程抗体基因工程抗体三、过继免疫 给患者转输能继续扩增的效应细胞的一种治疗方法。如：骨髓移植、LAK细胞法。四、计划免疫 根据某些特定传染病的疫情监测和人群免疫状态分析，按照规定的程序有计划地进行人群预防接种，以提高人群免疫水平，达到控制以至消灭相应的传染病的重要措施。