循环肿瘤细胞在鼻咽癌中的研究进展_李代龙.pdf

：引用格式：李代龙，庞雅琪，刘思琪，等 循环肿瘤细胞在鼻咽癌中的研究进展 巴楚医学，（）：基金项目：湖北省卫生计生委科研基金项目（：）；吴阶平医学基金会临床科研项目（：）作者简介：李代龙，男，医师，硕士，主要从事头颈部恶性肿瘤综合治疗研究。：通信作者：许新华，男，硕士，教授、主任医师，主要从事恶性肿瘤的综合治疗研究。：循环肿瘤细胞在鼻咽癌中的研究进展李代龙庞雅琪刘思琪许新华（三峡大学 第一临床医学院 宜昌市中心人民医院肿瘤科 三峡大学 肿瘤防治中心，湖北 宜昌 ）摘要：循环肿瘤细胞（）作为一种新型生物标志物，可提供大量与肿瘤相关的信息，有效反映肿瘤特征，实时监测肿瘤的发生与发展。近年来 的检测方法取得了新进展，其在鼻咽癌的早诊、疗效及预后评估、复发和转移监测及个体化治疗等方面展现了一定潜力。本文就近年来 检测技术及其在鼻咽癌中的临床研究现状作一综述。关键词：鼻咽癌；循环肿瘤细胞；检测技术中图分类号：文献标志码：文章编号：（）o o o o o （，）（），o ；鼻咽癌是我国华南及东南亚地区最常见的头颈部恶性肿瘤，发病率高达（）万。随着放射治疗技术不断发展、放射治疗设备不断更新、临床治疗模式逐渐规范化，早期鼻咽癌患者年生存率可达 以上，但因鼻咽癌缺乏特异性症状和有效的早期诊断方法，鼻咽癌患者就诊时多处于疾病进展期。晚期鼻咽癌患者的年生存率低于，局部复发、远处转移及难以动态监测是影响预后的主要因素。因此，早发现、早诊断、早治疗是提高鼻咽癌患者生存率的关键。循环肿瘤细胞（，）指从实体瘤的原发部位或转移部位进入血液循环的肿瘤细胞。自 年 首次提出 概念以来，在乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后评估等方面的作用已得到证实。传统血清生物标志物特异性和灵敏度较低，与之相比，存在于肿瘤形成早期，可在细胞水平监测肿瘤的复发及转移。与组织病理学检测相比，检测具有无创、实时、可重复等优点。此外，的分子生物学特征有助于分析识别具有潜在治疗意义的新靶点或发现治疗巴楚医学 年第卷第期 ，耐药性的潜在机制。本文就 检测技术在鼻咽癌中的研究进展作一综述，以期为鼻咽癌患者的个体化治疗提供理论参考。检测技术 在外周血中数量较少，约占血细胞总数的 万 万。鉴于此，检测技术需具备较高的灵敏度和特异度。为提高 的检测效率和准确性，通常对血液样本中的 先富集再进行鉴定分析。分离富集技术目前常用的 分离富集技术为非特异性富集法和特异性富集法。前者利用 和正常血细胞间大小、密度及电荷等方面的差异，对 进行富集，常用技术包括过滤法、密度梯度离心分离法及电泳法。上述分离富集方法不具有特异性，可能出现假阳性结果。后者利用 与正常血细胞表面抗原的差异进行分离。包括阴性富集（剔除正常血细胞表达而 不表达的表面抗原，如 ）、阳性富集（选择 表 达 而 正 常 血 细 胞 不 表 达 的 表 面 抗原）。阳性富集最常用的抗原是上皮细胞粘附分子（，），其在大多数肿瘤细胞中表达。系统是目前唯一被美国食品和药物管理局批准用于结直肠癌、晚期乳腺癌及前列腺癌 检测的技术，它根据 表面的 表达将其分离，是较标准的检测方法，但 的异质性是检测的主要障碍。在恶性肿瘤的发生发展过程中，肿瘤细胞与周围环境相互作用，由上皮细胞向间充质细胞转化，此过程 称 为 上 皮间 质 转 化（，）。使肿瘤细胞丧失部分上皮性质，如细胞极性、细胞间黏附作用，获得了某些间质性质，如运动、侵袭、抗凋亡等。改变了肿瘤细胞类型，转化后的肿瘤细胞具有更强的转移及侵袭能力，更易在血液中存活。当 发生时，和细胞角蛋白（，）表达均减少，导致以 为基础的富集技术无法检测具有更多间质样表型的 亚群，从而造成检出率偏低。阴性富集法又称间接富集法，是利用白细胞特异性抗体（如抗 抗体）与白细胞表面抗原结合形成复合物，去除样本血液中的白细胞，间接富集靶 ，因此不受 机制引起的 上皮特征抗原丢失等因素的影响，可富集全部特征的 ，例如 阴 性、阴 性 及 具 有 其 它 特 征 的 。其缺点是富集过程中少量白细胞残留会明显影响 的纯度。针对上述问题，研究者发明了一种新技术，即 系统，该系统既具有阳性富集高敏感性的特点，又具有阴性富集高特异性的优点，捕获率高达 以上，可以更有效地从肿瘤患者血液样本中富集到不同表型的 。鉴定技术通过以上技术分离富集 后，富集细胞中可能残留部分非肿瘤细胞。因此，必须在单细胞水平上进行识别和分析。根据检测原理差异，鉴定技术可分为细胞计数法和核酸检测法。免疫荧光检测作为 鉴定的传统细胞计数方法，是通过显色剂标记的特异性抗体与肿瘤细胞表面的特异性抗原发生抗原抗体反应，对 进行鉴定和分析，并直接计数 ，以 （）（）（）（）细胞作为 鉴定标准。该方法简单高效，但因 表面抗原表达存在差异，导致其灵敏度降低。是一种广泛使用的核酸检测方法，其利用 表达特异性 来鉴定 ，可在 个白细胞的复杂背景中检测出单个 ，并量化 相关基因的表达。此方法灵敏度高，但存在较高的假阳性率，而且因检测需要破坏细胞，故无法观察到细胞形态。实际工作中常联合多种鉴定方法以提高 检测效率。在鼻咽癌中的临床应用 与鼻咽癌早期诊断早期鼻 咽 癌 患 者 预 后 较 好，年 生 存 率 可 达 。但鼻咽癌患者早期临床症状不典型，大部分患者就诊时已处于晚期。因此，亟待一种早期辅助诊断工具来改善鼻咽癌患者的预后。等 研究发现，在外周血中检测到 的慢性阻塞性肺疾病患者，年后 扫描方可发现肺部结节，表明 在肺部肿瘤的早期筛查中具有高度特异性。研究表明，当肿瘤直径 时即可在外周血中检测到 ，其对疾病早期诊断的临床价值显著优于传统影像学检查。等 研究显示，例鼻咽癌患者中 例 检测阳性，阳性率高达。黄伟义等 研究证实早期鼻咽癌患者外周血中 阳性率明显低于晚期患者。目前，鼻咽癌早期诊断尚无可靠的血清标志物，相信随着 检测技术的不断发展，其有望成为鼻咽癌早期筛查的重要指标。巴楚医学 年第卷第期 ，与鼻咽癌的个体化治疗现阶段肿瘤治疗需根据患者基因分子结构特点实现个体化治疗。携带了肿瘤全部基因，可作为基因检测样本，通过监测 的分子特征，可实时提供肿瘤的突变信息，从而指导患者靶向治疗。多项研究表明，肿瘤患者 表面人表皮生长因子受体、间变性淋巴瘤激酶及程序性细胞死亡受体配体的表达情 况 可 作 为 靶 向 和 免 疫 治 疗 疗 效 的 预 测 指标 。等 对 例鼻咽癌患者 表面的 表达情况进行连续监测，发现同步放化疗后，表达阳性患者对治疗反应不敏感，肿瘤复发和转移风险更高，且治疗后 表面 高表达是无进展生存期和总生存期缩短的独立预测指标。与鼻咽癌复发和转移的关系影响鼻咽癌预后最主要的因素是复发和转移，目前临床上监测肿瘤复发和转移主要依靠影像学检查，但其难以发现微小复发病灶。等 研究发现，例治疗后影像学评估完全缓解的鼻咽癌患者中，例外周血 检测呈阳性，阳性患者个月后影像学复查均证实肿瘤复发与进展。等 研究发现，混合型和间质型 与鼻咽癌的远处转移和淋巴结转移密切相关，而上皮型 与鼻咽癌转移无相关性。亦有研究报道多倍体 的数量与鼻咽癌远处转移密切相关。通过对 的监测（特别是高危型 ），可较早预警鼻咽癌的复发和转移，从而制定个体化诊疗计划以改善患者预后。与鼻咽癌疗效及预后的关系目前，鼻咽癌治疗后主要依靠影像学及血清肿瘤标记物来判断疗效，研究表明 可作为监测鼻咽癌治疗效果的生物标志物。等 对 例接受放疗的鼻咽癌患者进行监测，发现放疗月后患者外周血中 数量明显下降。等 通过监测 例鼻咽癌患者化疗前后外周血 ，发现化疗后病情缓解的患者外周血中 数量明显减少，病情进展的 患 者 外 周 血 中 数 量 显 著 增 加。等 研究结果亦证实 数量与鼻咽癌疗效及预后相关。等 研究发现，例转移性鼻咽癌患者经一线化疗后，影像学评估为完全缓解或部分缓解的患者中，外周血未检测出 的患者生存期较长。同样，等 研究发现，治疗后外周血中 较治疗前增多的患者，无进展生存期明显缩短。等 研究证实，是鼻咽癌患者不良预后的独立危险因素。患者预后还与肿瘤 分期有关，分期越晚预后越差。等 对 例鼻咽癌患者的外周血进行检测后发现，检出率为（），阳 性 率 为 （定 义 个为阳性），分期越晚 阳性率越高。等 研究表明，数量随 分期的上升（从期至期）不断增加。另有研究认为 数量或阳性率均与鼻咽癌 分期无关 。以上研究结果表明，与鼻咽癌 分期的相关性存在争议，这可能与 的检测方法有关，也可能与不同研究者对截断值的判断不同有关。总结与展望 检测作为一种新型的“液体活检”技术，与传统的穿刺活检相比，具有无创、便捷、可重复操作等优点，在鼻咽癌的诊断中具有广阔应用前景。由于目前国际上尚无统一的 检测标准，且不同个体 分子表型存在差异，同一个体内部 也具有异质性，因此横向比较相关研究成果难以实现，加之检测成本高、检测技术的灵敏性和特异性欠佳，极大限制了 在临床中的应用。此外，的检测时机、截断值、与原发肿瘤生物学特性的一致性等方面还有待进一步研究。相信随着 检测技术的逐步发展及检测程序的不断完善，其在鼻咽癌的诊断和个体化治疗中的应用价值有望实现。参考文献：，：，（）：，：，（）：，（）：，：，：，：，（），巴楚医学 年第卷第期 ，（）：，：，：，（）：，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，：，（）：，“”，（）：，（）：，（）：黄伟义，梁锦辉，刘家豪，等鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞与临床分期的相关性研究 人人健康，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，：，（）：，（）：收稿日期 巴楚医学 年第卷第期 ，