紫外可见分光光度计标准曲线.pdf

标准曲线理论标准曲线理论 可以用吸收率来预测化合物的检测浓度下限。真正的分光光度计有一定的“动态范围”或吸收范围，在此范围内才能应用。测定非常稀的样品(高能量，高透射率，低吸收)时，受到噪声的限制。在测定高浓度样品(低能量，低透射率，高吸收)时，则受到杂散光的限制。杂散光可以定义为除了测定波长以外的任意波长的光，通过样品后被检测器测定的光。杂散光主要来自分光光度计波长选择单元的不完善性，不能真正 100%地给出单色光。杂散光导致测得的吸收小于实际样品的吸收。一般认为比尔定律适用于稀溶液或样品的吸收小于或等于十分之几的场合。实际测定时，通常需制备几个不同的已知浓度的标准，并把待测样品的浓度包括在此范围内，然后在特定的波长下测定这个系列的标准样品，用测得的吸收值对制备的浓度作图，该图通常称为“标准曲线”。根据样品的吸收值，在标准曲线上求得未知样品中相同组分的浓度。见下图。?制备样品含有 1-10 mg/mL 的化合物 A(标准系列)。?测定标准的吸收值。?吸收对浓度作图。?测定含有未知浓度化合物 A(A=0.43)的样品的吸收值。?从标准曲线，得到化合物 A 在样品中的浓度(4.25 mg/mL)。上图描述的标准曲线也常常被称为标准曲线。由图可见，吸收和浓度之间有一定的线性关系，这也表明 比尔定律适用于这一场合。有时也可使用非线性的标准曲线，但是使用非线性的标准曲线必须十分小心，因为非线性标准曲线表明至少有一个比尔定律的假设未能得到满足。很多场合，由于分析方法非常成熟，研究很彻底，对各参数的设置也很了解，以至于不必制备标准曲线，而是直接测定样品的吸收值，然后通过代数计算的方法得到样品的浓度。例如，从水样提取到丙酮中的叶绿素浓度可以用下式计算：虽然分析化学家使用较多的是吸收，但是分光光度计也可测定样品的透射率(见 碘蒸气)或入射光的透射比。吸收值和透射率的关系如下：分光光度计一般以百分数或T%显示透射率，下式可用来进行吸收值和T%之间的相互转换：相关标题 Ca=11.85A664-1.54A647-0.08A630(3)A=-logT(4)A=2-log%T(5)Page 1 of 1标准曲线理论2016-2-25mk:MSITStore:C:Program%20FilesShimadzuUVProbeUVProbe.chm:/html/Stan.