1、第 28 卷第 6 期农 业 工 程 学 报Vol.28No.62282012 年3 月Transactions of the Chinese Society of Agricultural EngineeringMar.2012高温复合菌系 WSC-6 预处理稻秆对沼气生产的影响潘云霞1,2,李文涛2,刘 爽2,李文哲2(1.西南大学工程技术学院,重庆 400716;2.东北农业大学工程学院,哈尔滨 150030)摘要:为提高稻秆在沼气生产中的水解酸化效率,寻求复合菌系 WSC-6 生长的廉价氮源,降低稻秆酸化水解的运行成本,该试验利用高温复合菌系 WSC-6,以未经处理的稻秆为碳源,分别以
2、新鲜猪粪和干猪粪为氮源,对稻秆进行生物预处理。研究结果表明,高温复合菌系 WSC-6 对新鲜猪粪中的氮源利用更充分,总氮利用率达到 81.5%,对稻秆的降解率也高于干猪粪,稻秆的总质量损失率达到 48.3%,纤维素、半纤维素和木质素的降解率分别达到 67.3%、79.3%和 27.9%。在稻秆的生物预处理中,无论采用哪种氮源方式,反应系统的 pH 值都在 6.58.2 之间变化,不会产生酸化现象。以新鲜猪粪代替蛋白胨作为稻秆生物预处理的氮源,既降低了稻秆生物预处理的运行成本,又消除了猪粪造成的环境污染,这对沼气的工业化生产具有重要的应用价值。关键词:稻秆,粪便,降解,高温复合菌系 WSC-6,
3、生物预处理,猪粪doi:10.3969/j.issn.1002-6819.2012.06.037中图分类号:X712文献标志码:A文章编号:1002-6819(2012)-06-0228-05潘云霞,李文涛,刘 爽,等.高温复合菌系WSC-6 预处理稻秆对沼气生产的影响J.农业工程学报,2012,28(6):228323.Pan Yunxia,Li Wentao,Liu Shuang,et al.Effect of pretreatment with high-temperature composite strains WSC-6 on biogasproduction of rice str
4、awJ.Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering(Transactions of the CSAE),2012,28(6):228232.(in Chinese with English abstract)0引言中国是一个农业大国,具有丰富的稻秆资源,但长期以来稻秆资源没有得到经济合理的开发利用,稻秆就地焚烧现象日趋严重1,这不仅造成了严重的环境污染,还使稻秆这一宝贵资源白白浪费。以稻秆为原料进行厌氧消化,不仅可以解决稻秆因焚烧造成的环境污染问题,还可为中国的沼气生产提供大宗原料来源。但稻秆中含有大量难降解的
5、木质素,不易被厌氧微生物利用,因此,稻秆的酸化水解就成为制约稻秆生产沼气的瓶颈。由于稻秆具有致密的组织结构,抗分解能力强,在自然环境中,需要很长时间才能分解。要利用稻秆生产沼气,首先需对稻秆进行预处理,解决稻秆的水解酸化问题。目前,国内外对稻秆预处理的研究主要集中在辐射、挤压、粉碎、化学制剂、蒸汽爆碎等几个方面2-9。但这些预处理方法存在能耗高、水耗高,易造成二次污染等问题。生物预处理是利用酶或单一菌株降解稻秆,此法具有条件温和,环境友好等特点10-13。但酶或单一菌株往往只能降解稻秆中的个别成分,降解效果不理想。收稿日期:2011-07-07修订日期:2011-11-25基金项目:“十二五”
6、国家科技支撑计划项目(2011BAD15B00);西南大学博士基金项目(SWUB2008065);中央高校基本科研业务费专项资金项目(XDJK2009C003)。作者简介:潘云霞(1973),女,重庆,副教授,博士,主要从事废弃物资源化利用研究。重庆西南大学工程技术学院,400716。Email:通信作者:李文哲(1955),男,黑龙江,教授,博士,博士生导师,主要从事生物质转化与利用研究。哈尔滨东北农业大学工程学院,150030。Email:为此人们将目光转向复合菌系,希望利用复合菌系中微生物之间的协同作用,实现木质纤维素类物质的高效转化14-20。但复合菌系生长的有机氮源通常是蛋白胨,这在
7、沼气的大规模生产中无疑会增加成本,如果能寻找到廉价的有机氮源代替高成本的蛋白胨,就能够解决用复合菌系作为接菌剂,生物预处理秸秆成本过高的问题。基于上述原因,本文利用高温复合菌系 WSC-6,以稻秆为碳源,分别以新鲜猪粪和干猪粪为氮源,对稻秆进行生物预处理,期望实现稻秆的高效降解,为稻秆的资源化利用及农业可持续发展提供新的途径。1材料与方法1.1复合菌系与培养条件复合菌系 WSC-6 由黑龙江八一农垦大学构建,该菌系经过多代传代培养,群落组成和性能趋于稳定21。将活化后的复合菌系 WSC-6 按 5%(体积比)比例接种于新鲜培养基中,混合均匀后置于 50下静置培养 7 d,每隔 24 h 取样,
8、每组 3 个重复。1.2培养基蛋白胨纤维素培养基(peptone cellulose solution,PCS)(200 mL):1.0 g NaCl,1.0 g CaCO3,0.2 g 酵母粉,2.0 g 长度为 25 cm 的稻秆,1.0 g 新鲜猪粪或干猪粪,pH 值自然,121灭菌 20 min。稻秆:纤维素质量分数为 36.71%,半纤维素质量分数为 25.12%,木质素质量分数为 3.91%,灰分及其他物质质量分数为 34.26%。猪粪:总固体(total solid,TS)质量分数为 27.11%,挥发性固体(volatility total solid,VS)质量分数为 21.
9、56%,第 6 期潘云霞等:高温复合菌系 WSC-6 预处理稻秆对沼气生产的影响229总氮(total nitrogen,TN)质量分数为 16.27 mg/g。风干稻秆未经任何处理。1.3测定指标及方法细胞浓度:以未接菌的培养基为对照,用 WFJ722可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司)在 600 nm处测定供试样品的吸光度值作为细胞浓度。稻草质量损失:将盐酸和硝酸的混合液加入到发酵结束后的发酵液中,除去残留的菌体和碳酸钙,将发酵液过滤后,再用蒸馏水反复冲洗,于 105烘箱中烘至恒质量,再称质量,计算质量损失量。半纤维素、纤维素、木质素含量:使用 Fibertec 2010型纤维分析仪(
10、丹麦 Foss 公司)进行酶法中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性洗涤木质素分析(试验方法见 Foss应用简报 AN3434 112)。pH 值:采用 SJ-3F 型便携式酸度计(精度 0.01)(上海雷磁仪器有限公司)进行测定。氨态氮和总氮的测定:采用 Kjeltec 2300 自动定氮系统(丹麦 Foss 公司)测量发酵液的氨态氮和总氮。2结果与分析2.1复合菌系 WSC-6 生长曲线微生物的生长一般要经历适应期、对数生长期、稳定期及衰亡期,OD600值可间接反映复合菌系微生物的增殖情况。以稻秆为主要碳源,猪粪为主要氮源,复合菌系 WSC-6 的生长曲线见图 1。由图 1 可以看出,无论对新鲜
11、猪粪,还是干猪粪,复合菌系 WSC-6 的 OD600值都呈现先增加后降低的趋势,而且,它们都在 01 d 增殖速度快,曲线斜率大,随后增殖速度降低。这表明,2 种氮源方式,都没有经过适应期而直接进入了对数生长期。这可能是由于复合菌系经过长期的传代驯化,已达到生态稳定性。干猪粪在 4 d 时,OD600值达到峰值,随后进入稳定期(45 d),新鲜猪粪在 13 d 进入稳定期,此时,细胞代谢旺盛。随后,2 种氮源的 OD600值都降低,这说明,反应体系的细胞浓度开始下降,复合菌系进入衰亡期。注:OD600值间接反映复合菌系微生物的增值情况。图 1复合菌系 WSC-6 的生长曲线Fig.1Grow
12、th curve of complex system WSC-62.2复合菌系中氮源的变化由于稻秆中的氮源含量很低,所以,复合菌系 WSC-6生长的氮源主要由猪粪提供。复合菌系中氨态氮的变化如图 2 所示,由图 2 可以看出,新鲜猪粪和干猪粪的氨态氮的变化都是呈现先逐渐增加,然后再逐渐降低的趋势,这和复合菌系的生长曲线是相对应的(图 1),因为氨态氮是复合菌系 WSC-6 生长过程中氮源的代谢产物,它的变化反映了复合菌系活性的不断变化。图 3 显示,复合菌系 WSC-6 对新鲜猪粪的总氮利用率(81.5%)高于干猪粪的总氮利用率(69.5%),差异显著(F=14.19,p0.05);而干猪粪的
13、氨态氮含量却高于新鲜猪粪(图2)。这说明复合菌系 WSC-6 对新鲜牛粪中的氮源利用更充分,将其大多数变成了自身的组成物质,而对干猪粪中的氮源利用不彻底。总氮利用率表示已经被复合菌系 WSC-6 利用的氮含量,虽然干猪粪的氮含量高,但由于烘干过程中的加热使得蛋白质成分发生了改变,能够被复合菌系有效利用的并不多,大多数都转换成氨态氮,没有成为复合菌系的组成成分,所以利用率反而低于新鲜猪粪。图 2稻秆生物预处理中 NH3-N 质量浓度的变化Fig.2Changes of NH3-N concentration in biological pretreatmentprocess of rice st
14、raw图 3稻秆生物预处理中 TN 利用率的变化Fig.3Utilization efficiency of TN in biological pretreatmentprocess of rice straw2.3复合菌系 WSC-6 对 pH 值的影响图 4 显示复合菌系 WSC-6 对稻秆降解过程中 pH值的影响。由图 4 可以看出,无论是新鲜猪粪,还是干猪粪,稻秆在 7 d 的降解过程中,pH 值都在 6.58.2 之间变化,这说明复合菌系 WSC-6 有很强的 pH值调节能力,不会造成系统酸化现象。利用复合菌系WSC-6 对稻秆进行降解时,会产生有机酸18,在 pH值为 7.08.0
15、 的范围内容易进行丁酸类型的发酵22,反应系统会积累较多的乙酸和丁酸,这就为下阶段的产沼气提供了充足的底物。而且,在此 pH 值范围下,复合菌系中的微生物更利于进行合成代谢,这也有利农业工程学报2012 年230于保持复合菌系的稳定性。图 4稻秆生物预处理中 pH 值的变化Fig.4Changes of pH value in biological pretreatment process ofrice straw2.4复合菌系 WSC-6 对稻秆粗纤维的影响复合菌系 WSC-6 对稻秆降解 7 d 后,稻秆的质量损失情况及各成分的变化如图 5 所示。由图 5 可以看出,新鲜猪粪在稻秆降解后,
16、稻秆的总质量损失率(48.3%)和纤维素的降解率(67.3%)显著高于干猪粪的稻秆总质量损失率(35%)和纤维素的降解率(64.8%)(F=13.20,p0.05;F=8.73,p0.05),而新鲜猪粪的半纤维素(79.3%)和木质素的降解率(27.9%)虽然也高于干猪粪(73.6%和 17.4%),但差异不显著(F=0.35,p0.05;F=1.33,p0.05)。这说明,以新鲜猪粪为氮源时,复合菌系 WSC-6 对稻秆的降解率要高于干猪粪,氮源对稻秆的降解有影响;而且,对 2 种氮源,复合菌系 WSC-6对稻秆的降解都表现出相似的性质,即对稻秆中纤维素和半纤维素的降解率高,而对木质素的降解
17、率低。这是因为稻秆中的半纤维素属于多糖杂聚物,聚合度较低,因而复合菌系会优先利用这种物质,随着稻秆中半纤维素的降解,稻秆复杂的交联结构被破坏,纤维素从木质素和半纤维素的缠绕和包裹中被释放出来,进而被复合菌系 WSC-6 所利用,而木质素主要由三类丙烷结构单元构成,它和纤维素相比,难以被复合菌系降解利用,因此,稻秆总质量损失的变化主要由纤维素和半纤维素的变化构成。图 5稻秆粗纤维降解率的变化Fig.5Degradation rate changes of crude fiber in rice straw3讨论本研究中所用的 WSC-6 是一个高温复合菌系,在50下降解稻秆,7 d 的质量损失率
18、可达到 48.3%,高于以前报道的 XDC-2、BYND-8、RSS-4 等复合菌系,这些复合菌系处理稻秆 1220 d 后,稻秆的质量损失率在35.7%45.5%20,23-24。这说明高温复合菌系 WSC-6 虽然对温度的要求较高,但在降解速度和降解效率上均具有明显优势。pH 是影响微生物活性的重要因子。WSC-6 降解稻秆过程中,17 d 的 pH 值始终维持在 6.58.2 之间,这表明复合菌系 WSC-6 有较好的 pH 值自我调节能力,能够保持发酵体系的相对稳定,避免酸化现象的产生。刘爽等18,25对复合菌系 WSC-6 降解稻秆的研究表明,反应体系的发酵液相末端产物中,乙酸的浓度
19、占发酵产物总量的 90%以上,这为后续的产甲烷菌提供了直接的发酵底物。在以往复合菌系降解稻秆的研究中,主要以蛋白胨为氮源。本研究尝试以猪粪为氮源,利用复合菌系 WSC-6降解稻秆,同样取得了比较理想的降解效果;而且,以新鲜猪粪为氮源,复合菌系 WSC-6 对稻秆中纤维素、半纤维素和木质素的降解率显著高于干猪粪,表明新鲜猪粪可以作为良好的氮源应用于稻秆的生物降解。以新鲜猪粪代替蛋白胨作为氮源,既降低了稻秆生物预处理的运行成本,又消除了猪粪造成的环境污染,这对沼气的工业化生产无疑具有重要的应用价值。4结论以未经处理的稻秆为碳源,分别以新鲜猪粪和干猪粪为氮源,利用高温复合菌系 WSC-6 对稻秆进行
20、生物预处理。在稻秆的降解中,复合菌系对新鲜猪粪中的氮源利用更充分,总氮利用率达到 81.5%,对稻秆的降解率也高于干猪粪,稻秆的总质量损失率达到 48.3%,纤维素、半纤维素和木质素的降解率分别达到 67.3%、79.3%和27.9%。无论采用哪种氮源方式,反应系统的 pH 值都在6.58.2 之间变化,而且,复合菌系不经过适应期而直接接入对数生长期,提高了系统对稻秆的降解速率。参考文献1陈洪章.秸秆资源生态高值化理论与应用M.北京:化学工业出版社,2006:211.2李静,杨红霞,杨勇,等.微波强化酸预处理玉米秸秆乙醇化工艺研究J.农业工程学报,2007,23(6):199202.Li Ji
21、ng,Yang Hongxia,Yang Yong,et al.Acidpretreatmentof maize stalk by microwaveacceleration in ethonalizationprocessJ.TransactionsoftheChineseSocietyofAgricultural Engineering(Transactions of the CSAE),2007,23(6):199202.(in Chinese with English abstract)3杨勇,杨红霞,李静,等.超声波强化秸秆乙醇化原料碱预处理效果研究J.西南大学学报,2007,29(
22、7):149152.Yang Yong,Yang Hongxia,Li Jing,et al.Alkalizedpretreatment of ethanolized maize stalk accelerated byUltrasoniewaveJ.Journal of Southwest University,2007,29(7):149152.(in Chinese with English abstract)4Huang H,Yan L S,Zhang H M.Dilute sulfuric acid cyclesprayflow-throughpretreatmentofcornst
23、overfor第 6 期潘云霞等:高温复合菌系 WSC-6 预处理稻秆对沼气生产的影响231enhancement of sugar recoveryJ.Bioresource Technology,2009,100(5):18031808.5覃国栋,刘荣厚,孙辰.NaOH 预处理对水稻秸秆沼气发酵的影响J.农业工程学报,2011,27(增刊 1):5963.Qin Guodong,Liu Ronghou,Sun Chen.Effects of differentconcentrations of NaOH pretreatment on anaerobic digestionof rice
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25、on rice strawJ.Transactions of the Chinese Societyof Agricultural Engineering(Transactions of the CSAE),2010,26(4):264268.(inChinesewithEnglishabstract)7黄秋婷,张鹏,张淑荣,等.螺杆挤压连续汽爆玉米秸秆的稀酸水解效果J.农业工程学报,2009,25(7):190194.Huang Qiuting,Zhang Peng,Zhang Shurong,et al.Hydrolysiseffect of dilute acid on corn sta
26、lks by continuous screw extrusionsteam explosionJ.Transactions of the Chinese Society ofAgriculturalEngineering(TransactionsoftheCSAE),2009,25(7):190194.(inChinesewithEnglish abstract)8Hsu Teng Chieh,Guo GiaLuen,Chen WenHua,et al.Effectof dilute acid pretreatment of rice straw on structuralpropertie
27、sandenzymatichydrolysisJ.BioresourceTechnology,2010,101(13):49074913.9Wen Huachen,Ben Lipen,Ching Tsungyu,et al.Pretreamentefficiency and structural characterization of rice straw by anintegrated process of dilute-acid and steam explosion forbioethanol productionJ.Bioresource Technology,2011,102(3):
28、29162924.10 杨玉楠,陈亚松,杨敏.利用白腐菌生物预处理强化秸秆发酵产甲烷研究J.农业环境科学学报,2007,26(5):19681972.Yang Yunan,Chen Yasong,Yand Min.Methane productionfrom anaerobic fermentation of straw enhanced by biologicalpretreatmentwithwhite-rotfungiJ.JournalofAgro-Environment Science,2007,26(5):19681972.(inChinese with English abstra
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30、alcharacteristics of corn stover by different white-rot fungiJ.Bioresource Technology,2010,101(14):54755479.13 Davinia Salvach a,Alicia Prieto,Mar a L pez-Abelairas,etal.Fungal pretreament:An alternative in second-generationethanol from wheat strawJ.Bioresource Technology,2011,102(16):75007506.14 牛俊
31、玲,崔宗均,李国学,等.高效纤维素分解菌复合系的筛选构建及其对秸秆的分解特性J.农业环境科学学报,2005,24(4):795799.Niu Junling,Cui Zongjun,Li Guoxue,et al.Selection andconstructionofcompositingconsortiafordegradinglignocelluloseefficientlyanditscapabilityofstrawdegradationJ.Journal of Agro-Environment Science,2005,24(4):795799.(in Chinese with En
32、glish abstract)15 王伟东,王小芬,王彦杰,等.接种木质纤维素分解复合菌系对堆肥发酵进程的影响J.农业工程学报,2008,24(7):193198.Wang Weidong,Wang Xiaofen,Wang Yanjie,et al.Effect ofmicrobial inoculum with high lignocellulose degradationability on composting processJ.Transactions of the ChineseSociety of Agricultural Engineering(Transactions of
33、theCSAE),2008,24(7):193198.(in Chinese with Englishabstract)16 路鹏,李国学,陈丽君,等.氧浓度对复合菌系 MC1纤维素降解能力的影响J.农业工程学报,2008,24(2):209213.Lu Peng,Li Guoxue,Chen Lijun,et al.Influence ofenvironmentaloxygenconcentrationoncellulosedecomposing ability by composite microbial system MC1J.TransactionsoftheChineseSociet
34、yofAgriculturalEngineering(Transactions of the CSAE),2008,24(2):209213.(in Chinese with English abstract)17 郭鹏,王小芬,朱万斌,等.纤维素分解菌复合系 MC1分解木薯淀粉厂残渣J.环境科学,2008,29(3):795798.Guo Peng,Wang Xiaofen,Zhu Wanbin,et al.Degradation ofcassava residue by the cellulose degradation compositemicrobial system MC1J.Env
35、ironmental Science,2008,29(3):795798.(in Chinese with English abstract)18 刘爽,李文哲,王春影,等.高效木质纤维素分解复合菌系降解稻草特性的研究J.环境工程学报,2010,4(3):700704.Liu Shuang,Li Wenzhe,Wang Chunying,et al.Research oncharacteristicsofdegradingstrawbyhighefficientlignocelluloses degrading m icrobial communityJ.ChineseJournal of E
36、nvironmental Engineering,2010,4(3):700704.(in Chinese with English abstract)19 K Srilekha Yadav,Shaik Naseeruddin,Sai Prashanthi G,et al.Bioethanolfermentationofofconcentratedricestrawhydrolysate using co-culture of Saccharomyces cerevisiaeand Pichia stipitisJ.Bioresource Technology,2011,102(11):647
37、36478.20 王慧,刘小平,郭鹏,等.复合菌系 XDC-2 分解未经化学处理的水稻秸秆J.农业工程学报,2011,27(增刊 1):8690.Wang Hui,Liu Xiaoping,Guo Peng,et al.Degradationofricestrawwithoutchemicalpretreatmentbyacomposite microbial system XDC-2J.Transactions oftheChineseSocietyofAgriculturalEngineering(Transactions of the CSAE),2011,27(Suppl.1):869
38、0.(in Chinese with English abstract)21 王伟东,崔宗均,杨洪岩,等.高效稳定纤维素分解菌复合系 WSC-6 的稳定性J.中国环境科学,2005,25(5):567571.农业工程学报2012 年232Wang Weidong,Cui Zongjun,Yang Hongyan,et al.Stabilityof a composite microbial system WSC-6 with efficientcellulose degradingJ.China Environmental Science,2005,25(5):567571.(in Chine
39、se with English abstract)22 吕凡,何品晶,邵立明,等.pH 值对易腐有机垃圾厌氧发酵产物分布的影响J.环境科学,2006,27(5):991997.LFan,He Pinjing,Shao Liming,et al.Effect of pH value onfermentation pathways of biodegradable organic wasteJ.Environmental Science,2006,27(5):991997.(in Chinesewith English abstract)23 宋亚彬,戚桂娜,邓伟,等.中温木质纤维素降解复合菌系B
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41、stract)24 刘甲锋,李力,陈慧君,等.水稻秸秆腐解复合菌系RSS-4 的选育及其腐解特性J.微生物学通报,2010,37(9):12931298.Liu Jiafeng,Li Li,Chen Huijun,et al.Screening andfunctional properties of a complex microbia system RSS-4for effective decomposition of rice strawsJ.MicrobiologyChina,2010,37(9):12931298.(in Chinese with Englishabstract)25
42、刘震东,李文哲,刘爽,等.高效木质纤维素分解菌复合系的发酵特性J.东北农业大学学报,2009,40(8):105109.Liu Zhendong,Li Wenzhe,Liu Shuang,et al.Characteristicof an efficient microbial system with cellulose degradationBacteriaJ.Journal of Northeast Agricultural University,2009,40(8):105109.(in Chinese with English abstract)Effect of pretreatme
43、nt with high-temperature composite strains WSC-6 onbiogas production of rice strawPan Yunxia1,2,Li Wentao2,Liu Shuang2,Li Wenzhe2(1.College of Engineering and Technology,Southwest University,Chongqing 400716,China;2.College of Engineering,Northeast Agriculture University,Harbin 150030,China)Abstract
44、:In order to improve the acidification efficiency of rice straw in biogas production,provide cheap nitrogensource for the growth of high-temperature composite strains WSC-6,and reduce operating costs,biological pretreatmentof rice straw was carried out by high-temperature composite strains WSC-6 and
45、 using untreated rice straw as carbonsource and fresh swine manure or dried swine manure as nitrogen source.The result indicated that nitrogen source infresh swine manure could be sufficiently utilized by high-temperature composite strains WSC-6,and the utilization rateof total nitrogen reached to 8
46、1.5%.The degradation rate of rice straw in fresh swine manure was also higher than that indried swine manure,and total degradation rate of rice straw in fresh swine manure was 48.3%,and degradation rate ofcellulose,hemicellulose and lignin was 67.3%、79.3%and 27.9%,respectively.In biological pretreat
47、ment process of ricestraw,whether fresh swine manure or dried swine manure as nitrogen source,the reaction would not produceacidification with pH values ranging from 6.5 to 8.2.Fresh swine manure as nitrogen source both reduced biologicalpretreatment costs of rice straw,and eliminated the environmental pollution,which is important to improve the biogasindustrialization production.Key words:straw,manures,degradation,high-temperature composite strains WSC-6,biological pretreatment,swinemanure