高效液相色谱法测定肉制品中红色2G色素.pdf

?中国食品卫生杂志?年第?卷第?期中可能存在成分的检测方法和?地沟油?中极性成分的指纹图谱建立?以及?鉴别方法?结果表明?地沟油?中抗生素和激素含量非常低?极性成分指纹图谱的共有特征峰难确定?鉴别灵敏度较低?存在于部分?地沟油?中?因此对?地沟油?中?的测定?能为?地沟油?的鉴别提供科学的依据?且?对照品易获取?易于测定?故选择?为检测成分?但是?地沟油?的鉴别仍然是一项难题?无法仅仅通过单一的指标对其进行判定?尚需进一步研究?市售?为混合物?法检测时?出现?组?共?个特征色谱峰?由于该组特征峰共同表征?的液相色谱行为和含量大小?故采用该组峰的总峰面积进行定量计算?中?平均碳数为?烷基碳链多在?之间?色谱图呈现?个色谱峰中有?个响应值较高的色谱峰?该?个峰经?确证?按出峰顺序依次为十一烷基苯磺酸钠?分子量?分子量?十三烷基苯磺酸钠?分子量?和十四烷基苯磺酸钠?分子量?在?模 式 下 质 核 比 依 次 为?和?该?个峰共同表征?的质谱行为和含量大小?故在进行样品验证时?以该?个峰为监测指标?对?检测结果进行验证?地沟油?的检测需要简便?快速?准确?重现性好?为常用检测仪器?做为定量检测方法具有易获得?操作简便?快速?准确等优点?故本研究采用?为定量检测方法?具有分析更快速?分辨率高?灵敏度高等优点?但是该仪器的获得受到一定限制?故仅将其用于样品验证?参考文献?徐中海?柳一鸣?刘劭钢?等?泔水油的?项理化指标分析?中国公共卫生?全常春?尹平河?赵玲?等?精炼餐饮业地沟油挥发性危害成分的?静态顶空分析?食品科学?尹平河?潘剑宇?赵玲?等?薄层色谱法快速鉴别潲水油和煎炸老油的研究?中国油脂?潘剑宇?尹平河?余汉豪?等?潲水油?煎炸老油与合格食用植物油的鉴别研究?食品科学?王耀?尹平河?梁芳慧?等?紫外可见分光光度法鉴别掺兑潲水油的花生油?分析试验室?实验技术与方法收稿日期?作者简介?李静娜?女?副主任技师?研究方向为食品安全?通信作者?周敦金?男?主任医师?研究方向为公共卫生?高效液相色谱法测定肉制品中红色?色素李静娜?肖永华?张怡?黄常刚?王君?凌云?何振宇?周敦金?武汉市疾病预防控制中心?湖北 武汉?武汉市洪山区疾病预防控制中心?湖北 武汉?华中科技大学同济医学院公共卫生学院?湖北 武汉?中国检验检疫科学研究院?北京?摘?要?目的?建立肉制品中红色?色素的高效液相色谱法?并用该方法对市售肉制品进行了测定?方法?样品经沉淀蛋白质?用乙醇氨水溶液提取色素?去除脂肪?聚酰胺粉净化?采用高效液相色谱?二极管阵列检测器?检测?结果?法测定红色?色素在?范围内有较好的线性关系?仪器最低检出量为?方法检出限为?样品加标平均回收率范围?相对标准偏差?结论?该方法适用于肉制品中红色?色素分析?具有较高的选择性和灵敏度?回收率和重现性良好?结果准确可靠?关键词?红色?色素?固相萃取?肉制品?违法添加物?食品污染物中图分类号?文献标识码?文章编号?高效液相色谱法测定肉制品中红色?色素?李静娜?等?红色?又名酸性红?酸性红?食品红?为偶氮类着色剂?溶于水?微溶于乙醇?分子式为?相对分子质量?以苯胺和乙酰?酸为原料合成的色素?着色力强?性质稳定?不易褪色?常用在香肠?熟肉制品?含酒精饮料?果酱和奶制品中?但?年欧盟食品委员会对红色?进行了安全性评估?发现该色素被人体摄入后可能会分解出致癌物苯胺?借此推断红色?对诱发癌症有很大的可能性?欧盟委员会立即宣布在欧盟范围内禁止使用该色素?我国食品安全国家标准?食品添加剂使用标准?没有批准使用红色?色素?也就是禁止使用红色?作为食品添加剂?目前?关于红色?的检测方法有分光光度计法?液相色谱法?液相色谱?质谱联用法?等?检测的样品主要集中在饮料?糖果等基质比较简单的食品中?样品前处理较为简单?但对于检测基质复杂的肉制品中红色?的含量?我国目前尚无标准方法?由于大部分色素在紫外?可见光波长处有强烈的吸收?所以常使用液相色谱?紫外?可见光检测?本实验采用?测定了肉制品中红色?有效地解决了肉制品中红色?的高效提取及液相色谱条件的优化两大关键问题?定性准确?灵敏度高?回收率和重现性良好?结果准确可靠?可用于肉制品中红色?的日常检测?材料与方法?仪器和试剂仪器?高效液相色谱仪?型?二极管阵列检测器?型?电子天平?电子天平?超声波清洗器?高速冷冻离心机?试剂?除另有说明外?所用试剂均为分析纯?水为?规定的一级水?红色?标准品?纯 度?德 国?公司?甲醇?色谱纯?乙酸铵溶液?称 取?乙 酸 铵?加水至?溶解?经?水系滤膜过滤?海沙?化学纯?亚铁氰化钾溶液?称取?亚铁氰化钾?加水至?乙酸锌溶液?称取?乙酸锌?溶于少量水中?加入?冰乙酸?加水稀释至?乙醇氨溶液?取?乙醇加?氨水加?水混合均匀?石油醚?沸程?柠檬酸溶液?称取?柠檬酸?溶入?水中?混匀?溶液?试纸测试?聚酰胺粉?目?酸性甲醇溶液?量取?甲醇加入?柠檬酸溶液混匀?样本来源在广州市全市范围内抽检了超市?集贸市场?餐饮店的肉制品?件?测定方法?色谱条件色谱柱?美 国?公 司?流 速?柱 温?检测波长?进样量?标准曲线?红色?标准溶液?保存?个月?红 色?标 准 系 列?和?保存?将标准系列溶液?在上述色谱条件下进行测定?以标准系列溶液浓度为横坐标?以相应的峰面积为纵坐标?进行线性回归?样品处理?提取?将样品捣碎?均匀取样?称取?样品?精确至?置入?离心管中?加入?海砂?混合均匀?分别加入?亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液?沉淀蛋白?加入?乙醇氨水溶液?中国食品卫生杂志?年第?卷第?期?振摇?超声?以提取色素?离心?将溶液转入?烧杯?不要用滤纸过滤?残渣重复用?乙醇氨水溶液提取?次?至溶液无色?合并溶液于?烧杯中?水浴蒸发至溶液?以下?加入?石油醚?搅拌?静置?弃去醚层?重复?次?以脱去样品脂肪?将溶液?水浴蒸发至?以下?不得挥干?加入?水?加?柠檬酸溶液调至酸性为样品提取液?净化?将?聚酰胺粉用水调成糊状?活化?倒入加热至?的样品提取液中?混合均匀?如果吸附色素不完全可适量增加聚酰胺粉?转移至?垂融漏斗中?抽干后用?柠檬酸溶液洗涤?次?酸性甲醇溶液洗涤?次?水洗至流出液中性?甲醇洗涤?次?抽干?用?乙醇氨水溶液解吸色素?重复?次至解吸液无色?收集解吸液?水浴蒸发至?左右?切勿蒸干?溶液用柠檬酸溶液调至中性?用水定容至?离心?上 清 液 经?水 系 滤 膜 过 滤?滤 液 用?测定?结果?色谱图及光谱图在?色谱条件下红色?的最大吸收波长为?保留时间为?与共存的其他物质分离良好?柠檬黄?新红?苋菜红?靛蓝?胭脂红?日落黄?诱惑红?亮蓝?赤藓红等?种合成色素不干扰测定?其色谱图及光谱图如图?所示?标准溶液和阳性样品以及加标保留时间?最大吸收波长重现性良好?图?红色?标准色谱及光谱图?工作曲线与检测限回归方程为?红色?在?浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系?将红色?标准溶液逐级稀释至?进样量为?时?峰高?倍噪音信号?即仪器最低检出量为?仪器最低检出浓度为?样品取样?定容至?即该方法红色?的检出限为?图?阳性样品及加标色谱及光谱图?为阳性样品加标?红色?为阳性样品?图?种合成色素混合标准溶液色谱图?柠檬黄?新红?苋菜红?靛蓝?胭脂红?日落黄?诱惑红?红色?亮蓝?赤藓红?精密度及加标回收率有目的的选择了?号肉制品样品?其中?号样品无色素?号样品分别含有诱惑红?红色?和胭脂红等红色色素?分别将?号样品捣碎?将?种不同标准加入量的红色?标准溶液分别添加于?号样品中?具体添加水平见表?每个添加水平及?号样品?阳性样品?本底均平行测定?次?号样品本底平行测定?次?由表?可见?诱高效液相色谱法测定肉制品中红色?色素?李静娜?等?惑红和 胭 脂 红 不 干 扰 测 定?平 均 回 收 率 分 别 为?和?相对标准偏差分别为?号样品本底为?红色?标准 系 列平均 保留 时 间 为?相对标准偏差?用红色?标准溶液作外标定量?结果准确可靠?重现性良好?肉制品红色?含量的检测结果按照?的方法测定了?件肉制品中红色?其中?件样品检出了红色?色素?其他样品均未检出红色?即?检出红色?色素的?件样品均为散装灌肠类样品?含量为?件来源于超市?件来源于集贸市场?检测的?件肉制品中灌肠类样品有?件?表?肉制品红色?测定结果和加标回收率?编号标准加入量?样品本底值?平均测定值?平均回收率?相对标准偏差?讨论?样品处理条件的选择在样品处理提取色素时?加入海砂能够提高色素的提取效率?由于肉制品含有较多的蛋白质和脂肪?选择分别加入?亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液以沉淀蛋白质?再用乙醇氨水溶液反复提取?可以将沉淀物中的色素提取出来?合并提取液?用石油醚去除提取液中的脂肪?弃去醚层?样品制备液澄清透明?如果沉淀蛋白和去脂肪同时进行?则水相和有机相之间分层不好?影响提取效率?如果不沉淀蛋白质?有些样品提取液则比较浑浊?用聚酰胺粉净化时?垂融漏斗也易堵塞?提取色素时一般不选择用滤纸过滤?因为滤纸吸附色素?会造成损失?采用高速冷冻离心后上清液直接转移的办法较好?样品处理后的溶液要控制在?以下比较好?否则回收率下降?样品净化时?一定要将聚酰胺粉预先用水润湿调成糊状?活化聚酰胺粉?否则吸附色素效率下降?由于肉制品基质较复杂?采用聚酰胺粉固相萃取小柱净化时?有些样品提取液容易堵塞小柱?使实验无法进行?因此选择用?垂融漏斗可以解决堵塞问题?色素经提取净化后?洗脱液用水浴锅挥发时?将洗脱液完全挥发干和将洗脱液挥发至?左右定容?前者定容后色素溶解不完全?严重影响回收率?而后者确保了良好的回收率且制备液澄清?色谱条件的选择经反复实验验证?流动相种类选择甲醇和?乙酸铵?采用梯度洗脱?见表?红色?与肉制品中其他共存物质均可良好分离?浓度分别为?的柠檬黄?新红?苋菜红?靛蓝?胭脂红?日落黄?诱惑红?亮蓝?赤藓红等?种合成色素不干扰测定?红色?峰形对称?具有较高的灵敏度?定量准确?红色?的最大吸收波长为?选择波长为?采用?色谱柱?柱温?流速?内可完成检测?见图?表?流动相?梯度?时间?乙酸铵?甲醇?检测器的选择采用?紫外?可见检测器对组分进行光谱 扫 描?可 提 高 定 性 准 确 率?比 普 通 单 一 紫外?可见检测器靠保留时间定性具有更强的优越性?通过保留时间及?定性?可避免假阳性发生?肉制品中红色?色素的测定没有国标方法?本文采用?方法测定肉制品中红色?色素?该方法具有较高的选择性和灵敏度?回收率和重现性良好?采用本方法检测市售肉制品共?件?其中阳性检出率?检出率较高且结果准确可靠?可作为市场肉制品监督监测的重要手段?参考文献?中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部?食 品 添 加 剂 使 用 卫 生 标 准?北京?中国标准出版社?