绞股蓝提取物技术要求样本.doc

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绞股蓝提取物技术要求
1 范围
本技术要求规定了保健食品原料绞股蓝提取物的技术要求、 检验方法、 检验规则和标签、 包装、 运输、 贮存要求。
本技术要求适用于以绞股蓝为原料经提取而成并作为保健食品原料的提取物。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款经过本技术要求的引用而成为本技术要求的条款。凡是标注日期的引用文件, 其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本技术要求, 可是, 鼓励根据本技术要求达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不标注日期的引用文件, 其最新版本适用于本技术要求。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 5009.11食品中总砷及无机砷的测定
GB 5009.12食品中铅的测定
GB/T 5009.15食品中镉的测定
GB/T 5009.17食品中总汞及有机汞的测定
GB/T 5009.19食品中有机氯农药多组分残留量的测定
GB 4789.1～3、 GB 4789.15 食品微生物学检验标准汇编
《中华人民共和国药典》 一部
《中华人民共和国药典》 二部
3 结构式
绞股蓝皂苷XL IX( Gypenoside XL IX) , 分子式为C52H86O21, 分子量为1047.23。

图1绞股蓝皂苷XL IX
4 技术要求
4.1 工艺要求
4.1.1 植物基源
为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum( Thunb.) Makino的干燥全草。
4.1.2 工艺过程
取绞股蓝全草, 经拣选、 洗涤后, 切成2～4cm段, 加乙醇加热回流提取两次, 提取液滤过, 合并滤液, 采用D101大孔吸附树脂和LSI-010脱盐树脂吸附净化, 回收乙醇, 浓缩成浸膏, 70℃减压干燥, 粉碎, 过筛, 装袋, 封口, 即得。
4.2 感官指标
应符合表1的规定
表1 感官指标
项目
要求
色泽
为黄白色至淡黄色。
滋味、 气味
气微, 味苦, 无异味。
性状
干燥均匀的粉末。
杂质
无肉眼可见的外来杂质。
4.3 功效成分/标志性成分
应符合表2的规定。
表2 功效成分/标志性成分
项目
指标
绞股蓝总皂苷/(g/100g) ≥
80.0
绞股蓝皂苷XL IX/( g/100g) ≥
7.0
4.4 理化指标
应符合表3的规定。
表3 理化指标
项目
指标
溶解性
在甲醇及乙醇中易溶, 在乙醚或氯仿中几乎不溶,
在石油醚( 30～60℃) 中不溶。
粒度[100目筛的经过率/(%)] ≥
90
泡沫试验
应符合规定
化学反应
应符合规定
薄层色谱
应符合规定
特征图谱
应符合规定
干燥失重/(%) ≤
5.0
炽灼残渣/(%) ≤
1.0
铅/( 以Pb计, mg/kg) ≤
0.5
镉/( 以Cd计, mg/kg) ≤
0.3
砷/( 以As计, mg/kg) ≤
0.3
汞/( 以Hg计, mg/kg) ≤
0.2
六六六/( mg/kg) ≤
0.1
滴滴涕/( mg/kg) ≤
0.1
五氯硝基苯/( mg/kg) ≤
0.1
甲醇/(mg/kg) ≤
500
正丁醇/(mg/kg) ≤
500
异丁醇/(mg/kg) ≤
500
氯仿/(mg/kg) ≤
5
正己烷/( mg/kg) ≤
5
甲苯/( mg/kg) ≤
5
对二甲苯/( mg/kg) ≤
5
邻二甲苯/( mg/kg) ≤
5
苯乙烯/( mg/kg) ≤
5
1,2-二乙基苯/( mg/kg) ≤
5
二乙烯苯/( mg/kg) ≤
1
苯/( mg/kg) ≤
1
4.5 微生物指标
应符合表4的规定。
表4 微生物指标
项目
指标
菌落总数/(cfu/g) ≤
1000
大肠菌群/(MPN/100g) ≤
40
霉菌/(cfu/g) ≤
25
酵母菌/(cfu/g) ≤
25
5 检验方法
5.1 感官检验
启开试样包装后, 立即嗅其气味和品其滋味; 取试样适量置于白色瓷盘中观察其色泽、 外观, 检查有无异物。
5.2 标志性成分检验
总皂苷和绞股蓝皂苷XL IX的含量分别按附录A和附录B中规定的检验方法测定。
5.3 理化要求
5.3.1 溶解性
按《中华人民共和国药典》 一部中凡例第二十一条中规定的方法测定。
5.3.2 粒度
按《中华人民共和国药典》 一部中附录Ⅺ B( 第二法) 单筛分法规定的方法进行测定。
5.3.3 泡沫试验
取本品0.1 g, 置试管中, 加水2 mL, 用力振摇, 产生持久性泡沫。
5.3.4 化学反应
取本品0.1 g, 置试管中, 加水5 mL, 用力振摇, 加碘试液1～2滴, 不得显蓝紫色或紫红色。
5.3.5 薄层色谱
按附录C中规定的检验方法测定。
5.3.6 特征图谱
按附录D中规定的检验方法进行测定。
5.3.7 干燥失重
按《中华人民共和国药典》 一部中附录IX G测定。
5.3.8 炽灼残渣
按《中华人民共和国药典》 一部中附录IX J测定。
5.3.9 铅
按GB 5009.12《食品中铅的测定》规定的方法进行测定。
5.3.10 镉
按GB/T 5009.15《食品中镉的测定》规定的方法进行测定。
5.3.11 砷
按GB/T 5009.11《食品中总砷及无机砷的测定》规定的方法进行测定。
5.3.12 汞
按GB/T 5009.17《食品中总汞及有机汞的测定》规定的方法进行测定。
5.3.13六六六、 滴滴涕、 五氯硝基苯
按GB/T 5009.19《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》规定的方法进行测定。
5.3.14甲醇、 正丁醇、 异丁醇、 氯仿、 正己烷、 甲苯、 对二甲苯、 邻二甲苯、 苯乙烯、 1,2-二乙基苯和二乙烯苯、 苯
按附录E中规定的检验方法进行测定。
5.4 微生物指标
5.4.1 菌落总数
按GB 4789.2规定的方法检验。
5.4.2 大肠菌群
按GB 4789.3规定的方法检验。
5.4.3 霉菌和酵母菌
按GB 4789.15规定的方法检验。
6 检验规则
6.1 批检验
按《中华人民共和国药典》 一部中附录Ⅱ A规定的方法取样, 并以混合均匀、 在一定限度内具有同一性质和质量的产品为同一批次进行检验。
6.2 检验分类
6.2.1 出厂检验
产品出厂前应由生产厂质量检验部门按4.2～4.5的要求逐批次进行检验, 经检验合格并签发质量合格证明书的产品方可出厂销售。
6.2.2 型式检验
按第4章进行型式检验。型式检验每半年进行一次, 有下列情况之一者, 亦应进行:
a) 原料有较大变化时;
b) 调整关键工艺时;
c) 更换设备或停产后, 重新恢复生产时;
d) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时。
6.3 判定规则
6.3.1 当检验结果有一项不符合本技术要求要求时, 应从同批产品中重新随机抽取两倍量的样品进行复检, 并以复检结果为准。若复检仍有一项指标不合格时, 则判该批产品为不合格。
6.3.2 微生物项目中有任何一项不符合本技术要求时, 即判为不合格, 不再复检。
6.3.3 型式检验的判定同出厂检验。
7 标签、 包装、 运输、 贮存
7.1 标签
7.1.1 包装标签上应标注: 绞股蓝提取物、 批号、 规格、 净重、 毛重、 生产日期、 执行标
准。
7.1.2 标签内容清晰可见, 标签粘贴牢固。
7.2 包装
包装材料应符合食品卫生要求。使用前应对所用包装材料进行严格的卫生检查。桶装后, 加封封口签。
7.3 运输
7.3.1 运输工具应清洁、 卫生, 不得与有毒、 有害、 有腐蚀性或有异味的物品混装混运。
7.3.2 搬运时应轻装轻卸, 运输时防止挤压、 曝晒、 雨淋。
7.4 贮存
7.4.1 产品不得与有毒、 有害、 有腐蚀性或有异味的物品混合存放。
7.4.2 产品应贮存于阴凉、 干燥的仓库中。
7.5 保质期
保质期为两年。
附 录 A
(规范性附录)
绞股蓝总皂苷的测定方法
A.1 方法原理
试样经石油醚净化, 甲醇溶解提取, 显色后, 采用紫外分光光度法测定, 用外标法定量。
A.2 仪器和用具
A.2.1 紫外-可见分光光度计。
A.2.2 电子天平: 感量为0.00001 g。
A.2.3 超声波清洗仪。
A.3 试剂和溶液
除特殊注明外, 本技术要求所用试剂均为色谱纯, 水为GB/T 6682规定的一级水。
A.3.1 甲醇。
A.3.2 石油醚( 30～60 ℃) : 分析纯。
A.3.3 香草醛溶液: 称取5.0 g香草醛, 加冰乙酸溶解并定容至100 mL。
A.3.4 高氯酸: 分析纯。
A.3.5 冰乙酸。
A.3.6绞股蓝皂苷XL IX对照品: 纯度≥98.0%。
A.4 操作方法
A.4.1 对照品溶液的制备
准确称取60 ℃减压干燥3 h的绞股蓝皂苷XL IX对照品10.0 mg于5 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 制成2.0 mg/mL的溶液, 即得。
A.4.2 试样处理
称取0.1 g试样( 精确至0.001g) , 置离心管中, 加石油醚( 30～60 ℃) 10 mL, 超声处理10 min, 离心( 5000 r以上) 5 min, 弃去上清液, 残渣挥干, 加甲醇分次溶解, 转移至50 mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜( 0.45 μm) 滤过, 取续滤液, 即得。
A.4.3 测定方法
精密吸取对照品溶液及供试品溶液各100 μL, 分别置15 mL具塞试管中, 挥干, 精密加入新配制的含5%香草醛冰乙酸溶液与高氯酸( 2: 8) 的混合液2 mL, 摇匀, 密塞, 置60 ℃水浴中加热15 min, 取出, 立即放入冷水中冷却2 min, 精密加入冰乙酸10 mL, 摇匀, 以试剂作空白, 照紫外-可见分光光度法( 中国药典 一部附录V A) 试验, 在555±5 nm波长处测定吸收度, 计算, 即得。
A.5 计算
按式( 1) 计算试样中绞股蓝总皂苷的含量( g/100g)

…………………………( 1)

式中:
X ——试样中绞股蓝总皂苷的含量, 单位为克每百克( g/100g) ;
Ax ——供试品测定液的吸收度值;
As ——对照品测定液的吸收度值;
C ——对照品溶液中绞股蓝皂苷XL IX的浓度, 单位为毫克每毫升( mg/mL) ;
M ——试样质量, 单位为克( g) 。
计算结果保留至小数点后一位。
A.6 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
附 录 B
(规范性附录)
绞股蓝皂苷XL IX的测定方法
B.1 方法原理
试样经甲醇溶解提取后, 采用高效液相色谱法测定, 用外标法定量。
B.2 仪器和用具
B.2.1 高效液相色谱仪( 附紫外检测器) 。
B.2.2 电子天平: 感量为0.00001g。
B.2.3 超声波清洗仪。
B.3 试剂和溶液
除特殊注明外, 本技术要求所用试剂均为色谱纯, 水为GB/T 6682规定的一级水。
B.3.1 甲醇。
B.3.2 乙腈。
B.3.3 绞股蓝皂苷XL IX对照品: 纯度≥98.0%。
B.4 色谱条件及系统适用性
B.4.1 色谱条件
a) 色谱柱: 十八烷基硅烷键合硅胶柱( CAPCELL PAK C18 MG Ⅱ 3.0×100 mm, 3 um或相当者) 。
b) 流动相: 以乙腈为流动相A, 以水为流动相B, 按表5中的规定进行梯度洗脱。
表5 流动相梯度洗脱表
时间( min)
流速( mL/min)
流动相A( %)
流动相B( %)
0
0.5
25
75
15
0.5
35
65
35
0.5
45
55
40
0.5
45
55
41
0.5
25
75
c) 检测波长: 203 nm
B.4.2 系统适用性
理论塔板数按绞股蓝皂苷XL IX峰计算应不低于10000。
B.5 操作方法
B.5.1 对照品溶液的制备
准确称取60 ℃减压干燥3 h的绞股蓝皂苷XL IX对照品12.5 mg于25 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 制成0.5 mg/mL的溶液, 即得。
B.5.2 试样处理
称取0.05 g试样( 精确至0.0001 g) , 精密称定, 置10 mL量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理5 min, 放冷至室温, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜( 0.45 μm) 滤过, 取续滤液, 即得。
B.5.3 测定方法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5 μL注入高效液相色谱仪, 测定, 按外标法计算含量。
B.6 计算
按式( 2) 计算试样中绞股蓝皂苷XL IX的含量( g/100g)
…………………………( 2)

X ——试样中绞股蓝皂苷XL IX的含量, 单位为克每百克( g/100g) ;
Ax——供试品溶液色谱图中绞股蓝皂苷XL IX的峰面积;
As——对照品溶液色谱图中绞股蓝皂苷XL IX的峰面积;
C ——对照品溶液中绞股蓝皂苷XL IX的浓度, 单位为毫克每毫升( mg/mL) ;
M ——试样质量, 单位为克( g) 。
计算结果保留至小数点后一位。
B.7 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。
附 录 C
(规范性附录)
薄层色谱的测定方法
C.1 方法原理
试样经甲醇提取、 滤过、 薄层分离后并喷显色剂显色后, 与对照品比较定性。
C.2 仪器和用具
C.2.1 电子分析天平: 感量为0.001g。
C.2.2 层析缸。
C.2.3 超声波清洗仪。
C.2.4 硅胶G薄层板: 20cm×10cm。
C.3 试剂和对照品
除特殊注明外, 本技术要求所用试剂均为色谱纯, 水为GB/T 6682规定的一级水。
C.3.1 甲醇。
C.3.2 三氯甲烷: 分析纯。
C.3.3 乙酸乙酯: 分析纯。
C.3.4 绞股蓝皂苷XL IX对照品: 纯度≥98.0%。
C.4 操作方法
C.4.1 对照品溶液的制备
称取60 ℃减压干燥3 h的绞股蓝皂苷XL IX对照品10 mg于5 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 制成2 mg/mL的溶液, 即得。
C.4.2 试样处理
称取0.2 g试样( 精确至0.01 g) 置10 mL量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理10 min, 取出, 放冷, 滤过, 滤液浓缩至约1 mL, 作为供试品溶液。
C.4.3 测定方法
照薄层色谱法( 中国药典 一部附录Ⅵ B) 试验, 分别吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水( 15:40:22:10) 10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂, 展开, 取出, 晾干。
C.4.4 判定方法
薄层板喷以10%硫酸乙醇溶液, 在105 ℃加热至斑点显色清晰, 分别置日光和紫外光灯( 365 nm) 下检视。供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上, 日光下显相同颜色的斑点, 紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点。
附 录 D
(规范性附录)
特征图谱的测定方法
D.1 方法原理
试样经甲醇溶解提取后, 采用高效液相色谱法测定, 同标准规定的各色谱峰的相对保留时间比较。
D.2 仪器和用具
D.2.1 高效液相色谱仪( 附紫外检测器) 。
D.2.2 电子天平: 感量为0.00001 g。
D.2.3 超声波清洗仪。
D.3 试剂和溶液
除特殊注明外, 本技术要求所用试剂均为色谱纯, 水为GB/T 6682规定的一级水。
D.3.1 甲醇。
D.3.2 乙腈。
D.3.3 绞股蓝皂苷XL IX对照品: 纯度≥98.0%。
D.4 色谱条件及系统适用性
D.4.1 色谱条件
a) 色谱柱: 十八烷基硅烷键合硅胶柱( CAPCELL PAK C18 MG Ⅱ 3.0×100mm, 3um或相当者)
b) 流动相: 以乙腈为流动相A, 以水为流动相B, 按表6中的规定进行梯度洗脱。
表6 流动相梯度洗脱表
时间( min)
流速( mL/min)
流动相A( %)
流动相B( %)
0
0.5
25
75
15
0.5
35
65
35
0.5
45
55
40
0.5
45
55
41
0.5
25
75
c) 检测波长: 203 nm
D.4.2 系统适用性
理论塔板数按绞股蓝皂苷XL IX峰计算应不低于10000。
D.5 操作方法
D.5.1 参照物溶液的制备
准确称取60 ℃减压干燥3 h的绞股蓝皂苷XL IX对照品12.5 mg于25 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并定容至刻度, 制成0.5 mg/mL的溶液, 即得。
D.5.2 试样处理
称取0.05 g试样( 精确至0.0001 g) , 精密称定, 置10 mL量瓶中, 加甲醇适量, 超声处理5 min, 放冷至室温, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜( 0.45 μm) 滤过, 取续滤液, 即得。
D.5.3 测定方法
分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液5 μL, 注入高效液相色谱仪, 测定, 即得。
D.6 结果判断
供试品特征图谱中应呈现6个特征峰, 与参照物峰相应的为S峰, 计算各特征峰与S峰的相对保留时间, 应在规定值的±5%范围之内。相对保留时间规定值为: 0.59( 峰1) 、 1.00( 峰S) 、 1.27( 峰2) 、 1.42( 峰3) 、 2.08( 峰4) 、 2.60( 峰5) 。
5
4
3
2
1
S

图2 对照特征图谱
附 录 E
(规范性附录)
溶剂残留的测定方法
E.1 方法原理
样品经水溶解后, 采用顶空-气相色谱法测定, 用外标法定量。
E.2 仪器和用具
E.2.1 顶空-气相色谱仪( 附氢火焰离子化检测器) 。
E.2.2 电子天平: 感量为0.00001 g。
E.3 试剂和溶液
除特殊注明外, 本技术要求所用试剂均为色谱纯, 水为GB/T 6682规定的一级水。
E.3.1 甲醇、 正丁醇、 异丁醇、 氯仿、 正己烷、 苯、 甲苯、 对二甲苯、 邻二甲苯、 苯乙烯、
1,2-二乙基苯和二乙烯苯。
E.3.3 N,N-二甲基甲酰胺。
E.4 色谱条件及系统适用性
E.4.1 色谱条件
a) 色谱柱: 以键合/交联聚乙二醇为固定相的毛细管柱( 柱长为30 m, 内径为0.32 mm, 膜厚度为0.50 μm)
b) 柱温为程序升温, 起始温度为40 ℃, 保持5 min, 以10 ℃.min-1升温至150 ℃, 保持1 min, 再以20 ℃.min-1升温至200 ℃, 保持2 min;
c) 用氢火焰离子化检测器检测, 检测器温度250 ℃; 进样口温度200 ℃; 载气为氮气( 纯度≥99.99%) , 流速为1.5 mL.min-1;
d) 顶空进样, 顶空瓶平衡温度为90 ℃, 平衡时间为30 min。
E.4.2 系统适用性
理论板数以邻二甲苯峰计算应不低于50000。
E.5 操作方法
E.5.1 对照品溶液的制备
精密称取甲醇、 正丁醇、 异丁醇、 氯仿、 正己烷、 苯、 甲苯、 对二甲苯、 邻二甲苯、 苯乙烯、 1,2-二乙基苯和二乙烯苯对照品适量, 加50% N,N-二甲基甲酰胺溶液制成每1 mL中分别含甲醇、 正丁醇、 异丁醇、 氯仿、 正己烷、 苯、 甲苯、 对二甲苯、 邻二甲苯、 苯乙烯、 1,2-二乙基苯和二乙烯苯500 μg、 500 μg、 500 μg、 5 μg、 1 μg、 5 μg、 5 μg、 5 μg、 5 μg、 5 μg、 5 μg和1 μg的溶液, 作为对照品贮备液。精密吸取上述贮备液1 mL, 置50 mL量瓶中, 加水稀释至刻度, 摇匀, 精密量取5 mL, 置20 mL顶空瓶中, 密封, 即得。
E.5.2 供试品溶液的制备
取本品约0.1 g, 精密称定, 置20 mL顶空瓶中, 精密加入纯化水5 mL, 密封, 超声处理10 min, 即得。
E.5.3 测定方法
分别精密吸取对照品与供试品顶空气体各1 mL, 注入气相色谱仪, 测定, 按外标法计算含量。
E.6 结果计算
按式( 3) 计算试样中某溶剂的残留量( mg/kg)
…………………………( 3)
X —— 试样中某溶剂残留量, 单位为毫克每公斤( mg/kg) ;
Ax —— 供试品溶液色谱图中某溶剂的峰面积;
As —— 对照品溶液色谱图中某溶剂的峰面积;
C —— 加入对照顶空瓶中某溶剂的浓度, 单位为纳克每毫升( ng/mL) ;
V —— 顶空瓶中供试品溶液的体积, 单位为毫升( mL) ;
M —— 试样质量, 单位为克( g) 。
E.7 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。