分光光度法检测燕窝及其制品中燕窝含量.pdf

广州食品工业科技 Guangzhou food science and technology Vol.19 No3(总 76)68 中图分类号：T S 2 5 2;文献标识符：B；文章篇号:1 0 0 7-2 7 6 4(2 0 0 3)0 3-0 0 2 9-6 8 分光光度法检测燕窝及其制品中燕窝含量 黄华军 奚星林 陈文锐 陈捷（广州出入境检验检疫局食品实验室，广州 5 1 0 6 2 3）摘 要：本文利用乙酸提取燕窝中的唾液酸糖蛋白，并将其酸解为唾液酸，唾液酸与酸性茚三酮形成稳定的黄色物质，于470nm处测量吸光度。探讨了除去干扰的方法，选用纯正燕窝作为标准，可以求出样品中含纯正燕窝的百分含量。关键词:燕窝;唾液酸;分光光度法 Determination of content of bird nest by spectrophotometer Huang Huaun,Xi Xingin,Chen Wenrui,Chen Jie(Food Inspection Laboratory of Guangzhou Entry-Exit Inspection&Quarantine Bureau,Guangzhou 510623)Abstract:The method is based on the reaction between N-acetylneuramic acid and ninhydrin in acid solution.Acetic acid is used to hydrolyze bird nest and extract N-acetylneuramic acid.The way to eliminate the interfere is discussed.The content of bird nest of its products is calculated on the base of standard bird nest.Key words:bird nest;N-acetylneuramic acid;spectrophotometry.燕窝作为名贵滋补品和高级宴席佳肴，价格昂贵。国内外一些不法商人利用掺假燕窝及其制品牟取暴利。因此，研究燕窝含量的测定方法是很有意义的。据报道，现有的检测方法多凭视觉、嗅觉、简单的溶解试验和紫外荧光法。这些方法只能作定性和半定量分析。本实验室建立了水提唾液酸分光光度法1。由于提取时间长，在使用时受到一定限制。本文利用乙酸代替水提取燕窝中的唾液酸，提取时间大大缩短。除去干扰的效果也更好，回收率令人满意。1 实验部分 1.1 试剂和仪器（1）纯正燕窝（又称标准燕窝，作基准物质用。由实验室委派专人采自马来西亚，保证不含掺假物），经干燥研磨后，过100目筛使用；（2）唾液酸，Merck公司产品；（3）酸性茚三酮试剂：精确称取2.5g茚三酮，加入36%乙酸60ml和37%盐酸40ml，搅拌至茚三酮全部溶解。此试剂须新鲜配置当天使用；（4）透析袋，能透过小于10,000分子量的分子的透析袋都可用。燕窝糖蛋白的分子量为66,000,不会透过；（5）Hitachi U-2000型分光光度计。1.2 实验步骤 1.2.1 称取固体燕窝0.120.13g，放入锥形瓶中，加 收稿日期:2003-4-22 作者简介：黄华军，1967年生，工程师，从事分析检验工作 入20ml 1:1冰醋酸，加热回流10min。用自来水速冷，用水定容至50ml。取出10ml溶液于离心管中，加入一定量沉淀剂，搅拌至沉淀剂溶解，在3000rpm转速下离心10min。上清液适当稀释后取出1ml，加1ml茚三酮试剂和1ml冰醋酸，摇匀，在100水浴中加热显色10min。取出试管速冷。用1cm比色皿于470nm波长处测定吸光度。1.2.2 取匀浆过的燕窝制品20ml，透析24h，以除去糖等干扰小分子。取透析液10ml，加入冰醋酸10ml，其余与1.2.1基本相同，只是上清液不需稀释。2 结果与讨论 2.1 干扰物质的消除方法 文献1已经比较了硫酸铵、三氟乙酸、聚酰胺等吸附剂消除掺假物对燕窝测定的干扰，以硫酸铵的效果最佳。乙酸锌和亚铁氰化钾试剂组合是食品分析中除去蛋白质的常用方法，本文按文献1的方法探讨硫酸铵与该试剂组合的消除干扰的效果，结果如表1。表1 干扰试验 样品名称 银耳 猪皮 燕窝 唾液酸 样品吸光度 0.032 0.052 1.318 0.048 加硫酸铵后吸光度 0.023 0.041 0.965 0.035 加乙酸锌和亚铁氰化钾后吸光度 0.009 0.014 1.289 0.044 广州食品工业科技 Guangzhou food science and technology Vol.19 No3(总 76)69 从表1结果可以看出，乙酸锌和亚铁氰化钾对于银耳、猪皮掺假物的消除效果更理想，而对燕窝、唾液酸造成的损失也更小。因此，我们选择乙酸锌和亚铁氰化钾为沉淀剂，经试验，10ml水解液中加入0.5g乙酸锌和0.25g亚铁氰化钾效果最佳。2.2 标准曲线 配置0100/ml标准唾液酸系列溶液，然后吸取不同浓度标液1ml，加1ml冰醋酸、1ml茚三酮试剂，于水浴中加热10min，速冷后测定吸光度。曲线如图1。00.20.40.60.805 01 0 01 5 0u g/m l吸光度 图1 标准曲线 在0100/ml范围内，唾液酸含量与吸光度具有良好的线性关系，一元回归方程为：A=0.007C+0.0024，相关系数为0.9995。2.3 标准燕窝中唾液酸的含量 称取12个标准燕窝样品，按1.2.1方法测定吸光度，其中样品质量为0.1200g，离心液稀释5倍。结果如表2。表2 标准燕窝中唾液酸的含量 吸光度值 浓度值%平均值%*RSD%0.366,0.358,0.371,0.340,0.369,0.375,0.367,0.371,0.360,0.358,0.350,0.367 10.82,10.58,10.97,10.04,10.91,11.09,10.85,10.97 10.64,10.58,10.34,10.85 10.75 1.92 注；经Q 试验和C V 试验（Q 可信），消去0.3 4 0 和0.3 7 5 由此可见，在1.2.1实验条件下，标准燕窝中唾液酸的含量为10.75%。这并不表示标准燕窝中全部唾液酸的含量，唾液酸的提取量随提取时间的增加而增加，由于我们求的商品燕窝的的纯度是对标准燕窝而言，只要商品燕窝和标准燕窝在同一条件下提取，它们的相对值可用来表示商品燕窝的的纯度，样品中燕窝含量计算公式如下：（1）固体燕窝 1001075.010506=wncX 式中，X：样品中燕窝含量,%；c：从标准曲线上查到的唾液酸浓度,g/ml；50：提取后定容体积，ml；n：离心液稀释倍数；w：样品的质量，g；0.1075：1g标准燕窝中唾液酸的含量，g。（2）液体燕窝制品 1001075.010506=vcX 式中，X：样品中燕窝含量，g/100ml；c：从标准曲线上查到的唾液酸浓度，g/ml；v：样品体积，ml；50：提取后定容体积，ml；0.1075：1g标准燕窝中唾液酸的含量,g。2.4 回收率试验 取经过透析的燕窝制品10ml，加入一定量的唾液酸固体，按1.2.2方法测定吸光度。从吸光度增值可计算回收率。结果见表3。表3 回收率试验 样品名称 唾液酸本底值(mg)唾液酸加入值(mg)测得值(mg)回收率%冰糖燕窝 5.0185 5.0000 10.4192 104_ 雪蛤燕窝 4.7842 5.0000 9.5416 97.52 注：上述数据为5 次试验的平均值 2.5 结论 本方法在消除干扰方面具有一定的优越性，在计算方法上也比文献1更直观明了。回收率试验结果令人满意，适宜大量样品的快速测定。在此，感谢王志元高级工程师提供的大力帮助。参 考 文 献 1 胡国昌,陈文锐,陈捷等.食品科学,1996,17(11):4750 (上接第 7 1 页)3.2 样本添加标样盐酸克伦特罗的回收率结果(表 1)表 1 回收率结果表 样本名称 峰 面 积(M/Z86-100.0)保留时间(min)回收率(%)标样(2.5g/kg)114192 10.540 样本+标样(2.5g/kg)120362 10.549 105.40 标样(5.0g/kg)231829 10.537 样本+标样(5.0g/kg)230803 10.542 99.56 从图 1、图 2、图 3、图 4 及表 1可知，此样品预处理方法的灵敏度同标准一致，回收率均达到标准要求，而且快捷简便，试剂成本较低，省时省力，在一天内可以完成全部实验部分的检测，适合市场对猪肉进行快速检测盐酸克伦特罗残留量和对这种违禁药品的监控，保障人们的身体健康。(参考文献略)