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桂枝、柴胡与白芍分别配伍的相关药效学研究
【摘要】 目的 研究桂枝、柴胡与白芍分别配伍后的相关药效学作用。方法 以酚红比色法观察生理状态下小鼠胃排空、小肠推进功能；放免法测生理状态下小鼠血清内皮素；给予小鼠以%冰醋酸腹腔注射致痛、致炎法观察药物的抗炎、镇痛作用。结果 与正常组比较，柴芍低剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能，差异有统计学意义；柴芍高剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能；各药对组对正常小鼠血清ＥＴ含量无明显影响。与模型对照组比较，桂芍低和高剂量组、柴芍低剂量组均能减少小鼠扭体次数，差异有统计学意义；柴芍高剂量组减少小鼠扭体次数，差异有统计学意义；桂芍高剂量组降低小鼠腹腔毛细血管通透性，差异有统计学意义。结论 柴芍配伍后具有解痉作用与镇痛作用；桂芍配伍后具有镇痛、抗炎作用，且桂芍配伍后在镇痛作用方面具有协同作用。
【关键词】 桂枝；柴胡；白芍；配伍；药效学；小鼠
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 动物 昆明种小鼠２５０只，普通级，体质量ｇ，雌雄各半，由湖南中医学院动物实验中心提供实验动物。
１．１．２ 药物 桂枝、柴胡、白芍。全部药材购自湖南中医药大学第一附属医院药房，经湖南中医药大学药植教研室鉴定为正品。硫酸阿托品注射液；阿司匹林片。
１．１．３ 仪器 ＦＡ１００４电子分析天平； ＤＤ－Ｓ型低速离心机；半自动生化光谱分析仪。
１．１．４ 试剂 ＥＴ试剂盒；苯酚红，分析纯；伊文思蓝。
１．２ 方法
１．２．１ 动物分组 先按性别和体质量分层，用随机数字表法随机分为２５组。每组为１０只，各组均为雌雄各半。小鼠胃排空、小肠推进功能实验及小鼠血清ＥＴ含量测定共分１３组，正常组，桂枝低、高剂量组，白芍低、高剂量组，柴胡低、高剂量组，桂芍低、高剂量组，柴芍低、高剂量组，阿托品组，阿司匹林组，其中阿托品组为胃排空、小肠推进功能的阳性药物对照组，阿司匹林组为血清ＥＴ的阳性药物对照组；冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹腔血管通透性实验共分１２组，测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能分组中正常组换为模型对照组，去阿托品组，余组同上。
１．２．２ 药物剂量按体表面积换算，相当于成人剂量的５倍为小鼠的低剂量，１０倍为高剂量。测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能；生理状态小鼠血清ＥＴ；冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹腔血管通透性的各组小鼠用药量均为：桂枝低剂量６．５ ｇ／ｋｇ、高剂量１３ ｇ／ｋｇ；白芍低剂量６．５ ｇ／ｋｇ、高剂量１３ ｇ／ｋｇ；柴胡低剂量６．５ ｇ／ｋｇ、高剂量１３ ｇ／ｋｇ；桂芍低剂量１３ ｇ／ｋｇ、高剂量２６ ｇ／ｋｇ；柴芍低剂量１３ ｇ／ｋｇ、高剂量２６ ｇ／ｋｇ。乙酰水杨酸８０ mｇ／１００ ｇ；阿托品１ ｍｇ／１００ ｇ。
１．２．３ 小鼠胃排空、小肠推进功能测定 采用酚红定量测定法［２］。各组给药灌胃体积为０．２ ｍＬ／１０ ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ ｄ，末次给药１ ｈ后灌胃０．１％酚红０．８ ｍＬ／只，给酚红３０ ｍｉｎ后处死动物，取胃及小肠全段，并将小肠全长均分为５段．将胃肠各段放入３ ｍＬ ０．１ Ｍ ＮａＯＨ液中消化提取。经２４ ｈ消化后以１ ｍＬ ２０％三氯乙酸沉淀蛋白，经３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ，取上清液１ ｍＬ，加入３ ｍＬ ０．５ Ｍ ＮａＯＨ．混匀后于５６０ ｎｍ波长比色，记录ＯＤ值。
１．２．４ ＥＴ采用放射免疫法测定 各组给药灌胃体积为０．２ ｍＬ／１０ ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ ｄ后取血，按照试剂盒说明采用放射免疫法测定。
１．２．５ 小鼠扭体次数的观察［３］３０６ 各组给药灌胃体积为０．２ ｍＬ／１０ ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ ｄ，末次给药１ ｈ后，腹腔注射１．１％冰醋酸，注射后５～２０ ｍｉｎ内直接观察动物的扭体次数。
１．２．６ 小鼠腹腔血管通透性的测定［３］３０６ 各组给药灌胃体积为０．２ ｍＬ／１０ ｇ，１次／ｄ，连续灌胃６ ｄ，末次给药１ ｈ后，腹腔注射１．１％冰醋酸，于注射后３０ ｍｉｎ，每鼠尾静脉注射０．５％伊文思蓝生理盐水溶液０．１ ｍＬ／１０ ｇ体质量。２０ ｍｉｎ后脱颈椎处死，轻揉腹部５０次后，剪开腹部皮肤肌肉，用５ ｍＬ生理盐水冲洗腹腔．并收集腹腔液，经３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ取上清液于５９０ ｎｍ比色，记录ＯＤ值。
１．３ 统计学分析
计量资料结果用ｘ±ｓ表示，各组间比较，先进行方差齐性检验，如方差齐用两两比较用ＬＳＤ检验；如方差不齐，则按秩和Ｈ检验。全部数据用ＳＰＳＳ１２．０统计软件进行分析。结果用P值显示。
　　２ 结果
２．１ 不同配伍对正常小鼠胃肠推进功能的影响
与正常组比较，桂枝高剂量组胃、肠３段酚红低于正常组，表明其有增加胃肠推进功能的作用，差异有统计学意义；白芍低剂量组肠２段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有抑制作用，差异有统计学意义；柴芍低剂量组肠２段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有抑制作用，差异有统计学意义；白芍高剂量组肠３与肠５段、柴芍高剂量组肠２段、阿托品组肠２与肠５段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有显着抑制作用，差异有统计学意义。其余各中药组对胃排空及小肠推进功能的影响无统计学意义。
２．２ 不同配伍对正常小鼠血清ＥＴ的影响
与正常组比较，阿司匹林组小鼠血清ＥＴ 降低，差异有统计学意义。其余各中药组对正常小鼠血清ＥＴ的影响无统计学意义。
２．３ 不同配伍对冰醋酸致痛小鼠扭体次数及腹腔血管通透性的影响
与模型组比较，白芍低剂量组、柴芍高剂量组均具有镇痛作用，差异有统计学意义；白芍高剂量组、桂芍低剂量组、桂芍高剂量组、柴芍低剂量组、阿司匹林组均具有镇痛作用，差异有统计学意义，其中阿司匹林组作用较强；其余各组对小鼠扭体次数的影响无统计学意义。与模型组比较，桂枝低剂量组、桂芍高剂量组具有降低腹腔血管通透性的作用，差异有统计学意义；桂枝高剂量组、白芍高剂量组、阿司匹林组具有明显降低腹腔血管通透性的作用，差异有显着统计学意义。其余各组对小鼠腹腔血管通透性的影响无统计学意义。
３ 讨论
药物组合或药对的配伍及其作用体现，是方剂学的特色，而散收相配、相反相成的配伍特点尤为突出［４］。桂芍相伍，出自《伤寒论》桂枝汤。桂枝辛温，发汗通阳主动；白芍酸寒，和营敛阴主静。二者配伍，一散一敛，散收结合，发汗之中有收敛之意，和营之中有调卫之功；桂枝发散因白芍之敛而不伤阴，白芍酸敛不滞邪。柴芍相伍，首见于《伤寒论》的四逆散得桂枝之散则。白芍养血敛阴，柔肝和血，缓急止痛，清解虚热；柴胡疏肝开郁，和解退热，升举阳气。白芍酸寒收敛，能敛津液而护营血，养血以柔肝，缓急而止痛，泻肝之邪热，以补脾阴；柴胡轻清辛散，能引清阳之气上升，以疏调少阳之气，而理肝脾、调中宫、消痞满。二药伍用，相互依赖，相互促进，互制其短而展其长。故以白芍之酸敛，制柴胡之辛散，用柴胡之辛散，又佐白芍之酸敛，以引药直达少阳之经，而清胆疏肝，和解表里，升阳敛阴，解郁止痛［４］。
散收配伍在方中起相反相成的作用，但如何将这一配伍方式及其不同药对作用的多样性加以揭示，需要引入现代研究方法，以便于了解和探讨散收药对二者相配后其作用的协同性或拮抗性、是否与单味药的药效有区别。本实验结果表明，桂枝、柴胡、白芍单味药不具有的药效，配伍后可有，且其在药效方面具有协同性。如桂枝、柴胡单味药对胃肠推进功能与血管通透性均无影响，而柴芍配伍后均可抑制胃肠推进功能，解痉作用增强；桂芍、柴芍配伍后均具有镇痛作用，且桂芍高剂量配伍后作用强于白芍单味药，桂芍高剂量还可降低毛细血管通透性显示出抗炎作用。同是散收配伍的药对，桂芍、柴芍等比例配伍后既可发挥相同作用，也可发挥不同作用。如桂芍、柴芍等比例配伍后均具有镇痛作用；而桂芍等比例配伍后具有抗炎作用，柴芍等比例配伍后具有解痉作用。两组药对对血清ＥＴ均无影响，可能与其发挥作用的有效成分有关，其对于血管系统的影响也可能是通过其它途径实现的，不能认为它们对血管系统无影响。为进一步揭示桂芍、柴芍配伍后药效变化及其物质基础，今后我们将结合化学成分变化与临床疗效做相关性研究。
【参考文献】
［１］ 于友华， 王永炎， 赵宜军，等． 方剂配伍规律的研究． 中国中药杂志，２００１，２６：２１９－２２１．
［２］ 李永渝，裴德恺，高静涛． 胃排空、肠推进实验方法的改进一酚红定量测定法．中国药理学通报，１９８５：５８－６０．
［３］ 陈 奇．中药药理研究方法学．北京：人民卫生出版社，１９９６：３０６．
［４］ 欧阳建军，刘三云． 方剂散收配伍特点在不同方中的药组体现及作用．中医研究，２００３，１６：１１－１２．
［５］ 吕景山． 施今墨对药临床经验集． 太原：山西人民出版社出版，１９８２：５０．