方法确认报告及原始记录-空气微生物细菌总数.doc

北京大学环境工程实验室
检测方法确认报告
检测项目
空气微生物细菌总数的测定
确认时间
2017.5.9
确认地点
环境大楼222室
检测方法
þ GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法
þ HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范 附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法
方法类型
o 非标准方法
o 超出预定范围使用的标准方法
þ 新增项目的标准方法
o 补充和修改过的标准方法
o 自编方法
方法验证形式
o 使用国家有证标准物质进行确认
þ 与标准方法比较
o 不同人员或仪器比对
o 实验室间比对
方法实施细则
空气微生物分析检测实施细则
方法验证结果
符合标准要求，可在本实验室执行该标准。
学术委员会意见

批准人签字： 颁布实施日期：

*相关论据材料附录其后。
PKULEE-404-14-02
北京大学环境工程实验室
检测方法确认原始记录表
年 月 日
需确认的检测方法
空气微生物细菌总数的测定
方法选用依据
GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法
HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范 附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法
检测设备
采样用FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器；
生化培养箱培养
仪器主要
工作参数
FA-1型采样器采样流量28.3L/min。
生化培养箱温度设置36±1℃
原始记录：
1. 试剂制备
1.1琼脂培养基
（1）成分：A 蛋白胨 10g，B 牛肉膏 3g，C 氯化钠 5g；D琼脂 10-20g；E 蒸馏水1000mL。
（2）制备方法：将上述成分ABCE（即琼脂先不加）按比例混匀（可适当加热），用40 g/L NaOH和1:10 （体积比） HCl调节pH到7.2-7.4（尽量避免回调），分装于500玻璃三角瓶中，每瓶装250 mL，然后分别加对应的琼脂粉2.5-5 g，用8层纱布包住瓶口加上牛皮纸（或报纸）后用橡皮筋封好。放入高压蒸气灭菌器中103.43 kPa（121℃，151 b）20 min高压灭菌，储存于于冷暗处备用。
1.2灭菌铝箔，裁剪比平皿大一些的铝箔，然后灭菌 ，烘干备用。
1.3琼脂平皿
配制灭菌后的琼脂培养基趁热（50℃-55℃）倾倒平皿，每皿24-30mL（不可超过，以免造成距离采样器吸气孔太近。），生化培养箱37℃倒置培养24h，观察有无杂菌生长，选取无杂菌生长平皿备用。
1.4配置75%酒精一酒精壶。镊子棉球和棉棒若干。
2. 采样及培养步骤
þ 撞击法
检测人

检测日期
2017.5.5-2017.5.8
校验人

校验日期

北京大学环境工程实验室
检测方法确认原始记录表
续表
2.1（撞击法） 流量校准
主机插上电源（AC220V），按下“电源开关”，调节“流量调节”旋钮，使流量计转子稳定在28.3L/min。
2.2超净台杀菌：用75%的酒精把超净台实验操作台表面擦拭干净，开启紫外灯照射30min。
2.3使用棉球或棉棒粘取75％酒精擦拭六级撞击器。放置在超净台上晾干。
2.4组装采样器
保证圆盘上孔眼通畅，然后按顺序将撞击器-培养皿-撞击器装配好；一手从上部按住撞击器，另一只手挂在三个弹簧挂上挂钩。固定在选取的采样点位置得三角架上。培养皿盖用灭菌铝箔包好，待采样完后盖培养皿上。
2.5采样
连接好气路，取下顶盖。设置采样时间___5__min，使流量计转子稳定在28.3L/min。
口自然沉降法
2.1将营养琼脂培养基平皿置于采样点处，打开皿盖，暴露___/__分钟。
3培养步骤
采完样的培养皿，盖好盖子，倒置36±1℃培养48 h，菌落计数。
4.检测结果
撞击法报数结果按照CFU/m3为单位计数，
自然沉降法按CFU/皿为单位计数。
3.1.空气中微生物数量：是以每立方米空气中所含粒子数量表示。
空气中微生物数量（cfu）/m³= 所有平皿菌落数（cfu） x 1000
28.3（L/min）x 采样时间（min）
3.3各级计数结果见表____，第 页。
3.4测定结果见表____，第 页。
检测人

检测日期
2017.5.5-2017.5.8
校验人

校验日期

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北京大学环境工程实验室
检测方法确认原始记录表
续 表
表1细菌总数
样品编号
各级菌落形成单位(CFU)
总菌落数
（CFU）
采样体积
（m3）
细菌总数
（CFU/m3）
1级
2级
3级
4级
5级
6级
01
0
0
0
0
0
0
0
0.1415
0
02
0
0
0
0
0
0
0
0.1415
0
03
4
1
0
0
0
0
5
0.1415
35
04
3
1
0
0
0
0
4
0.1415
28
05
3
0
1
0
0
0
4
0.1415
28

采样点位描述：
01,02为222室内超净台平面中央位置，撞击器直接放在桌面上，流量28.3L/min，采时5min。
03,04,05为模拟采样， 222室室内中央位置，距离桌面高1m，流量28.3L/min，采时5min；室内温度22℃。相对湿度52% 。
注1.采样体积保留小数点后四位，细菌总数计算后取整。
注2.细菌总数报数时100以下报实数，大于等于100使用科学计数法记录。
检 测 人

检测日期
2017.5.5-2017.5.8
校 验 人

校验日期

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PKULEE-404-14-03
北京大学环境工程实验室
检测方法确认原始记录表
续表
5结果分析
样品编号01,02 未检出空气细菌，间接说明了采样器消毒方式可行，以及超净台内部空间洁净度达到要求。
03,04,05采样结果平行性较好，由于关门，关窗，几乎排除了空气流行性造成的影响，说明采样条件稳定时数据差异不大，采样方法可行。
222室内细菌总数测定结果：35CFU/m3。
综上所述，GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法检测空气中细菌总数的方法本实验室可以复现。本实验室具有利用撞击法开展检测空气中细菌总数的能力。
另外，比较发现，HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法和GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法，二者在内容上并无实质的区别。故不另做实验进行方法确认。

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检测人

检测日期
2017.5.5-2017.5.8
校验人

校验日期

第 页，共 页
PKULEE-404-14-03