方法确认报告及原始记录-空气微生物细菌总数.doc

北京大学环境工程实验室检测方法确认报告检测项目空气微生物细菌总数的测定确认时间2017.5.9确认地点环境大楼222室检测方法 GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法 HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范 附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法方法类型o 非标准方法o 超出预定范围使用的标准方法 新增项目的标准方法o 补充和修改过的标准方法o 自编方法方法验证形式o 使用国家有证标准物质进行确认 与标准方法比较o 不同人员或仪器比对o 实验室间比对方法实施细则空气微生物分析检测实施细则方法验证结果符合标准要求，可在本实验室执行该标准。学术委员会意见批准人签字： 颁布实施日期：*相关论据材料附录其后。PKULEE-404-14-02北京大学环境工程实验室检测方法确认原始记录表年 月 日需确认的检测方法空气微生物细菌总数的测定方法选用依据GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范 附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法检测设备采样用FA-1型六级筛孔撞击式空气微生物采样器；生化培养箱培养仪器主要工作参数FA-1型采样器采样流量28.3L/min。生化培养箱温度设置361原始记录：1. 试剂制备1.1琼脂培养基（1）成分：A 蛋白胨 10g，B 牛肉膏 3g，C 氯化钠 5g；D琼脂 10-20g；E 蒸馏水1000mL。（2）制备方法：将上述成分ABCE（即琼脂先不加）按比例混匀（可适当加热），用40 g/L NaOH和1:10 （体积比） HCl调节pH到7.2-7.4（尽量避免回调），分装于500玻璃三角瓶中，每瓶装250 mL，然后分别加对应的琼脂粉2.5-5 g，用8层纱布包住瓶口加上牛皮纸（或报纸）后用橡皮筋封好。放入高压蒸气灭菌器中103.43 kPa（121，151 b）20 min高压灭菌，储存于于冷暗处备用。1.2灭菌铝箔，裁剪比平皿大一些的铝箔，然后灭菌 ，烘干备用。1.3琼脂平皿配制灭菌后的琼脂培养基趁热（50-55）倾倒平皿，每皿24-30mL（不可超过，以免造成距离采样器吸气孔太近。），生化培养箱37倒置培养24h，观察有无杂菌生长，选取无杂菌生长平皿备用。1.4配置75%酒精一酒精壶。镊子棉球和棉棒若干。2. 采样及培养步骤 撞击法检测人检测日期2017.5.5-2017.5.8校验人校验日期北京大学环境工程实验室检测方法确认原始记录表续表2.1（撞击法） 流量校准主机插上电源（AC220V），按下“电源开关”，调节“流量调节”旋钮，使流量计转子稳定在28.3L/min。2.2超净台杀菌：用75%的酒精把超净台实验操作台表面擦拭干净，开启紫外灯照射30min。2.3使用棉球或棉棒粘取75酒精擦拭六级撞击器。放置在超净台上晾干。2.4组装采样器保证圆盘上孔眼通畅，然后按顺序将撞击器-培养皿-撞击器装配好；一手从上部按住撞击器，另一只手挂在三个弹簧挂上挂钩。固定在选取的采样点位置得三角架上。培养皿盖用灭菌铝箔包好，待采样完后盖培养皿上。2.5采样 连接好气路，取下顶盖。设置采样时间_5_min，使流量计转子稳定在28.3L/min。口自然沉降法2.1将营养琼脂培养基平皿置于采样点处，打开皿盖，暴露_/_分钟。3培养步骤采完样的培养皿，盖好盖子，倒置361培养48 h，菌落计数。4.检测结果撞击法报数结果按照CFU/m3为单位计数，自然沉降法按CFU/皿为单位计数。3.1.空气中微生物数量：是以每立方米空气中所含粒子数量表示。空气中微生物数量（cfu）/m= 所有平皿菌落数（cfu） x 1000 28.3（L/min）x 采样时间（min）3.3各级计数结果见表_，第 页。3.4测定结果见表_，第 页。检测人检测日期2017.5.5-2017.5.8校验人校验日期第 页，共 页北京大学环境工程实验室检测方法确认原始记录表续 表 表1细菌总数样品编号各级菌落形成单位(CFU)总菌落数（CFU）采样体积（m3）细菌总数（CFU/m3）1级2级3级4级5级6级0100000000.141500200000000.141500341000050.1415350431000040.1415280530100040.141528采样点位描述：01,02为222室内超净台平面中央位置，撞击器直接放在桌面上，流量28.3L/min，采时5min。03,04,05为模拟采样， 222室室内中央位置，距离桌面高1m，流量28.3L/min，采时5min；室内温度22。相对湿度52% 。注1.采样体积保留小数点后四位，细菌总数计算后取整。注2.细菌总数报数时100以下报实数，大于等于100使用科学计数法记录。检 测 人检测日期2017.5.5-2017.5.8校 验 人校验日期 第 页， 共 页PKULEE-404-14-03北京大学环境工程实验室检测方法确认原始记录表续表5结果分析 样品编号01,02 未检出空气细菌，间接说明了采样器消毒方式可行，以及超净台内部空间洁净度达到要求。 03,04,05采样结果平行性较好，由于关门，关窗，几乎排除了空气流行性造成的影响，说明采样条件稳定时数据差异不大，采样方法可行。 222室内细菌总数测定结果：35CFU/m3。 综上所述，GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法检测空气中细菌总数的方法本实验室可以复现。本实验室具有利用撞击法开展检测空气中细菌总数的能力。 另外，比较发现，HJ/T 167-2004室内环境空气质量监测技术规范附录M 室内空气中细菌总数的测定方法 撞击法和GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物 细菌总数 撞击法/自然沉降法，二者在内容上并无实质的区别。故不另做实验进行方法确认。以下空白检测人检测日期2017.5.5-2017.5.8校验人校验日期第 页，共 页PKULEE-404-14-03