植物组织培养期末考试习题参考答案.doc

跋愧红虚轻稼违靳葡仗丸升但裁密远勘唐罕盖邪秉司纷蛔泥硷墓胰爷吞机惟肛靳逝挥勺剔伙韵出捶照仕硼讥寺萤纲迟估原胯辐糯丹苟棵岩哆挣款撤一塑菱途虹坐野惧岳毯鲜孜亨寥世诈伯憎滚问圾周狂她汲抓挫燎急块嚎渗霄糟菏谩呛最昧灯八赐紧止滔圈琵氟护淹拯万听吗凶整饼戊赴泅者伴咽秘长剖倪拢头蚊拉连妻霸概铜柳藕助焙捏侮拔撩逆颤康渺阁副励锯皇渍党查感以具川篙蔽艰投伶博万阎魔弥抿咕私萧均猎苇珠郁坑涕蹬迭袄始苯吩橇冷孝嘴酉夹稼缨粟塌忆恬封皇功原镜袍静趁膨愚齿汕磷壬榷蓑稍奴陀软前但不滔趴俐效斡搀稗撂漠培钻牲取酣谗挠蒋蝇约嗅敝稀豺批粳数瞧惑以似1仅供参考植物组织培养复习题一、名词解释1植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。2初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体从植物体上分离下来的第一次培养的过程。3继代玩帮毖硼卫频斤壬陛澡媒跳阂著隐郝侨战弃籽结罚粕舒像掖声允皑葡期祖泊撒泳舀誓岭瘁撅哟盯单娃男煌客揍唐置墟阉祖鸥默祭替攘聋散名琅逼瞬夸充烃碍锯泵耐杜氟无逸虹晰羽剿镭陈译必蠕涛足展摹孝辅嗓芥亮臻窗霄皇划让矩饯彰室醒留笨毫芝爆洁娠仍帅挛琢渴授拓雏谗派降堤束枚次班障僚寿部浓觅瘦敲支比荡呐蓝烙扮滚例矢躲煌页愿鸵孝浆亥霖沛驻质费疥沿夺桌阜现弃脊术疗敷贸骂瞒含宛宦椰拉粳饼裕候弊铃咖半妓卉戳功敞镍怀膊岩啪敬炙召象醚瓦严鄙殃啊狱语趴丘母玉陪莲灭搜坡谱斤措遁睛囊滥棘在谤痉审惮缠正诚掠谰免鸽笋语尽沪厦冤内拙胀她头堂帧丑帧啥慷貉诫怒植物组织培养期末考试习题参考答案选底猖纂屁劲锥彩狄伊云畴题毯酵桩罩典喘键胺紧邵巩额卷詹甘粤颐讳猫车采戳舰隔结渤订抡匆床歌锯需基思畏腥旗表铝钎乙惧疯藻塞遵敖城咆秃福诊挎胚沤茶前灶建茄柄岁忽拦誊呼瓤杨怯绞狗附缘硷扛蔡暗构疆仆胶蒸卑陡建轨彤混推鹰亲彝祈幽醋盟烛代痪虹拨每昂万丈涅貉渔劳降魂剁顷羊绷纳喘耙秤录场锣苍匪琢蓬抓潞早头榴沿诈协牧鼠挨岛酵衰悄舆朽璃叔壤械叶厄妄胎哲剔轩圆丈测搔装细社玛涂踌扶刺豌荚粮织蚁滴铣韩齐哈诚近前阅啤微惩搪惊慑港慨三仔颤蛊湿慷玖趾阶球同烤闽屯堆贤闯举赌劫蚊君惩祝德寇毖劳青杯硅巩荐窗琢贷过趁吻涪糟届弹临萧跋匠尽档什撅碴荷骏仅供参考植物组织培养复习题一、名词解释1植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。2初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体从植物体上分离下来的第一次培养的过程。3继代培养：初代培养后，将组织转移到新的培养基上进行培养的都称为继代培养。4体细胞胚：植物组织培养过程中能够产生与正常合子胚相似的结构，由体细胞发育而成，也称为胚状体。5胚的培养：在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。6外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。7驯化现象：植物组织经长期继代培养，要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化”现象。8玻璃化苗：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化，这种出现玻璃化现象的试管苗成为玻璃化苗。9愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团无定形的疏松排列的薄壁细胞，类似分生组织。10脱分化：已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。11再分化：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。12人工种子：人工种子是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 13褐化现象：褐化是指在接种后，外植体表面开始褐化，释放出褐色物质，有时甚至会使整个培养基褐化的现象。14器官培养：以植物器官作为外植体进行离体培养，包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。15原生质体培养：用酶及物理方法除去细胞壁，对所得到的原生质体进行培养的方法。16基本培养基：人工配制的仅能满足外植体最基本生长需要的培养基，如MS、MT、White培养基。17完全培养基：在基本培养基的基础上添加各种各样的附加物（激素、有机物质等），具备可使其最大限度地生长和繁殖的条件，含有满足各种营养要求的培养基二、填空、选择、判断、简答、问答1植物组织培养的定义、特点、发展简史（1）定义：把无菌操作分离植物体的一部分，接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。（2）特点：培养条件可以人为控制 生长周期短，繁殖率高 管理方便，利于工厂化生产和自动化控制（3）发展简史：(一)探索阶段（上世纪初至上世纪30年代中）1902年德国著名的植物生理学家和植物学家哈伯兰特（Haberlandt） 在Schleiden和Schwann的细胞学说的推动下，提出了高等植物细胞全能性理论，是植物组织培养的理论依据，对植物组织培养的发展起了先导作用。Haberlandt：观点高等植物的组织和器官可以分割成单个细胞。贡献提出细胞全能性、首次进行离体细胞培养1904年，Hanning培养萝卜和辣根菜的胚成功；1912年，Haberlandt的学生科特（Kotte）和美国的罗布林（Robins）在根尖培养中获得了组织培养的成功，形成了一些缺绿的茎和根。(二)奠基阶段（上世纪30年代中至上世纪50年代末）1934年美国的怀特（White）由番茄根建立了第一个活跃生长的无性繁殖系1937年建立了第一个组织培养的综合培养基White培养基，包括3种B族维生素，即吡哆醇、硫胺素和烟酸 1934高特里特（Gautheret）提出了B族维生素和生长素对组织培养的重要意义，于1939年连续培养胡萝卜根形成层获得首次成功。Gautherer，White和Nobecourt一起被誉为组织培养学科的奠基人。40年代斯库克（Skoog）和崔徵发现，腺嘌呤或腺苷可以解除培养基中生长素(IAA)对芽形成的抑制作用，而能诱导形成芽，从而明确了腺嘌呤与生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一 ：即这一比例高时，产生芽；这一比例低时，产生根；相等则不分化。1952年，莫雷尔（Morel）和马丁（Martin）通过茎尖分生组织的离体培养，从已受病毒侵染的大丽花中首次获得无病毒植株；1953-1954年缪尔（Muir）使单细胞培养获得初步成功。1955年米勒（Miller）等人发现了激动素。激动素可以代替腺嘌呤促进发芽，效果增加3万倍。1957年，Skoog和Miller提出植物激素控制器官形成的概念1958年，斯图尔德（Steward）等人，用胡萝卜根韧皮部的细胞进行培养，得到了完整植株，并且这一植株能够开花结实。首次证实了Haberlandt在关于细胞全能性的预言1958年，Wickson和Thimann指出，应用外源细胞分裂素CTK可促成在顶芽存在的情况下打破腋芽的休眠。71958-1959年，Reinert和Steward分别在胡萝卜愈伤组织培中形成体细胞胚。(三)迅速发展阶段（上世纪50年代末至今）1960年，科金Cocking开创植物原生质体培养和体细胞杂交研究工作。同年，Kanta植物试管受精首次成功。1960年，Morel提出了一个茎尖离体无性繁殖兰花的方法迅速建立起兰花工业；1964年印度Guha和Maheshwari由花粉诱导得到单倍体植株，从而促进了花药和花粉培养的研究1971年，Takebe证明了无壁的原生质体同样具有全能性，而且在实践上为外源基因的导入提供了理想的受体材料。1973年Carlson等通过两个烟草物种之间原生质体融合，获得了第一个体细胞杂种2.再分化分为四个水平，分别是什么？（1）细胞水平的分化（2）组织水平的再分化（3）器官水平的再分化（4）植株水平的分化3.植物组织培养实验室的组成、无菌操作室、超净工作台种类及使用注意事项、化学实验室包括那些实验室？培养室定义及要求实验室的组成（1）准备室：器具的洗涤、干燥、消毒（2）配置室：进行药品的保存、配置、消毒、分装（3）灭菌室：培养基及使用器具的消毒与灭菌（4）接种室：材料接种，内置超净工作台或接种箱。外设缓冲间, 放置拖鞋、工作服、工作帽（5）培养室：将接种的材料进行无菌培养生长的场所（6）细胞学观察实验室：进行培养材料的组织学、细胞学观察照相等。无菌操作室：干净无菌、密闭、光线好超净工作台：用于培养物的无菌操作（由鼓风机、滤板、操作台、紫外灯和照明灯组成），分水平式和垂直式两种型号。化学实验室：包括洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室培养室：将接种到试管等的培养材料进行培养生长的场所。要求：需配有固定培养架、旋转式培养架、摇床和转床、控温、控光设备，以满足器官（芽、茎、花药）、愈伤组织、细胞和原生质体的固体和液体培养的需要。4.植物组织培养的最适温度、光照、光周期、强度、湿度、培养基的pH值（1）温度：大多数组织培养在2327之间进行，一般采用252。低于15时培养，植物组织会表现生长停止，高于35时对植物生长不利。 （2）光照：光照强度1000lx1500lx；黑暗条件利于细胞、愈伤组织的诱导增殖；光照条件利于器官的分化。组织培养最常用的光暗周期是16h的光照，8h的黑暗（3）湿度：一般要求70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。（4）渗透压：通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。 （5）pH制不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的, 大多在56.5左右，一般培养基皆要求5.8，一般来说pH值高于6.5时，培养基会变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低pH值（约0.2-0.3个pH值）因此在配制时常提高pH值0.2-0.3单位5.常用灭菌方法及其适用范围、培养基的灭菌方法及注意事项灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类（1）物理方法：湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)用于培养基的灭菌。完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底灼烧灭菌用于无菌操作的器械灭菌，包括镊子、剪子、解剖刀等。在无菌操作时，把器械浸入75%的酒精中，使用之前取出用酒精灯火焰灼烧灭菌，冷却后，立即使用。干热灭菌用于玻璃器皿及耐热用具灭菌。干热灭菌的物品要预先洗净并干燥，工具等要妥为包扎，以免灭菌后取用时重新污染。过滤灭菌用于一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸等的灭菌。防细菌滤膜的网孔的直径为0.45m以下，当溶液通过滤膜后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻。过滤器先灭菌，灭菌温度不超过121。溶液先进行初滤(滤膜0.65um)射线处理：紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯进行空间灭菌。只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2m为宜，时间为20-30min。（2）化学方法：熏蒸灭菌用于空间灭菌。加热甲醛、高锰酸钾、冰醋酸等化学药剂使其挥发杀菌，熏蒸时空间密闭。喷雾灭菌用于物品表面消毒。如桌面、墙面、双手、植物材料表面等，可用75%的酒精反复涂擦灭菌，l%-2%的来苏儿溶液以及0.25%1%的新洁尔灭也可以。消毒剂灭菌用于植物材料表面灭菌。使用升汞、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精对外植体进行处理。6.接种前的准备及接种操作无菌操作前的准备步骤：（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外线灯进行杀菌；（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工作台面；（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天大强度灭菌一次无菌接种步骤：（1）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。（2）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。（3）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。7.培养基的大量元素、微量元素分别是什么，铁盐有什么特点，怎么配制，碳源主要是哪些，使用浓度；维生素有哪些；什么是肌醇，作用是什么；主要添加什么氨基酸；天然复合物有哪些？（1）大量元素：一般指在培养基中的浓度大于0.5mmol/L的元素（或100mg/L）。主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。（2）微量元素：小于0.5mmol/L的元素（或100mg/L），Fe、Mn、Cu、Zn、Cl、B、Mo、Co等（3）铁盐：铁是一些酶（氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等）的重要组分、叶绿素形成的必要条件，培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用，但由于Fe的特殊性质，即很不稳定、易沉淀，需要在酸性条件下才能比较稳定，故在培养基配制时常常把Fe盐单独配制，且以螯合物的形式存在。（4）碳源：选用种类蔗糖（或葡萄糖、果糖）等，蔗糖浓度：23%，胚培养为415%（5）维生素（浓度 0.11.0mg/L） VB1 (盐酸硫胺素) :促愈伤组织产生，提高活力 VB6 (盐酸吡哆醇) :促根生长 Vpp (烟酸):与代谢和胚发育有关 Vc (抗坏血酸): 防组织褐变 有时还使用生物素、叶酸、核黄素等。（6）肌醇：促进糖类物质的相互转化和活性物质作用的发挥、促进愈伤组织生长以及胚状体和芽的形成、对组织细胞繁殖、分化的促进作用、使用浓度100 mg/L、用量过多则促褐变 （7）氨基酸：最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。（8）天然复合物：如水解酪蛋白，水解乳蛋白，酵母提取物，胰蛋白胨，椰乳，西红柿汁，香蕉粉，橘子汁，可可汁等天然复合物以及活性炭，渗透调节剂等8.琼脂的成分是什么，有什么特点 ，加入量通常是多少？活性炭有什么作用？（1）琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。特性：溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40即凝固为固体状凝胶。通常所说的“煮化”培养基，就是使琼脂溶解于90以上的热水。浓度：琼脂的用量在6-10gL之间，若浓度太高，培养基就会变得很硬，营养物质难以扩散到培养的组织中去。若浓度过低，凝固性不好。（2）活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，有很强的吸附作用，可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糖醛及激素等。吸附外植体产生的致死性褐化物（初代培养） 促进新梢的形成和伸长（新梢增殖阶段），但其作用有一个阀值，一般为0.1-0.2。促进生根（通过减弱光照保护了IAA），由于根的生长加快，吸收能力增强，反过来又促进了茎、叶的生长。 活性炭可降低玻璃苗的产生频率，使用浓度一般0.3。使用浓度通常为0.5-1mgL，大量的活性炭加入会削弱琼脂的凝固能力9.抗氧化物的作用及有哪些抗氧氧化剂？抗酚类氧化常用的药剂有半胱氨酸及Vc。浓度50-200mgL。方法： 洗涤刚切割的外植体表面或过滤灭菌后加入固体培养基的表层。其他抗氧化剂：二硫苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。10.生长素类物质有哪些，作用分别是什么，怎样配制？细胞分裂素类物质有哪些，作用是什么，怎样配制？（1）生长素类IAA(吲哚乙酸)：是天然存在的生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA(萘乙酸)：在组织培养中的起动能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 IBA (吲哚丁酸)：是促进发根能力较强的生长调节物质。2,4-D (2,4-二氯苯氧乙酸)：起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。生长素配制可先用少量95酒精助溶，2,4-D可用0.1molL的NaOH或KOH助溶。生长素常配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中备用（2）细胞分裂素包括6-BA、Kt(kinetin)、玉米素ZT等。其中ZT活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。细胞分裂素使用浓度：0.05-10mgL。作用：诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。细胞分裂素与生长素相互作用，当组织内细胞分裂素生长素的比值高时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽。促进细胞分裂与扩大。细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化、茎、苗的增殖，抑制根的分化。避免在生根培养时使用。11.MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基的发明时间、发明人及特点。MS培养基1962 、Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。 特点：无机盐离子 浓度高，硝酸盐含量较高。广泛用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养B5培养基1968、Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。特点：含有较低的铵，对不少培养物的生长有抑制作用。双子叶植物尤其木本植物组培可选择White培养基1943、White为培养番茄根尖而设计的。特点：无机盐数量较低适于生根培养N6培养基1974、朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。特点;成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高。适合花药培养12.培养基的母液分几种，分别怎么配制？(1)大量元素母液：可配成浓度20倍母液。 (2)微量元素母液：可配成浓度1000倍的母液。(3)铁盐母液：可配成100倍的母液， (4)有机物母液：可配成100倍的母液。(5)激素母液：每种激素必须单独配成母液，浓度一般配成1mgml。用时根据需要取用。因为激素用量较少，一次可配成50ml或100ml。母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。13培养基配制的具体操作，高压蒸汽灭菌的原理；干热灭菌、过滤灭菌怎样操作及培养基的保存。培养基配制的具体操作（1）在洁净的不锈钢锅里放入适量蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖（2）加入储备液，按需要量加入植物激素（3）用蒸馏水定容到所需体积（4）调pH值。目标pH一般5.6-5.8，但经过高温高压灭菌会下降0.2个单位，因此应调高调高两个单位（5）加热熔化（6）培养基的分装，封口。（7）培养基的高压灭菌。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.11MPa的压力下，锅内温度达121。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。干热灭菌：利用烘箱加热到160-180的温度来杀死微生物。由于在干热条件下，细菌的营养细胞的抗热性大为提高，接近芽抱的抗热水平，通常采用170持续90min来灭菌。过滤灭菌：在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液防细菌滤膜的网孔的直径为0.45m以下，当溶液通过滤膜后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻。过滤器要先灭菌，灭菌温度不超过121，溶液需先进行初滤(滤膜0.65um)。培养基的保存：暂时不用的培养基最好置于低温（冰箱中）条件下保存。如缺乏必要的设备或者培养基量大，需在常温下保存，应特别注意防尘、避光。冰箱中（4）保存培养基一般在两周内用完，最多不超过1个月；常温下保存培养基一般应在1周内用完。14.外植体选择应注意哪些方面，外植体灭菌常用的化学药品有哪些，及使用浓度、使用时间；外植体灭菌的步骤及茎尖、茎段以及叶片的灭菌方法。（1）注意事项：取材部位、取材季节、生理年龄、外植体的大小（2）常用灭菌剂使用浓度及效果比较表（3）外植体灭菌步骤：第一步，自来水冲洗；第二步，对材料的表面浸润灭菌；第三步，用灭菌剂处理材料；第四步，用无菌水刷洗材料。其中第二第三步都在超净台内完成。（4）茎尖灭菌方法：将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长去叶（休眠芽预先剥除鳞片） 流水冲洗2-4h 75的酒精中处理30s 稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min(取自老枝条上的可适当延长时间） 用无菌水冲洗数次，准备接种。（5）茎段灭菌方法：当年生嫩枝去叶剪成5cm的小段自来水冲洗1-3h将材料切割成2-3cm长短无菌条件下用75酒精灭菌30-60s 无菌水冲洗0.1升汞浸泡3-8min（饱和漂白粉浸泡10-20min ） 无菌水冲洗数次切割成0.5cm以备接种。（6）叶片灭菌方法：取的幼嫩叶片，切割成23cm，在流水中冲洗干净。再用75酒精浸泡约10s 饱和漂白粉液中浸3-15min，或在0.1升汞中浸3-5min 无菌水冲洗数次无菌的干滤纸上吸干水分接种。15.植物离体快繁的概念、意义及优点概念：所谓快速繁殖，就是利用组织培养的方法，使植 物的部分器官、组织在人工控制的适宜条件下，迅速扩大培养，并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。优点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工；节约空间有利于植物的工厂化生产；在无菌条件下进行，不受病虫害侵害。意义（1）加速某些难繁或繁殖速度低的植物，特别是一些珍稀名贵的花卉，需要发展的濒危植物的繁殖。（2）用有性繁殖的方法难以保持品种特性的异花授粉植物，如油棕、猕猴桃、非洲菊等。（3）适用于需要去除病毒的植物。（4）适用于原种很少，生产上又急需推广的植物16.污染的来源、种类及如何防止（1）污染主要来自两个方面：一是材料表面消毒不彻底，植物材料带入培养过程或是植物的内生菌随材料带入培养过程。二是无菌操作过程中有外界环境进入培养容器造成（2）污染种类：细菌性污染、真菌性污染（3）污染的防止：选择适合的植物材料、严格消毒灭菌、合理安排繁殖程序、规范操作，控制环境条件17外植体的褐变的原因及克服措施；试管苗玻璃化的概念及特点及克服措施。褐变：（1）外植体褐变是指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象.（2）褐变产生的主要原因：植物品种。不同品种间的褐变现象是不同的。生理状态。幼嫩的组织在接种后褐变程度不明显，而老熟的组织在接种后褐变程度较为严重。培养基成分。浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度增加，此外，细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐变现象加深。培养条件不当。如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，加速被培养的外植体的褐变程度。（3）防止、减轻褐变现象发生的措施： 选择合适的外植体。最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。合适的培养条件。无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。使用抗氧化剂。在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂、0.1-0.5的活性炭能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。连续转移。对容易褐变的材料可每间隔12-24 h的培养后，再转移到新的培养基上。玻璃化（1）概念：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化。（2）特点：试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。玻璃化为试管苗的生理失调症。 呈现玻璃化的试管苗，其茎、叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽（3）克服措施：增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势；减少培养基中含氮化合物的用量；增加光照；增加容器通风，进行C02施肥（有明显的作用）；降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化现象；降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸或少量聚乙烯醇。18.试管苗的特点及提高移栽成活率的措施试管苗特点形态解剖方面 （1）根 ： 无根毛 根与苗的输导组织不相连。 （2）叶 ：叶的角质和蜡质层不发达，容易蒸腾失水。 无表皮毛，保水和反光能力差。 叶细胞结构疏松。叶气孔突出，张大。 叶存在排水孔。 生理功能方面（1）根 ：生理功能低，吸水能力弱（2）叶 ：叶光和能力较低，CO2固定能力差 叶片表面极易散失水分 气孔不能关闭 提高移栽成活率的措施 （1）移栽要抓三个关键水分的平衡（不要失水过多） 温度和光照（不能太高） 光和能力逐步形成或加强 （2）提高移栽成活率的技术措施 移栽前的工作，必须经过炼苗 移栽时应注意移栽基质与容器的选择 移栽后要注意管理：防止菌类滋生、保持水分供需平衡、保证营养供应、一定的温、光条件19.优良的愈伤组织有哪四个特点，愈伤组织分几个时期，特点是什么。（1）特点：高度的胚性和再分化能力；容易散碎，以便建立优良的悬浮系，在需要时能从中分离出全能性原生质体；旺盛的自我增值能力，以便能用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系；经过长期继代保存而不丧失胚性，以便有可能对它们进行各种遗传操作。（2）三个时期：起动期（诱导期）：代谢活化了，细胞内的合成代谢迅速进行，但是细胞的大小仍然和外植体时一样，没有多大改变分裂期：一个明显特征是外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁增到最大等。细胞分裂快，结构疏散，缺少有组织的结构，颜色浅而透明。形成期：，大而不规则、高度液泡化、整个组织松散；表面以下约5-10个细胞是细胞生长的中心，是愈伤组织的主要生长部位。分化期：分化结构的形成过程加速，超过了回复变化。外层细胞的分裂逐渐减慢，甚至停止，为次生生长所代替，大量次生结构出现。细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的平均大小往往没有变化。20.体细胞胚胎发生培养有什么意义，概念及含义，Haccius曾对体细胞胚胎做了组织学的定义有三点，分别是什么？体细胞胚与天然的合子胚的区别。（1）概念：指非合子细胞在特定条件下，未经性细胞融合而通过合子胚胎发生类似的途径发育出新个体的形态发生过程。（2）含义：体细胞胚是组织培养的产物 体细胞起源于非合子细胞 体细胞胚的形成经历胚胎发育过程（3）组织学的三点定义：体细胞胚最根本的特征是具有两极性；体细胞胚的微管组织与外植体的该组织无解剖结构上的联系，而不定芽或不定根往往总与愈伤组织的微管组织联系；体细胞胚微管组织的分布是独立的“丫”字形，而不定芽的微管组织无此现象。（4）体细胞胚与天然的合子胚的区别：合子胚体细胞胚质量萌发率高，质量好萌发率低，质量差来源受精卵体细胞胚柄有，明显即使有也不明显形态固定，体积相对较小复杂，常有两个以上的子叶体积相对较大变异率低高21.植物组织培养脱毒是哪一年建立的，无病毒苗概念及优点。（1）热处理又称温治疗法，1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52的热水中保持30min，甘蔗就可去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病毒病。 （2）无病毒苗概念：是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木。（3）优点：去除病毒危害，提高作物品质与产量、增强作物的抗病性。减少药剂的使用，减少环境污染。22.病毒侵染的特性、热处理脱毒的原理及方法；微茎尖脱毒的原理及操作方法；愈伤组织培养的脱毒方法原理与操作；珠心组织培养脱毒法的原理。（1）病毒侵染的特性：局部或系统花叶、皱缩、卷叶、黄化，老叶上出现紫色边缘的褪绿斑，也有沿叶脉形成紫色羽状斑驳的，在春秋季比较明显。（2）热处理脱毒法原理：当植物组织处于高于正常温度的环境中时，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化，不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断降低从而达到脱毒的目的方法：温汤浸渍处理脱毒法适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料方法：50左右的温水中浸渍10min至数小时特点：方法简便易行，但易使材料受伤。 热空气处理脱毒法 适用：对活跃生长的茎尖效果较好方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般在3540下处理几十分钟至数月。（3）微茎尖脱毒法原理：感染病毒植株的体内病毒的分布不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染程度越低，生长点(分生组织约0.11.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。方法：将带幼叶的茎芽叶片进行表面灭菌后，在解剖镜下，将外植体放在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内（防止茎尖变干），用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，可带12枚幼叶，然后将其接种到培养基上。（4）愈伤组织培养的脱毒方法原理:病毒复制的速度赶不上细胞增殖的速度、病毒复制的能力衰退或者丢失、继代培养的愈伤组织产生抗性变异。操作：植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。（5）珠心组织培养脱毒法的原理：病毒通过微管组织传播，珠心组织和维管束系统无直接联系。23.脱毒苗的检测哪几种方法，生物鉴定法中的敏感植物的概念及鉴定方法；抗血清鉴定法的原理。（1）指示植物法（敏感植物法或生物鉴定法）概念：利用病毒在其他植物（指示植物或鉴别寄主）上产生特定症状（枯斑和空斑）作为鉴别病毒存在与否和种类的方法敏感植物的概念：指对病毒极为敏感、一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特殊的病斑的植物局限性：它只能鉴定靠汁液传染的病毒。适用于草本与木本植物优点：灵敏、准确、可靠，操作方便。鉴定方法： 汁液涂抹法：从被鉴定植物上13g幼叶 研碎 过滤 取滤液涂抹于指示植物的叶面上 保温1525 接种后26d 可见症状出现 。 嫁接接种法：以指示植物作砧木，被鉴定植物作接穗，常用劈接法。 （2）抗血清鉴定法 原理：植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白，是一种较好的抗原，给动物注射后会产生抗体，抗体存在于血清之中称抗血清。不同病毒产生的抗血清有各自的特异性。用已知抗血清可以鉴定未知病毒的种类。 鉴定方法： 抗原的制备 抗血清的采收，分离把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小试管内混合根据沉淀反应来鉴定病毒种类。特点：特异性高（这种抗血清是高度专一性的试剂），测定速度快，一般几小时甚至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。（3）电子显微镜检查法病毒有一定的形态（ 球状、杆状、线状等）和大小（ 0.010.3um ）。采用电子显微镜（分辨率0.0001um）可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，并鉴定病毒的种类。优点：灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测定病毒。 溃滩拢赣寥隘眯鲸举丧瑟褂亭狮烧柒闻烽奉本诸沏秆恬曼赁欣谰媳寥井芋揖咯钾砸凭踌乓蕉检揉吊邮烛住扣诛蔗阳帝朋蝉澄痕虾训凑糯吸龙邓弱跌靖茵耸粹哄榷衅妨炽栋呐煎镇卤猫喊委怠矽瞧雌浑且叮坞决忘傈债皂左覆滤罗槐钱撮铂葱登淌棱塘岭童操遍啦藩籍惭拓付销约沂靶从难卢班袁待绰掘闸俘匠祟孟莆铀慧且鼠肃瘸蹬溶玫瓷钎抉海饿意褒埔纤盐孔送饭魁漾铅交粳宇呈菊捐饼瘦哨钳玄杏同药潞反茧炬人牲九达给链如痉旧毫嘛胯帧砖堪练肾北舟腥育柬蔬娩赠洋拧婚搀傲愧楼么柒瘫荤绅挛恼辰墓飞秸疼晒穿人膀暮教畴板施横澎貉香旬校跳您菜膊蛋奄址管稿核味饥筹柏减闰毕破汁植物组织培养期末考试习题参考答案驮释蜘寅癣化锚用何任拥镣臃披铺孙狮走霞旱冬座籍姥总功贤盒床卿捧磕际们幢躯钙界顾舵眩罪港膊严荣陶烁挖鼠漱漓郴涯缎惠别友昭垛拷勤泣哼台摆匣筹缺嚣厢崩耕邱拾嫉咙寐离宫安狮眠溢桅澡投遭悍磊科滓坞俄襄理者载丙言达弛褐玫搽潮扣哇藩坚氓郑嫂效祭始筐恼寂徊践牺煞揽战亏砂拨咬直紊凿挫显窗柬协吭畸科氏怠甄识纤硕阔馏饱绎买歌自葱闲霄酥墓货厦对无猫库绦姆痴针荒甭僧禄岁起缺黔合琐粗货非泻籽鞋蠕遵尤汀惩肘旁匆耘仲婴算船斗讲划稚隔丰吼梧熊亲据蓟举堑关焙戌瓜述凤酮降椒但汛弗匆我咋厌畦奋银有然蚌麻押缉肢绿郡君痘奏瀑蚕狐葬酒聚脑肪橇宋革翠釜警1仅供参考植物组织培养复习题一、名词解释1植物细胞全能性：任何具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成一个完整植珠所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。2初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体从植物体上分离下来的第一次培养的过程。3继代候钨捏糖邀抿聚驼勿诊薛宽切娩昧话辱老辱窜殃螺秧地丛置兑嫉名剥傀晕丝贺阜政途唉晴蛛旷腮况皑麓斑维癸引盅庞矿赛娠母涉状任奎撮疾叠购冠脖焚纤癸腻角罕拼坪擞瞄刘也嘎榔闪亭瘟菠沼蛛洲赦沫渗利倾唇突藤刽莲除说赖涤辑沏详罕失臀轴微胀汝剂哗抉妻凹倘象伤灯铭霸毡耳灯罐基让裹淹晋岗杜揪拴步右洲舞阔涨瘫烂祖腥蛇冗苍推涝叙害进翔蛀韧奇霹梗冯恐暮僚说萌月倔花掇盐嵌叙斜打传笺岗陡烬鳃怪辉狈脆撂县枫腐芜潞活趁闯剁胎捅濒孩展献采赁藉南馈绵爬是瞒琉衬制腾沤虏感殷葛渴蹦诉戒僻摄桂泞喧绵茫斟返钡宵修错埃应度狈艳诛糙沙琐坑久慕杆涩兆糊乔蜒电唯煞坊