3细菌的分布与外界因素对细菌的影响.pptx

细菌的分布与外界因素对细菌的影响右江民族医学院微生物与免疫学教研室右江民族医学院微生物与免疫学教研室实验内容一、细菌的分布检查一、细菌的分布检查1.空气中细菌的检查2.水中细菌的检查3.皮肤消毒试验4.飞沫中细菌的检查二、外界因素对细菌二、外界因素对细菌的影响的影响1.高压蒸汽灭菌法2.紫外线杀菌试验 3.药物敏感试验实验目的1.1.掌握标准纸片扩散法（）的原理、操作方掌握标准纸片扩散法（）的原理、操作方法、结果的判读及临床意义法、结果的判读及临床意义2.2.掌握皮肤消毒方法掌握皮肤消毒方法3.3.熟悉人体咽喉部细菌检查方法熟悉人体咽喉部细菌检查方法4.4.熟悉高压蒸汽灭菌法，紫外线灭菌方法熟悉高压蒸汽灭菌法，紫外线灭菌方法5.5.了解空气、水中细菌的检查方法了解空气、水中细菌的检查方法一、细菌的分布检查 了解微生物在自然界及正常人体的分布，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。念有着重要的意义。材 料普通琼脂平板普通琼脂平板血琼脂平板血琼脂平板 MHMH琼脂平板琼脂平板温箱温箱无菌棉签等无菌棉签等普通琼脂平板血琼脂平板空气中细菌的检查（示教）左边培养皿菌落是未被过滤空气中的细菌，右边是经过滤空气中留有的少量细菌 水中细菌的检查（示教）取水样取水样1ml 1ml 注入无菌空平皿内注入无菌空平皿内 加加15mL15mL已融化并冷却至约已融化并冷却至约4545的培养基混匀的培养基混匀 倒置于倒置于温箱培养温箱培养18-18-h h后观察结果后观察结果 1.1.分区标记分区标记 2.2.接种接种 3.3.培养培养皮肤细菌的检查：空白对照空白对照消毒后消毒后消毒前消毒前常用的皮肤消毒剂常用的皮肤消毒剂飞沫中细菌的检查用咳碟法将咽喉部细菌接种于血平板用咳碟法将咽喉部细菌接种于血平板二、外界因素对细菌的影响 当外界环境条件发生巨大改变，可导致微当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。至死亡。消毒与灭菌消毒与灭菌原理原理：微生物由蛋白质、核酸、脂类等构成，：微生物由蛋白质、核酸、脂类等构成，极易受外界条件的影响，对多种物理、化学极易受外界条件的影响，对多种物理、化学因素都敏感。因素都敏感。消毒与灭菌就是消毒与灭菌就是根据这一原根据这一原理抑制或杀死外环境中的病原微生物。理抑制或杀死外环境中的病原微生物。1.高压蒸汽灭菌法（示教）原理：利用密闭的金属锅，密闭加热使锅内蒸原理：利用密闭的金属锅，密闭加热使锅内蒸汽压力增大，温度随之升高，杀菌力增强。汽压力增大，温度随之升高，杀菌力增强。手提式高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器构造：为一双层的金属构造：为一双层的金属圆筒，两层之间盛水，圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，上方有金外层坚厚，上方有金属厚盖。螺旋能紧闭属厚盖。螺旋能紧闭盖门，使蒸汽不能外盖门，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽压力升溢，因而蒸汽压力升高，其温度亦相应的高，其温度亦相应的增高。增高。1.1.加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。2.2.盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。3.3.加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时需压力时(103.4kPa,121.3)(103.4kPa,121.3)，保持压力和温，保持压力和温度维持度维持151530min30min。4.4.待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。余气，开盖取物。使用方法注意事项：注意事项：1 1）冷空气彻底排除；）冷空气彻底排除；2 2）压力降为）压力降为“0 0”时方可打开时方可打开。在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表温度的关系见表用 途 凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、传染性污物等都可应用本法灭菌。传染性污物等都可应用本法灭菌。2.紫外线杀菌试验 原理：通过紫外线的照射，破坏及改变微生物原理：通过紫外线的照射，破坏及改变微生物的的DNADNA结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的。达到杀菌的目的。l波长波长200300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以的紫外线具有杀菌作用，其中以265266nm最强，这与最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于用于DNA，使一条，使一条DNA链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结合链上相邻的二个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，因而改变而形成双聚体，因而改变DNA的分子构型，干扰的分子构型，干扰DNA的复的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。制与转录，导致细菌的死亡或变异。l紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、紫外线释放的能量较低，故穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。时应注意防护。紫外线杀菌试验紫外线杀菌试验 优点优点 简单便捷、广谱高效、无二次污染、便于治理和实现自动化等优点。缺点缺点穿透能力弱特点材料普通琼脂平板普通琼脂平板18-24h18-24h细菌培养物细菌培养物紫外线灯等紫外线灯等方 法 细菌接种于普通平板细菌接种于普通平板 皿盖盖住半边做对照，皿盖盖住半边做对照，置紫外灯下约置紫外灯下约30cm30cm处，处，照射照射3030分钟。分钟。培养培养药物敏感试验 进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等。稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等。标准纸片扩散法（）原理：将含抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的原理：将含抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂上，药物在琼脂中扩散，在药物浓度到达的琼脂上，药物在琼脂中扩散，在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈。抑菌圈。不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度，并与该药物对反映了测试菌对该药的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（测试菌的最低抑菌浓度（MICMIC）呈负相关。）呈负相关。材 料菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液培养基：水解酪蛋白琼脂（培养基：水解酪蛋白琼脂（MHMH琼脂）琼脂）试剂：各种抗菌药物纸片（试剂：各种抗菌药物纸片（PENPEN、GENGEN、STRSTR、CHL)CHL)方法 棉试蘸取试验菌涂抹在棉试蘸取试验菌涂抹在MHMH培养基表面，均匀涂抹培养基表面，均匀涂抹3 3次次 以无菌镊子取各抗生素纸以无菌镊子取各抗生素纸片贴于表面片贴于表面 培养培养各纸片中心距24mm,纸片距平板边缘应15mmPENGENSTRCHL结果判断 量抑菌圈直量抑菌圈直径，参考试验指径，参考试验指导表导表3-63-6的标准的标准判读结果，按判读结果，按 敏感（敏感（S S）、）、中介（中介（I I）、）、耐药（耐药（R R）报告。）报告。材料分配分组分组两人一组两人一组菌种菌种金葡菌、大肠杆菌各一支金葡菌、大肠杆菌各一支培养培养基基2 2块普通平板块普通平板/组（皮肤细菌的检查、紫组（皮肤细菌的检查、紫外线杀菌试验）外线杀菌试验）2 2块块MHMH平板平板/组（药物敏感试验）组（药物敏感试验）1 1块血平板块血平板/组（咽喉部细菌的检查）组（咽喉部细菌的检查）