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串联质谱的质量保证：真正的工作从验证后开始LCLC-MS/MSMS/MS 方法已广泛应用于定量分析领域，并在临床实验室展现其独特魅力和巨大潜力，但是，任何一个进入临床诊断领域的实验检测技术的应用都无一例外地应当把检测结果的质量放在首要位置。值此 LC-MS/MS 方法开始进入我国临床诊断实验室之际，我们介绍了美国同行的开创性工作：串联质谱的质量保证探讨。他山之石，可以攻玉！我国年轻质谱工作着，应当本着对患者安全极端的负责态度，极尽全力建立完善自己的 LC-MS/MS 质量保证措施。让三重四极杆质谱仪这种高价值的设备充分发挥高价值的作用。临床实验室善于通过所建实验室质量管理体系(QMS)的方针和程序来实现质量目标。QMS 的两个关键组成是质量控制(QC)和质量保证(QA)。临床和实验室标准协会(CLSI)已为建立（为 FDA 认可方法进行常规测试的）通用 QMS 制定了一些指南。然而直到最近，实验室只有用于临床诊断的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)中实施监测的最低限度指导原则。谱芬生物Tel：尽管有些用于常规检测的一般质量措施适用于 LC-MS/MS，实验室也必须采取进一步措施，以确保不至于在进样检测后浪费开发可靠 LC-MS/MS 方法的时间和精力（这时他们在维持质量上就遇到困难了）。立足于指南立足于指南 QA 计划的指导原则是主动的而非被动的。对于 LC-MS/MS 方法，实验室必须保持警惕，确保它们抓住潜在问题。LC-MS/MS 品质首先取决于开发和验证的是准确而稳健（robust）的方法。为此，实验室拥有几个已建立的指南，如 CLSI-C62A；FDAs guidance，Bioanalytical Method Validation（FDA 导则，生物分析方法验证）；the European Medicines Agencys Guideline on Bioanalytical Method Validatio（欧洲药品局的生物分析方法验证指南）以及 the Scientific Working Group for Forensic Toxicology Standard Practices for Method Validation（科学工作组法医毒理学方法验证规范）。虽然这些为发展提供了充分的指导，但令人惊讶的是，只有 CLSI-C62A 对 QA和实施后监测（post-implementation monitoring）的提供最佳规范。然而，QA指导方针通常建议在实验室建立方法时，就应“建立可接受的范围”，这表明每个方法都会调用适合自身的质量措施。智慧的智慧的 QAQA 设计设计 尽管缺乏构建 LC-MS/MS 测试 QMS 的文献资料，临床实验室经常使用一些通用的标准质量措施。正如英国作家 John Ruskin 说的，“优质是不会从天而降，而总是努力的结果。”那么实验室应如何聪明地设计 LC-MS/MS 测试的 QA 计划呢？重中之重，实验室必须着手计划（不仅包括样品分析性能，而且也包括全程的仪器和检测性能）。实验室在处理成百上千样品并经一批批评估后，常常会有新的方法问题产生。关键是能在影响常规试验之前发现这些新问题。许多实验室使用系统适用性测试(SST)来监测仪器性能。SST 就是使用参考液来验证 LC-MS/MS 分析系统的性能。应在仪器保养、停电、仪器真空中断和开机/校准之后，以及样品分析之前用该参考液（含有分析物和内标）进行评价（见下表）。样品分析性能（LC-MS/MS QA 计划的最大组成部分）的监测可分为两类整批审查参数和单峰审查参数。前一个关注的是校准曲线的接受、内标(IS)在整批中的回收和 QC 的接受（见上表）。生成校准曲线时，实验室应采用与方法学验证中定义相同的拟合方法（线性或二次方程）及相同的加权因子（例如：1/x 或 1/x）。若拟合的适合性改变指示实验室应调查其根本原因。对于已建立的（校准）曲线而言，所有点的校准品精度都应在15%之内，除了最低浓度校准品可放宽些(20%)。此外，曲线斜率应 r 0.995。IS 的批内和批间回收率改变可指示分析过程中多个潜在问题，包括仪器漂移和充电、样品注射量不足，样品制备复原不佳，最重要的是，在个别样品中存在的不能接受的电离抑制或增强。因为实验室对于 LC-MS/MS 方法应使用标准的临床实验室质量控制规程，所以每批中分析的 QC 样品数量，至少应占患者样本总数的 5%或至少总共 6 个(重复测定三个浓度水平)。一旦实验室认为某个批可接受，每一个样品必须在预先确定的保留时间(Rt)和/或（相对于 IS 的）相对保留时间(RRt)和离子比的范围内。实验室应计算每批中校准品的平均 Rt/RRt 和离子比（限定离子流出峰面积/定量离子流出峰面积），批内和批间不应该有很大差异。某患者样本出现错误的离子比表明：可能存在峰整合失败、干扰物和/或检测灵敏度丧失。最后，全程监测检测性能是最基本的要求。一个 LC-MS/MS 的 QA 计划应包括程序每天、每周和定期维护。为确保最优 LC-MS/MS 方法和最佳仪器性能的特别考虑包括监测柱注射数、真空和 LC 压力。所有临床分析，PT 试验和每 6个月验证线性、准确性和仪器相关性(若实验室使用一台以上同样方法的仪器)不仅必需，且对于提供优质结果则是关键的。此外实验室还有用于 LC-MS/MS 方法的耗材（样品制备试剂、流动相，分析柱，校准标准，QC 材料，IS），以及通常必须手工准备的试剂。CLSI C62-A 规定所有的新批号必须与当前使用批号和检测批比较（在未设定质控点前）。同一患者的样本应与这两个批号都进行评估，以确保结果的一致。结结 论论 最令人沮丧的是，当一个测定方法没有达到规格和实验室不能够在没有大量故障排除或仪器服务的情况下报告结果。一个智慧设计的 QA 计划显著减少了仪器故障和停工。可能并非每个实验室中的每个方法都符合特定的共识性 QA 指导原则；然而，这并不否认这些参数仍有必要进行监测的事实。将来使用 QA 元数据（metadata）调查临床 LC-MS/MS 法实际性能的研究应该向实验室提供更多界定“高性能方法”（我们都应为此努力）的指导原则。作者:Kara L.Lynch,PhD 加利福尼亚大学临床化学和毒理学实验室临床助教和部门助理。原载:Clinical Laboratory News，2017.5