RNA加工水平的调控.pptx

（一）切除多余序列切除多余序列1.基因间序列的除去基因间序列的除去2.内元的除去内元的除去 可可变变剪剪接接(alternative splicing)调调控控基基因因的的表表达达，以以适适应应生生理理的的需需求求。可可变变剪剪切切的的结结果果，一一个个单单基基因因转转录录得得到到的的mRNA前前体体，可可以以产产生生多多个个蛋蛋白白质质，即即蛋白质同源体蛋白质同源体(isoform)。（二）（二）碱基修饰碱基修饰差差不不多多所所有有RNA都都是是含含有有不不同同数数量量的的修修饰饰成成分分，尤尤以以tRNA和和snRNA为为最最多多。迄迄今今RNA中中的的修修饰饰成成分分发发现现已已近近百百种种，但但对对其其功功能能的的认认识识还还不不多。多。（三）（三）RNA编辑编辑 1986年年Berme等等人人从从锥锥体体虫虫中中发发现现的的一一种种新新的的RNA加加工工方方式式。当当时时发发现现锥锥体体虫虫线线粒粒体体细细胞胞色色素素C氧氧化化酶酶亚亚基基(Co)基基因因与与酵酵母母或或人人的的相相应应基基因因相相比比，在在编编码码蛋蛋白白的的170位位氨氨基基酸酸附附近近有有一一移移码码突突变变。比比较较锥锥体体虫虫Co基基因因与与其其转转录录物物的的序序列列，发发现现转转录录序序列列在在相相应应上上述述移移码码突突变变位位点点附附近近有有四四个个不不被被基基因因DNA所所编编码码的的额额外外的的尿尿苷苷酸酸，这这四四个个尿尿苷苷酸酸正正好好校正了基因的移码突变。校正了基因的移码突变。480 490 500 510 mRNA：UUA GGU AUA AAA GUA GAU UGU AUA CCU GGU AGG UGU AAU蛋白序列蛋白序列：L G I K V D C I P G R C N DNA：TTA GGT ATA AAA GTA GA*G*A*A CCTGGT AGG TGT AAT核酸序号以核酸序号以mRNA起始密码起始密码AUG的的A开始编号。下划线标出与人及酵母相应蛋白相开始编号。下划线标出与人及酵母相应蛋白相同的氨基酸。同的氨基酸。锥体虫锥体虫T.buucei亚种亚种mRNA的编辑的编辑(不是全部不是全部)mRNA 起始密码起始密码 编辑区域编辑区域 5区区 编码区编码区 3及及PolyA 区区Co +40Co？39418 321Cyb +340 140 MURF2 +264 斜斜线线坐坐标标时时插插右右边边表表示示删删去去U。斜斜线线右右表表示示基基因因中中有有无无起始密码。右边表示编辑中有无构建起始密码。起始密码。右边表示编辑中有无构建起始密码。Mechanism of edtingRNA editing is catalyzed by a complex with seven major polypeptides,two of which correspond to distinct ligases.U deletion and U insertion involve gRNA-directed endonuclease cleavage of the pre-mRNA(shown by an arrowhead),either 3-U-exo or TUTase acting on the upstream fragment,and RNA ligase rejoining the mRNA.R,purine(s);Y,pyrimidine(s).These two forms of editing use distinct cleavage activities and distinct ligase enzymes,and the 3-U-exo is not a reverse TUTase reaction,which is indicated by the unequal sign.gRNAs have three main portions:a 5 region to anchor the gRNA to the mRNA just downstream of the editing site and direct the cleavage,a central region to guide the U deletions and insertions at mismatches in base pairing with the pre-mRNA,and a 3 oligo(U)that may tether the very purine-rich upstream pre-mRNA.Many additional conserved gRNA features have also been noted.Dotted lines indicate potential base pairs that could serve in a ligation bridge.Model of the 19S and 3540S RNA editing complexes revisited.Polycistronic minicircle transcripts assemble into 19S gRNA processing complexes,which process the 5 most gRNAs into monocistrons(gray boxes).These complexes further associate with pre-edited mRNA and other proteins to form 3540S RNA editing complexes that produce edited mRNAs.Red,endonuclease;yellow,TUTase;green,RNA ligase;closed arrowhead,editing site.Current understanding of U deletion and U insertion.编辑的生物学意义编辑的生物学意义1.校正移码突变：校正移码突变：Co2.控制转译：产生起始密码，控制转译：产生起始密码，MURF2 除除去去起起始始密密码码，锥锥体体虫虫(C.fasciculate)MURF-3 产生终止密码，产生终止密码，T.brucel Co.3.扩充遗传信息。扩充遗传信息。T.burceil Cyb基基因因:在在其其固固有有起起始始密密码码上上游游构构造造新新的的起起始始密密码码，从从而而扩扩展展了了21个个核核苷苷酸酸的的转转译译序序列列。另另 外外 两两 种种 锥锥 体体 虫虫 C.fasclculata和和 L.tarentolae的的Co基因也用这种方法增加了基因也用这种方法增加了18个密码子。个密码子。T.brucel的的Co最最突突出出，在在158个个位位点点插插入入394个个U，在在9个个位位点点删删去去18个个U，实实际际增增加加376个个U，增增加加数数占占成成熟熟的的Co转录物编码区总长度的转录物编码区总长度的55。RNA编辑是对中心法则的重要补充。编辑是对中心法则的重要补充。（四）反义（四）反义RNA 基基本本原原理理是是通通过过碱碱基基配配对对与与mRNA结结合合，形形成成二二聚聚体阻断其表达功能。体阻断其表达功能。1.反反义义RNA在在胞胞质质内内与与mRNA形形成成RNA:RNA二二聚聚体体使使其其不能与核糖体结合。不能与核糖体结合。2.反反义义RNA在在核核内内与与新新生生mRNA结结合合，二二聚聚体体不不能能运运输输出出核外。核外。3.反义反义RNA：mRNA二聚体易被酶降解。二聚体易被酶降解。4.碱碱基基修修饰饰作作用用。mRNA中中A转转变变为为 I，A I，I-U对不稳定，可使双链拆开。对不稳定，可使双链拆开。（五）五）RNA干涉干涉(RNA interference,RNAi)与与microRNAs（miRNAs)RNA干涉是干涉是1998年首次在线虫年首次在线虫(C.elegans)中发现并证明的转录后水平的中发现并证明的转录后水平的基因沉默机制，利用双链基因沉默机制，利用双链RNA 的介导可以的介导可以特异性地降解相应的特异性地降解相应的mRNA，阻断相应基，阻断相应基因的表达，随后发现这种现象广范存在于因的表达，随后发现这种现象广范存在于从真菌到植物、从无脊椎动物到哺乳动物从真菌到植物、从无脊椎动物到哺乳动物的各种生物中。的各种生物中。RNAi和和miRNA的特征的特征转录后水平的基因沉默机制转录后水平的基因沉默机制具有很高的特异性能够非常特异地具有很高的特异性能够非常特异地降解与之相应的单个内源基因的降解与之相应的单个内源基因的mRNARNAi抑制基因的表达具有很高抑制基因的表达具有很高的效率，远远少于内源的效率，远远少于内源mRNA的的数量的双链数量的双链RNA能完全抑制相能完全抑制相应基因的表达。这表明很可能存应基因的表达。这表明很可能存在干涉效应分子的扩增机制。在干涉效应分子的扩增机制。RNAi抑制基因表达的效应可以抑制基因表达的效应可以在不同细胞间长距离传递和维持，在不同细胞间长距离传递和维持，在线虫中干涉效应甚至可以传到在线虫中干涉效应甚至可以传到后带中去，这说明后带中去，这说明RNAi干涉机干涉机制中可能存在维持制中可能存在维持mRNA降解序降解序列特异性的信号小分子。列特异性的信号小分子。RNAi的意义及应用前景的意义及应用前景生物的生物的watchdog 抵抗病毒入侵，抑制转座子抵抗病毒入侵，抑制转座子活动，防止自私基因序列的过度活动，防止自私基因序列的过度增殖，对生物体的发育和基因的增殖，对生物体的发育和基因的调控可能也有重要作用。调控可能也有重要作用。产生抗病毒的植物和动物产生抗病毒的植物和动物研究新基因的功能研究新基因的功能人类疾病的基因治疗人类疾病的基因治疗国外医学分子生物学分册（）国外医学分子生物学分册（）P267。RNAi的作用机制及其应用。的作用机制及其应用。RNAi的负向调控网络的负向调控网络在基因的在基因的转录产物转录产物中，只要中，只要有这一段有这一段很短的同很短的同源序列，源序列，表达就会表达就会被抑制。被抑制。（六）（六）mRNA的降解的降解mRNA的结构的结构国外医学分子生物学分册（）国外医学分子生物学分册（）P P。真核生物中降解。真核生物中降解机制研究进展。机制研究进展。影响影响mRNA稳定的因素稳定的因素5端帽子结构端帽子结构5非编码区（非编码区（5UTR)开放阅读框的降解序列开放阅读框的降解序列3非编码区（非编码区（3UTR)IRE（铁离子相关区域），（铁离子相关区域），AREBP在一般的在一般的细胞细胞RNA代谢中起着重要作用，其结合力受细胞内代谢中起着重要作用，其结合力受细胞内铁离子的调节，保护铁离子的调节，保护mRNA的稳定性。的稳定性。ARE（A-U富集区），含富集区），含50150碱基，有多个碱基，有多个AUUUA重复序列，重复序列，U的百分比含量对稳定有重要意的百分比含量对稳定有重要意义。义。polyA和和PABP Human PABP MW 72000KD 形成形成2527核苷核苷酸结合区。酸结合区。Formation of circular eukaryotic mRNA by protein-protein interactions of eIF4E and eIF4G(binding to the m7G cap),poly(A)-binding protein I(PABP)Force-fieldelectron micrograph1.脱腺苷酸依赖型降解脱腺苷酸依赖型降解真核细胞中最主要的降解方式，其降解过程如下：真核细胞中最主要的降解方式，其降解过程如下：polyA核酸水解酶水解核酸水解酶水解polyA尾巴，尾巴，polyA缩短。缩短。polyA能结合一种称为能结合一种称为polyA结合蛋白结合蛋白(PABP)的特异蛋白，只有当的特异蛋白，只有当polyA缩短至缩短至1015个残基时，个残基时，PABP便不能与之结合，脱帽过程便不能与之结合，脱帽过程被启动。脱帽时由脱帽酶被启动。脱帽时由脱帽酶Dcp1切除切除mRNA5端端鸟苷酸形成的帽子结构。脱帽后的鸟苷酸形成的帽子结构。脱帽后的mRNA 很容很容易被易被5 3核酸外切酶识别水解，另外真核生物核酸外切酶识别水解，另外真核生物的的mRNA也可以在脱腺苷酸后以也可以在脱腺苷酸后以3 5方向被降方向被降解，但这种作用很小。解，但这种作用很小。脱polyA尾巴的调节尾巴的调节 Poly(A)核酸酶的活性受核酸酶的活性受Ccr4和和Caf1的正调节的正调节脱帽过程的调节脱帽过程的调节 在翻译过程中，在翻译过程中，mRNA被翻译起始因子被翻译起始因子eIF4E,eIF4G及及PABP包围。包围。eIF4E蛋白与蛋白与5端帽子端帽子连接，而且连接，而且eIF4G可加强他们之间的连接，可加强他们之间的连接，eIF4G是一种大分子蛋白质，同时与是一种大分子蛋白质，同时与eIF4E和和PABP发生发生关联。这种结构保护关联。这种结构保护mRNA的的5和和3端不受脱帽端不受脱帽酶和脱腺苷酶的降解。一旦上述的稳定环状结构被酶和脱腺苷酶的降解。一旦上述的稳定环状结构被破坏，破坏，polyA水解，水解，PABP脱离，紧接着发生脱帽脱离，紧接着发生脱帽反应。反应。线粒体中的线粒体中的mRNA的降解的降解与真核生物的细胞质中的情形相反与真核生物的细胞质中的情形相反 polyA促进降解，是降解的信号。促进降解，是降解的信号。2.无义密码介导的无义密码介导的mRNA的降解的降解Nonsense mediated mRNA decay N M D突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误突变和剪接错误发生无义突变和移码突变的发生无义突变和移码突变的mRNA和从和从核内逃逸的未经剪接还有内含子的核内逃逸的未经剪接还有内含子的mRNAIs it important?Absolutely!为害极大！为害极大！NMD probably evolved to eliminate abnormal transcripts due to routine errors in gene expression.For example,inefficient or inaccurate pre-mRNA splicing can generate an intron-derived in frame nonsense codon,or a shift in the reading frame and an exon-derived nonsense codon downstream of the shift.NMD降解过程：降解过程：当当mRNA转运进入细胞质后，立即同核糖体结转运进入细胞质后，立即同核糖体结合并开始翻译，如果存在无义突变密码子则会使翻合并开始翻译，如果存在无义突变密码子则会使翻译提前终止。随着翻译的终止，一组由核糖体部分译提前终止。随着翻译的终止，一组由核糖体部分组分和相关因子组成的物质会继续向下游移动与一组分和相关因子组成的物质会继续向下游移动与一段下游元件（段下游元件（DSE）相遇，形成一个异常的核蛋白）相遇，形成一个异常的核蛋白结构，引起结构，引起mRNA的的5端水解一个或二个核苷酸残端水解一个或二个核苷酸残基，完成脱帽反应，脱帽后的基，完成脱帽反应，脱帽后的mRNA则迅速被则迅速被5核核酸酶水解酸酶水解。Nonsense mediated decay of mRNAsDAHLBERG J.E.et.al.RNA 2003;9:1-8Copyright 2003 by RNA SocietyNonsense mediated decay of mRNAsDAHLBERG J.E.et.al.RNA 2003;9:1-8Copyright 2003 by RNA Societyexon junction complex(EJC)Nonsense-mediated decay(NMD).Following splicing in the nucleus,the exon junction complex(EJC),which contains UPF3(a core protein of the NMD pathway),is associated with the transcript,and the resulting messenger ribonucleoprotein is exported to the cytoplasm.In the cytoplasm,a second NMD core protein,UPF2,binds to UPF3.Ribosomes associate and translate the mRNA,but are stalled on encountering a premature termination codon(PTC).This results in binding of the SURF complex(comprising SMG1,UPF1 and the peptide-release factors eRF1 and eRF3)to the ribosome.UPF1 also binds UPF2,thereby linking the EJC to the PTC.Phosphorylation of UPF1 by SMG1 leads to dissociation of eRF1 and eRF3 and binding of the SMG7 adaptor protein.Subsequent steps that are still being elucidated lead to mRNA decay by various pathways.b|Non-stop decay.Translation of an mRNA that lacks a stop codon results in ribosomes traversing the poly(A)tail,displacing poly(A)-binding protein(PABP)and stalling at the 3 end of the mRNA.One model proposes that,in yeast and mammalian cells,Ski7,an adaptor protein that functions as a molecular mimic of tRNA,binds to the A site on the stalled ribosome to release the transcript,and then recruits the exosome.The exosome degrades the poly(A)tail and mRNA body.In another pathway described in Saccharomyces cerevisiae,in the absence of Ski7,the displacement of PABP by the translating ribosome renders the mRNA susceptible to decapping and 5 3 decay by the 5 3 exoribonuclease Xrn1.c|No-go decay.Ribosomes can stall within the open reading frame(ORF),for example,on encountering a strong secondary RNA structure.The Dom34 and Hbs1 proteins bind the transcript near the stalled ribosome and initiate an endonucleolytic cleavage event near the stall site.This releases the ribosome and generates two mRNA fragments,each with a free end exposed for exonucleolytic decay by the exosome and Xrn1,respectively.mRNA编码区编码区3端附近的一个下游元件端附近的一个下游元件（DSE)是无义是无义mRNA降解必需的降解必需的无义密码子与最靠近无义密码子与最靠近3端的外显子之间的端的外显子之间的相对位置决定了无义相对位置决定了无义mRNA是否被降解是否被降解大于大于5055个核苷酸，降解；个核苷酸，降解；小于小于50个核苷酸则不被降解。个核苷酸则不被降解。Garneauet al.Nature Reviews Molecular Cell Biology8,113126(February2007)Nonsense-mediated mRNA decay:from vacuum cleaner to Swiss army knifeGenome Biology 2004,5:218 Vacuum cleanerSwiss army knife1.国外医学分子生物学分册（）：国外医学分子生物学分册（）：。真核生物细胞中的。真核生物细胞中的无义介导无义介导mRNA降解机制。降解机制。2.遗传学报遗传学报Acta Genetica Sinica,November 2004,31(11):13211326 NMD 作用的顺式调控元件作用的顺式调控元件3.Nonsense-Mediated mRNA Decay:Splicing,Translation And mRNP DynamicsLynne E.MaquatNature Reviews Molecular Cell Biology 5,89-99(February 2004)参考文献参考文献3.无终止密码子无终止密码子mRNAmRNA降解途径降解途径These data suggest that nonstop decay is initiated when the ribosome reaches the 3 terminus of the message RNA Science,2002;295:2258An mRNA Surveillance Mechanism That Eliminates Transcripts Lacking Termination Codons.Science,2002;295:2262Exosome-Mediated Recognition and Degradation of mRNAs Lacking a Termination Codon.4.no-go decay So what happens when RNA accumulates a mutation that hampers the ribosomes ability to translate it?For example if a large stem loop of other RNA fold impeded the ribosomes path along the mRNA.5.5.核酸内切酶降解核酸内切酶降解mRNAmRNA直接降解直接降解核酸内切酶活性受到调节核酸内切酶活性受到调节 如哺乳动物的如哺乳动物的RNaseL通常不具活通常不具活性，但其与性，但其与2，5磷酸二酯键相连的寡腺磷酸二酯键相连的寡腺苷酸结合时才具有活性，而后者在双链苷酸结合时才具有活性，而后者在双链RNA存在时才产生。存在时才产生。6.6.马方综合症马方综合症(Marfan syndrome)(Marfan syndrome)马方综合征马方综合征,是一种常染色体显性遗传的是一种常染色体显性遗传的全身性结缔组织疾病全身性结缔组织疾病,主要累及眼、骨骼主要累及眼、骨骼和心血管系统和心血管系统,95%的患者死于心血管并的患者死于心血管并发症发症-主动脉夹层、破裂和充血性心力衰主动脉夹层、破裂和充血性心力衰竭。竭。未治患者的平均寿命，男性未治患者的平均寿命，男性30岁左岁左右，女性约右，女性约40岁。婴幼儿患者多因心脏岁。婴幼儿患者多因心脏瓣膜病变所致的充血性心力衰竭而夭折。瓣膜病变所致的充血性心力衰竭而夭折。马方综合症是一种结缔组织疾病，所以马方综合症是一种结缔组织疾病，所以影响许多结构，包括骨胳、肺、心脏、影响许多结构，包括骨胳、肺、心脏、眼睛和血管。该疾病通常以细长肢为特眼睛和血管。该疾病通常以细长肢为特征。征。流行病学和发病率流行病学和发病率 1990年我国的一组流行病学统计报告发年我国的一组流行病学统计报告发病率约为病率约为1.72/10,000人，人，1995年在苏格年在苏格兰进行的一项人口调查报告兰进行的一项人口调查报告MS的最低流的最低流行病率为行病率为1/14,217(7.03/100,000人人)，发，发病率达病率达1/9802，最近估计的发病率约为，最近估计的发病率约为1/3-5,000人。人。Figure 2:Pedigrees representing inheritance of Marfan Syndrome in the Summers family.1896年年Antoine Bernard Marfan第第一次描述了一个叫一次描述了一个叫Gabrielle P.的的5岁岁半女孩，并称之为瘦长肢体症半女孩，并称之为瘦长肢体症(dolichostenomelia)。1972年年Hecht和和Beals认为其实该女认为其实该女孩患的是先天性挛缩性蜘蛛指症孩患的是先天性挛缩性蜘蛛指症(Congenital Contractural Arachnodactyly，CCA，也称作，也称作Beals综合征综合征)。马方综合症相关历史名人和报道马方综合症相关历史名人和报道三国志三国志中对天生异相的蜀主刘备的描述是：中对天生异相的蜀主刘备的描述是：“身身长七尺五寸，垂手下膝，顾自见其耳。长七尺五寸，垂手下膝，顾自见其耳。”美国总统林肯美国总统林肯 篮球球星克里斯篮球球星克里斯帕顿（帕顿（Chris Patton）奥运会排球队队员海曼（奥运会排球队队员海曼（Flo Hyman），死于马方综），死于马方综合征中的主动脉瘤破裂合征中的主动脉瘤破裂小提琴家帕格尼尼小提琴家帕格尼尼四川排球运动员朱刚、杨怀清四川排球运动员朱刚、杨怀清喀麦隆球星维维安喀麦隆球星维维安福福“恐怖大亨恐怖大亨”拉登？拉登？Health note:Does Obama have Marfan Syndrome?Posted on July 1st,2008 by Nancy Reyes分子遗传学表明符合诊断标准的分子遗传学表明符合诊断标准的MFS患患者有者有7090发生了致病性发生了致病性FBN1基因突基因突变。变。FBN1是一种分子量为是一种分子量为320kd的糖蛋白，的糖蛋白，由由2871个氨基酸组成，是构成细胞外微个氨基酸组成，是构成细胞外微纤丝的主要蛋白之一。纤丝的主要蛋白之一。B.Loeys等通过筛选等通过筛选95个诊断为马方综合征病个诊断为马方综合征病人人FBN1基因的所有基因的所有65个外显子，发现在个外显子，发现在93个马个马方综合征病人中发现了方综合征病人中发现了85个个FBN1基因突变，频基因突变，频率为率为91。鉴定出的突变主要由三类组成：。鉴定出的突变主要由三类组成：.41个错义突变；个错义突变；.13个无义突变和个无义突变和20个移码个移码突变引起的提前终止密码；突变引起的提前终止密码；.11个突变影响剪个突变影响剪接或引起框缺失。接或引起框缺失。如果如果NMD起作用，则这些突变基因的起作用，则这些突变基因的mRNA降降解，不发生马方综合症；否则产生大量的异常蛋解，不发生马方综合症；否则产生大量的异常蛋白质。白质。7.7.玉米玉米CMS-SCMS-S育性恢复机理研究育性恢复机理研究CMS产生的原因CMS的遗传特性rrNrrSrrSRRNRrSrrSrSSRRSSrFertileSterileFertileFertileGametophytic CMSSporophytic CMSNow that 12 mtDNA regions associated with CMS have been identified,it is striking how often the events involve ATP synthase subunit gene promoter regions and portions of coding regions(Hanson and Bentolila,2004,Plant Cell,preview).与CMS相关的线粒体片断实验材料S-Mo17rf3rf3(S)S-Mo17Rf3Rf3(F)N-Mo17rf3rf3(N)orf355-orf77的不同拷贝的不同拷贝ProbeN S F6625bp4768bp1.8kborf355/BamHIorf355orf771068bp234bp11bp2.8kb和1.6kb转录本的末端位点1583bp2741bp1583bp157bp19bp14bp261bp190bp1068bporf355orf77cox130bp1160bpcox2orf355orf77GCTGGGTTTC TTATGTTAGG AAAAAGAGGG TTCCAAAATC CTTTAAACAA ATCCGGCACT TGCTGCGGGA ACTTCATTGT GGGCAGTTCC CCACAGAAGA TGACCTGGCA CTTATCGAGA TGTTGTGGAC GTATCACCAT AGTTCTTAGC TGTCCGTATT GGCGGTTAGT AAGTAGTTTG GTTTCTAGGA GGAAATTGGA TTACTTATGA GTTTCTTCGG TGCTAAAGTA TACAAGCACA TGTCCAATCT ACATAAAGAT ACCAACCAGG TATCTACTTC AAAGACAGGG CGTCGGCGAT CCTCTACTAT TAAGAGACAG ATAACAATGG TGCCGACAGA GATGGACAGA ACTGCAGAGA ATACCTCTCC GGAGAAGTCC TTACATGTCT CAAACTAAAT AAATCCAACC AATAGTGAAA CTGAAACAAA AAACACGTCT CTTACACACG AGAGACACTG TTGAGTCTCT CTATACTATT TTCAGTATAG AGTCGGGGTA CACTCAACAA AGAAAAATCC CGAACAAGAA CAAAGAATGG AAGATATTAT GAGCACGATT CGCATATTGT TGCCCTTGCG TAAGCAGATT ACCGGATATT TTGACAAACC GAGCCTTTCT CTTAATCGAG ATTCTACTAA TGAGTTCTTA AGCACCTTTC TAAAAACTTA CATCGAGGAT ATTCATGATT TCCATTTCAT CGATGAAGAT CCTATAGATC GGGGAGAATC CTCTTTATCA TTAGACAAGA AGAATACAAC TTATTACGAG GCTGATGCAA GTGATGAAGA AATGGATATA ACAGATGGGA TAGAGGGAAT CATAGGGGGT ACTAATCGAG GCCACAACGG nested primer of 5 RACE:RR5-2ccatagaggtatctaacaca t a aa c t t535末端末端 nested primer of 3 RACE:RR3-2 CTACTCCGCC AGAACCGAAA ACTTCCACAG CATGTTTGGA AGTTGTGAAA GCCCTCCTGA ATGGGGCTGC CCGGGGGTGC ACCGGGAGTT GGTGTACGGG TATATGGGAC GAACTCAAAA ACTGTTGCTC CCCGTCCTCC TGCTGCGATG AGTGGATTGA TTAGGATTCA ACTTAATGTT TGCATCGTTT GACTCAATGA TGGCCTTTCT GATCTCATTC GTATTCCGAG TTCCATTTTT CTTTTGCCTC GCCTTTCTGA TCTCATTCGT TTTCCGATGC ATAAAAAGTC ATATTTATTG GTGTAGGTAT CTCTCTTTGC AAATAGAGAT GCCGAGGCCC CTACTTACCT TCTGGGTTTT GGGGGGAAAG AAGAGTGGGT TAGCGGGCTT CTTTCACTGT GTCTTTTGAC TCTGCTTGAG GGGGTTTTCC CTTCAGCTTG ATTGAATATC TCTTGTGGGG GTAGGCCATC3末端tttgca c t g t agaagaaagcttctttcgggggggag g53引物延伸法分析引物延伸法分析5末端位点末端位点 G A T CN S FN S FPollenLeafPrfPRftttctatggtccatagaggtatctaacaca t a aa c t tPrfPRf53ORF17Transcripts degraded by the exo-and endo-ribonucleasesCollapsed pollenRestroed pollen玉米玉米CMS-S不育机理与育性恢复机理不育机理与育性恢复机理.DegradationDegradation.