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广西三七皂苷类成分含量的分析
【摘要】 　　目的研究广西三七不同产地、不同部位的皂苷含量特征。方法利用香草醛-高氯酸比色法测定三七中总皂苷含量，以高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1，Rb1，Re和三七皂苷R1含量。结果广西靖西县不同产地三七样品的总皂苷及单体皂苷含量存在差异；不同部位间皂苷含量的差异达到极显着水平，以根茎的最高，主根次之；同一样品中，各单体皂苷含量以人参皂苷Rg1最高，人参皂苷Re最低，不同样品中各单体皂苷间比值存在差异。结论广西靖西县各地三七质量存在差异，药材中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者含量之和符合2005版《中国药典》规定。
【关键词】 三七 总皂苷 人参皂苷 三七皂苷
　　三七Panax notoginseng为五加科植物，是我国传统名贵中药材，含皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、三七素等多种活性成分，有散淤止血、消肿定痛之功效，用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等［1］。目前市场上三七主要来源于云南，并且国外也具有十分巨大的市场潜力。随着人们生活水平的提高，对三七的需求量不断增加［2］。在保证三七稳产优质的条件下，开辟新的种植区域是满足三七需求的重要途径。广西作为三七的原产地，曾经也是主产地［3］。凭借优越地理条件和长期累积的经验，在广西扩大三七的种植面积是可行的。刘华钢等［4］也报道了广西三七含有较高人参皂苷Rg1，Rb1，Re和三七皂苷R1含量。广西政府已将三七纳入广西靖西等县鼓励种植的中药材之一。

　　三七不同部位皂苷含量不同，三七主根、根茎和支根中总皂苷含量差异明显［5］，广西三七茎基和须根的主要单体皂苷含量具有差异，且同一部位不同单体皂苷含量差异较大［6］。药理研究［7］表明，各单体皂苷的药理作用不同，相互间的含量比值的差异对三七药材质量有重要影响。因此，本文在前人研究的基础上，探索广西三七不同产地、不同入药部位的皂苷含量变化规律以及各单体皂苷在药材中的变化,为进一步研究广西三七质量奠定基础。
　　1 器材1 仪器FZ102型微型植物粉碎机，KQ-250DE型数显超声波清洗器，Ｕ-1206紫外可见分光光度计，U3000高效液相色谱仪。2 试剂人参皂苷Rg1(供含量测定用，批号110703-200424)、人参皂苷Re(供含量测定用，批号110754-200421)、人参皂苷Rb1(供含量测定用，批号110704-200420)、三七皂苷R1(供含量测定用，批号110745-200415)，均由中国药品生物制品检定所提供。

　　乙腈和甲醇，去离子重蒸水。3 材料本研究中实验材料于2007-09采集靖西县新甲乡，武平镇，南坡乡等地的三年生三七，经广西大学农学院植物科学系黄荣韶研究员鉴定为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)。
　　2 方法
　　三七总皂苷含量测定
　　三七总皂苷的提取参照马银海等［8］的提取法，采用超声波提取，提取温度45℃，以70％乙醇40 ml为提取溶剂，超声时间30 min，提取次数2次。合并提取液，70℃水浴浓缩至干，用15 ml蒸馏水溶解，以1 ml/min速度过预处理的AB-8大孔树脂柱，水洗至Molish反应阴性，用100 ml 70％乙醇以 ml/ min 速度洗脱，至醋酸酐-浓硫酸反应阴性，收集洗脱液作为待测液。本实验在广西大学农学院植物生理实验室内进行。
　　标准曲线的制作 参照采用香草醛－高氯酸比色法［9］进行准确称定干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品 mg，用甲醇溶解定溶于10 ml，精确量取0，40，80，160，200，300，400 μl置10 ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，各加入新配制的5％的香草醛-冰醋酸溶液 ml，高氯酸 ml于60℃水浴恒温15 min，立即置于冰水中冷却5 min，加入冰醋酸5 ml摇匀，放置10 min，以试剂空白做参比于550 nm处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，以对照品溶液加入的体积数(μg)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=　4 (r= 6)，对照品在～196 μg范围内线性良好。
　　样品总皂苷含量测定按照标准曲线项下方法进行比色，测定吸光度，根据回归方程计算总皂苷含量。
　　三七单体的HPLC定量分析
　　色谱条件本文参照《中国药典》2005版Ⅰ部［10］收录的三七有效成分含量测定的色谱条件，根据具体使用的仪器略加修改，最终确定色谱条件为：色谱柱：C18(250 mm× mm,5 μm),流动相:乙腈-水，以0～8 min，体积比为19∶81，8～38 min，体积比22∶78；38～70 min，体积比为22～36∶78～64；70～80 min，体积比36～45∶64～55；流速1 ml/min的梯度洗脱。柱温为25℃，紫外吸收波长203 nm，Rg1与Re的分离度达到，理论塔板数按三七皂苷R1计算大于3 000。分离结果见图1～2。
　　图1 混合对照品HPLC图谱
　　图2 样品的HPLC图谱
　　对照品溶液的制备称取人参皂苷Rg1、Rb1、Re和三七皂苷R1各适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1　mg，Rb1　mg，Re　mg和三七皂苷R1　mg的混合溶液，过 μm滤膜待用。
　　供试品溶液的制备三七粉末 g，准确称定，准确加入甲醇50 ml，称定重量，摇匀，放置2 h，超声波提取30 min，放冷，再提取30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过 μm滤膜待用。按照选定的色谱条件进行测定。
　　线性关系的考察分别准确吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积。以对照品的量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。
　　精密度实验取上述对照品溶液，在实验测定条件下进样，每次进样10 μl，连续进样5次，根据峰面积计算，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别为％，％，％和％，结果表明仪器的精密度理想。
　　重复性考察准确称取样品3份，按“”方法制备样品，按选定的色谱条件测定，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别％，％，％，％，结果表明，重复性好。
　　表1 各单体皂苷的标准曲线
　　稳定性考察准确称取靖西3年生样品 g，按上述样品溶液制备方法制备，分别吸取10 μl，分别于1，6，12，24 h测定，记录峰面积，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别％，％，％和％，样品在日内稳定性较好。
　　加样回收率实验准确量取一定量的混合对照品溶液置已知皂苷含量的三七样品液中，重复测定5次，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的回收率分别％，％，％和％。
　　3 结果
　　广西靖西县三七总皂苷含量比较从图3可看出，靖西不同产区的三七在总皂苷含量上有一定差异，新甲乡总皂苷含量最高，为％，各产地间总皂苷含量差异不显着。

　　图4表明了同一产地的三七不同部位总皂苷含量存在差异，其中根茎总皂苷含量最高，为 2 %，最低是须根，为 1 %，含量最高部位的是最低部位的倍，而主根与支根总皂苷含量差异不显着。
　　图3 不同产地三七总皂苷含量变化
　　图4 三七不同部位总皂苷含量变化
2 广西靖西县三七单体皂苷含量分析
　　图5 不同产地三七单体皂苷含量变化
　　图6 三七不同部位单体皂苷含量变化

　　本实验测定了靖西不同产地三七样品4个单体皂苷含量，如图5，结果显示各单体皂苷含量存在差异。同一样品中，以人参皂苷Rg1 最高，其次是人参皂苷Rb1，而人参皂苷Re含量最低。同一单体皂苷在不同产地也存在差异，三七皂苷R1和人参皂苷Rb1以武平镇的三七含量最高，分别为 6％和 5％。人参皂苷Rg1和人参皂苷Re在新甲乡三七中含量最高，分别为 2％和 8％。

　　三七不同部位4个单体的含量如图6，均以根茎最高，主根次之。人参皂苷Re以支根含量最低，为 3％，其余3种单体皂苷含量均以须根含量最低。对各部位4种单体皂苷含量进行方差分析，各部位的单体含量差异均达到显着水平。

　　三七各单体皂苷含量综合分析结果见表2。广西靖西县三七样品JX1、JX2和JX3在Rg1/Rb1、Rg1/R1、Rb1/R1、Rg1/Re的比值分别为～∶1、～∶1、～∶1和～∶1。不同部位间Rg1/Rb1的值波动小，根茎的Rg1/R1、Rb1/R1和Rg1/Re的值较其他部位的小。
　　表2 样品中单体皂苷相对含量的相互关系比较
　　4 讨论

　　《中国药典》Ⅰ部2005版规定三七药材人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者和不低于％，测定结果表明靖西县各地三七质量符合药材标准。

　　三七药材不同部位无论是总皂苷，还是各种单体皂苷，都是根茎含量高于主根的，与杨志刚［1］和梁秋云［6］报道结果一致。支根和须根中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的含量也较高，人参皂苷Rg1 和Rb1总量符合《中国药典》2000年版［11］三七项下质量要求，故根茎、支根和须根同样具有药效可加以开发利用，以提高三七药用资源的利用率。

　　药理研究表明三七单体皂苷具有重要药理作用［12］，不同的单体其药理作用不同，本研究发现三七中各单体皂苷含量存在差异，不同样品中各单体皂苷相互间的比值也不一致，进一步说明了药材之间以及不同部位间的质量存在差异。提示深入研究各单体皂苷合成机制以及影响因素，以提高目标皂苷成分含量具有重要意义。
【参考文献】
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　　［5］ 陈寿高.三七主根支根茎基中三七总皂苷含量比较［J］.时珍国医国药,1999，10(4):249.
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　　［11］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京:化学工业出版社,2000.
　　［12］ 韩 凌,张翼菲,赵余庆.三七地上部分现代药学与生物活性研究［J］.亚太传统医药,2007,6：16.