海南省汉、黎族人群缺失型α.docx

海南省汉、黎族人群缺失型α

　　关键词：地中海贫血;聚合酶链反应;少数民族;海南省
　　摘要:目的研究海南省汉、黎族人群中东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失三种α-地中海贫血缺失突变的携带率、基因频率及基因型的分布特点。方法应用聚合酶链反应技术直接筛查海南省汉、黎族人群中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失三种α-地中海贫血缺失突变。结果在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为%;三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为，其中--SEA、-α和-α的基因频率分别为、、，共发现--SEA/αα、-α/αα和-α/αα三种基因型，其中--SEA/αα5例，-α/αα12例，-α/αα8例。在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，携带率为%，三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为，其中--SEA、-α和-α的基因频率分别为、、，共发现--SEA/αα、-α/αα、-α/-α、-α/-α、-α/αα、和-α/-α六种基因型，其中--SEA/αα3例，-α/αα39例，-α/-α6例，-α/-α18例，-α/αα38例，-α/-α10例。结论海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体。

　　关键词:地中海贫血;聚合酶链反应;少数民族;海南省

　　Investigationintothedeletiontypesofα-thalassemiainHanandLINationalitiesinHainanProvince.
　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheincidences、theallelicfrequenciesandthegenotypesfrequenciesofthreeα-tha-lassemiadeletiontypesandtheirdistributionsinHanandLinationalitiesinHainanProvince.MethodsThreeα-thalassemiadeletiontypes，SoutheastAsiadeletion，rightdeletionandleftdeletion，werescreenedbasedonpolymerasechainreactioninHanandLinationalitiesinHainan.Results25carriersweredetectedin197Hanindividuals，andtheincidenceofcarriers%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypes，，Hannationalityingenotypesof5cases，12casesand8caseswerethecontrary，114carriersweredetectedfrom201individualsinLinationality，andtheincidenceofcarriers%.Thegenefrequencyofthesethreedeletiontypes，，Ligenotypesweredetectedincluding3cases，39cases，6cases，18cases，38casesand10cases.ConclusionThereisahighincidenceofα-thalassemiainHanandLinationalitiesinHainanprovince.

　　Keywords:Thalassemia;Polymerasechainreaction;Minoritynationality;HainanProvince

　　α-地中海贫血是一种严重危害人类健康的遗传病，其主要特征是α-珠蛋白链合成减少或缺如。α-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突变两大类［1］，α-珠蛋白基因缺失是导致α-地贫的主要原因。目前全世界已发现了35种α-珠蛋白基因缺失突变，在中国人中已发现7种，其中东南亚型缺失突变、右侧缺失型突变和左侧缺失型突变三种突变类型是我国南方最常见的缺失类型［2～4］。为了研究海南省汉、黎族人群中α-地中海贫血的发病率及其基因型的分布特点，我们应用聚合酶链反应技术直接筛查197例海南汉族人和201例海南黎族人中的东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失这三种最常见的缺失型α-地贫突变类型，现将结果报告如下。

　　1材料与方法

　　DNA样品用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、琼中、保亭等县正常体检、兵检和中小学生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常体检、兵检的海南籍汉族人群末梢血，按Lahiri等方法［5］提取DNA，阳性对照标本由南方医科大学医学遗传学教研室徐湘民教授惠赠。

　　PCR扩增东南亚型缺失突变分析按文献［6］进行;右侧缺失型突变和左侧缺失型突变分析参照AmoldS.-［7］等报道合成引物。扩增--SEA、-α和-α的多重PCR体系均采用TaKaRaLATaqTMJ及缓冲液，PCR反应体积为25μl，在PCR缓冲液中含模板μg，引物～μmol/L，dNTP为200μmol/L，1UTaqDNA聚合酶，循环参数为99℃变性5min，85℃加酶，56℃退火1min，72℃延伸2min，然后95℃1min，56℃1min，72℃2min，30个循环后72℃延伸7min。扩增产物在1%琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色在紫外光灯下观察结果并照相。
　　2结果

　　--SEA、-α和-α缺失型突变的多重PCR扩增在PCR反应体系中同时扩增了α2基因的一个1800bp的片段，用以判断样品DNA的α2基因是否缺失，从而判断α-地中海贫血突变患者是杂合子还是纯合子。无--SEA、-α和-α缺失型突变的正常人DNA样品经PCR扩增后只出现一条1800bp的α2基因扩增片段;东南亚缺失型杂合子的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外，还出现一条740bp的特异扩增片段;右侧缺失型杂合子的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外，还出现一条2022bp的特异扩增片段;右侧缺失型纯合子的DNA样品经PCR扩增后只出现一条2022bp的特异扩增片段;左侧缺失型杂合子的DNA样品经PCR扩增后除出现一条1800bp的α2基因扩增片段外，还出现一条1628bp的特异扩增片段;左侧缺失型纯合子的DNA样品经PCR扩增后只出现一条1628bp的特异扩增片段;右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子的DNA样品经PCR扩增后同时出现2022bp和1628bp两条特异扩增片段。见图1。
　　图1--SEA、-α和-α缺失型突变的多重PCR检测结果
　　Fig1ThePCR-amplifiedresultof--SEA、-α、-αdeletion
　　注:M为GeneRulerTMDNALadder，泳道1-7对应的样本基因型分别为aa/aa，--SEA/αα，-α/αα，-α/-α，-α/αα，-α/-α，-α/-α。

　　M:Themarker.Thegenotyesofsamplescorrespondingtofromlane1tolane7wereaa/aa，--SEA/αα，-α/αα，-α/-α，-α/αα，-α/-α，-α/-α.

　　海南汉、黎族人群中α-地中海贫血等位基因频率。三种缺失在海南汉族人群中的频率分别为、和，在黎族人群中的频率分别为、和。两个人群中的三种缺失型α-地中海贫血突变经χ 2 检验均符合Hardy-Weinbery遗传平衡。
　　海南省汉、黎族人群中-- SEA 、-α　和-α　缺失突变的基因型。在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为%，共发现-- SEA /αα、-α　/αα和-α　/αα三种基因型，其中-- SEA /αα5例，-α　/αα12例，-α　/αα8例;在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，携带率为%，共发现- -SEA /αα、-α　/αα、-α　/-α　、-α　/-α　、-α　/αα和-α　/-α　六种基因型，其中-- SEA /αα3例，-α　/αα39例，-α　/-α　6例，-α　/-α　18例，-α　/αα38例，-α　/-α　10例。

　　表1 海南省汉、黎族人群中三种α-地中海贫血缺失突变的等位基因频率
　　Tab1 The allelic frequencies of threeα-thalassemia deletion mutationin Han and Li nationalities of Hainan provinc

　　表2 海南省汉、黎族人三种缺失型α-地中海贫血突变的基因型结果
　　Tab2 The genotypes of threeα-thalassemia deletionin Han and Li nationalities of Hainan Province

　　3 讨论

　　α-地中海贫血是一种遗传性溶血性血液疾病，也是世界上最常见的单基因遗传病之一，其主要特征是α-珠蛋白链合成减少或缺如。我国南方各省是该病的高发地区。因此，研究我国南方各省分的α-地中海贫血的基因类型和频率分布，对开展遗传咨询和确定有效的普查法、产前诊断策略具有重要意义。

　　以聚合酶链反应技术直接筛查海南省汉、黎族人群中三种我国最常见缺失型α-地中海贫血基因型，发现东南亚型缺失、右侧缺失和左侧缺失在197例海南汉族人中检出25例α-地中海贫血携带者，携带率为%，而在201例海南黎族人中检出114例α-地中海贫血携带者，携带率为%，三种α-地中海贫血缺失突变的基因频率为，其中左侧缺失和右侧缺失的基因频率分别高达和，明显高于汉族人群;在基因型分析中共检出六种基因型，以右侧缺失型杂合子、左侧缺失型杂合子、右侧缺失型并左侧缺失型双重杂合子为主，但某些基因型的构成比与汉族人群不同，-- SEA /αα基因型的比例较低，仅占%，明显低于汉族人群。海南汉、黎族人群中三种我国最常见缺失型α-地中海贫血基因型已达到了Hardy-Weinbery遗传平衡，说明以上三种缺失型α-地中海贫血的基因突变类型在海南汉、黎族人群中是较早发生的事件。本次研究结果表明，海南省汉、黎族人群是α-地中海贫血的高发群体，且以右侧缺失和左侧缺失为主，另外海南汉族人群中α-地中海贫血突变的携带率与广西和广东地区接近，但远高于全国平均水平以及香港、台湾、江西、四川、浙江、新疆、上海的α-地中海贫血突变携带率 ［8～11］ ;而海南黎族人群中α-地中海贫血突变的携带率更是高居全国之首。海南黎族人群居住地为疟疾高发区，其人群中α-地中海贫血突变的携带率如此之高，可能与疟疾的优势选择作用有关。

　　过去曾用醋酸纤维素薄膜电泳法筛查海南省汉族人新生儿中的α-地中海贫血携带者，再应用聚合酶链反应技术筛查α-地中海贫血Hb Bart‘s携带者中的东南亚缺失型突变，当时筛查结果表明，在海南省汉族人中α-地中海贫血突变的携带率为%，其中东南亚缺失型突变的携带率为%，占海南省汉族人群中α-地中海贫血总数的% ［6］ 。以上筛查结果与本次研究结果比较，除了东南亚缺失型突变的携带率基本一致外，α-地中海贫血突变的携带率结果相差较大，其原因可能是用微量醋酸纤维素簿膜电泳法检测患者血样，以出现异常快速区带者确定为α-地中海贫血突变携带者的初筛方法，导致了部分静止型α-地中海贫血的漏检，造成对海南省汉族人中α-地中海贫血突变携带率的检测结果严重偏低。静止型α-地中海贫血几乎无临床症状，血液学指标基本正常，用传统血液学分析法筛查恐有较多遗漏。因此，应用聚合酶链反应技术筛查α-地中海贫血的三种常见突变是一种快速、准确的方法，可以减少静止型α-地中海贫血的漏检。

　　本研究获得了海南省汉、黎族人群中α-地中海贫血基因突变类型、基因频率和构成比的资料，为阐明海南省α-地中海贫血分子缺陷提供科学依据，对于海南省地中海贫血的防治具有重要意义。
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