中药天年饮对衰老大鼠免疫功能的影响.docx

中药天年饮对衰老大鼠免疫功能的影响【摘要】 目的探讨中药天年饮对衰老大鼠免疫功能的影响。方法40只SD大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组及阴性对照组，每组均为10只。D半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型。采用ELISA方法检测各组大鼠血清IL2及IL6的含量，MTT法检测脾淋巴细胞增殖转化，同时观察巨噬细胞的吞噬功能。结果天年饮可显着提高衰老大鼠血清IL2含量、脾淋巴细胞的增殖能力以及巨噬细胞的吞噬功能；天年饮可明显降低衰老大鼠血清IL-6的含量。 结论中药天年饮可增强衰老大鼠的免疫功能，具有一定延缓衰老的作用。【关键词】 天年饮 免疫功能 大鼠Influence of Traditional Chinese Medicine Tiannianyin on Immune Function of Aging RatsAbstract：ObjectiveTo investigate the influence of traditional Chinese medicine Tiannianyin on immune function of aging rats. Methods40 SD rats were divided into 4 groups at random: normal group, aging model group, Tiannianyin group and negative control group, each group had 10 rats. The subacutely aging model rats were made by injecting D-gal into abdominal cavity continually. ELISA was used to detect the IL-2 and IL-6 contents in serum, MMT to detect the proliferation and transformation of spleen lymphocyte, and the macrophagic phagocytosis was also observed. ResultsTiannianyin not only significantly increased the IL-2 content, the proliferation and transformation of spleen lymphocyte and the macrophagic phagocytosis of aging rats (Tiannianyin group compared with aging group: P, P ); but also obviously decreased the IL-6 content of aging rats (Tiannianyin group compared with aging group: P). ConclusionTianninyin can strengthen the immune function of aging rats, so it has fairly anti-aging effects.Key words：Tiannianyin; Aging; Immune function; Rats 1977年Basedovsky H1首次提出“免疫-神经-内分泌网络”学说；1988年Meites2提出，在衰老的过程中，免疫-神经-内分泌网络起着重要作用；许多学者的研究也表明，由于机体免疫功能的随龄下降，从而导致自身免疫疾病以及癌症发生的增多3，4。 目前，中药延缓衰老作用的研究已逐渐深入，有关学者在细胞传代、寿命实验、免疫内分泌代谢等领域进行了多方面的研究，揭示了不少药物的抗衰老机理。中药天年饮由刘河间宣明论方何首乌丸加味而成，由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝等组成，具有补肝肾、益精血、延年益寿之功效。本文采用半乳糖致亚急性衰老的大鼠模型，进一步深入探讨天年饮延缓衰老的作用机制。 1 材料和方法动物的选择与分组雄性SD大鼠40只，体重180250 g。将大鼠随机分为4组，正常组、衰老模型组、天年饮用药组和阴性对照组，每组10只。其中模型组、用药组、阴性对照组大鼠均采用D半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的动物模型。模型组大鼠造模成功后不再做任何处理；用药组大鼠造模成功后每天用天年饮灌胃，共30 d；阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃同等剂量的生理盐水，时间同用药组大鼠。药品与试剂天年饮由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓等6味中药组成，熬制后每毫升含生药 g，按 g/kg灌胃给药。 D半乳糖由北京化学试剂公司生产(批号020402)。检测血清IL2，IL6含量的ELISA试剂盒由晶美公司提供；MTT，美国USB公司产品。 指标的检测血清IL2，IL6含量的检测大鼠经内眦取血，离心后取上清。采用双抗体夹心ELISA法按试剂盒说明进行操作，检测各组大鼠血清IL2及IL6的含量。脾淋巴细胞增殖转化的检测采用常规MTT法检测脾淋巴细胞的增殖情况。大鼠断头处死，无菌取脾常规制成淋巴细胞悬液，调细胞浓度为5109/L，加入96孔板中，再加入刀豆蛋白A，置于CO2培养箱中72 h，培养结束前4 h加入MTT，培养结束后加入二甲基亚枫，于酶标仪570 nm处比色测定光密度值。巨噬细胞吞噬功能的检测按文献5的方法测定巨噬细胞的吞噬功能，计算吞噬指数和吞噬率。统计分析所有数据以 s表示，采用SPSS 统计分析软件以t检验进行统计处理。2 结果大鼠血清IL2及IL6含量结果见表1。由表1可见，衰老模型大鼠血清IL2的含量明显下降、IL6的含量明显上升；中药天年饮可显着提高衰老大鼠血清IL2含量、降低衰老大鼠血清IL-6的含量，用药组与模型组比较差异显着。表1 各组大鼠血清IL2和IL6的含量(略)大鼠脾淋巴细胞的增殖转化情况结果见表2。由表2可见，衰老大鼠脾淋巴细胞的增殖能力明显下降，与正常大鼠比较有显着差异；天年饮可明显提高衰老大鼠脾淋巴细胞的增殖能力，用药组明显高于衰老组。表2 各组大鼠脾淋巴细胞增殖转化及巨噬细胞的吞噬功能(略)大鼠巨噬细胞的吞噬功能结果见表2。由表2可见，衰老大鼠巨噬细胞的吞噬功能明显下降；天年饮可明显提高衰老大鼠巨噬细胞的吞噬功能。3 讨论 我国传统医学认为精气虚弱是导致机体衰老的主要原因，因此历代医家多用补肾为主的方药来延年益寿。天年饮是我院中医系教授贾春华博士在刘河间宣明论方何首乌丸的基础上加味而成的。何首乌丸本由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝组成，能填精补髓，乌发延年。于此基础上加淫羊藿补肾壮阳以强筋骨，丹参活血化瘀以通心脉，茯苓健脾利湿以宁心神。诸药相配通调心脾肝肾四脏，而以肾为主。我们的实验观察已经发现，天年饮具有延缓性腺衰老、增强机体的抗氧化能力、改善学习记忆功能等多方面的作用68。本文主要观察了天年饮对D-半乳糖衰老大鼠免疫功能的影响。 随着年龄的增长，机体的免疫功能发生紊乱并逐步衰退。研究表明，老年机体免疫功能的下降主要与T细胞的变化有关，包括T细胞亚群、T细胞功能以及T细胞的活化途径等9。IL-2主要由活化的T细胞产生，其主要生物学活性是促进NK细胞、T细胞和B细胞等的活化、增殖，在调节免疫应答、抗肿瘤等方面发挥重要作用，是反映机体免疫功能强弱的重要指标，IL-2产生的减少可加速机体的衰老进程10。IL-6主要是由单核巨噬细胞、T细胞、B细胞等产生的细胞因子，不仅在免疫系统中具有重要作用，还可作用于神经内分泌系统，从而影响全身各功能系统的活动。IL-6的异常表达被认为是某些疾病的典型特征，在衰老和许多老年疾病发生时，IL-6的水平均有不同程度的升高；由于IL-6的水平异常升高，可导致一系列免疫功能和内分泌功能的紊乱，从而加速机体的衰老进程11。 同时观察IL-2，IL-6、淋巴细胞增殖转化及巨噬细胞的吞噬功能等指标，可了解老年机体免疫衰退或紊乱的情况及探讨药物提高免疫功能的作用。本研究发现，中药天年饮可提高衰老大鼠血清IL-2的含量、降低衰老大鼠血清IL-6的含量，显着提高衰老大鼠的脾淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能。说明，天年饮通过促进淋巴细胞的增殖、提高机体的免疫功能而发挥延缓衰老的作用。中药天年饮通过何种机制提高机体的免疫功能，尚待进一步的探讨。 【参考文献】 1Besedovsky H, Sorkin E. Network of immune-neuroendocrine interactionsJ.Clin Exp Immunol, 1977,27(1):1. 2Meites J. Neuroendocrine biomarkers of aging in the ratJ.Exp Gerontol, 1988, 23(4-5):349.3Kudlacek S, Willvonseder R, Stohlawetz P, et al. Immunology and agingJ.Aging Male, 2000,3(3):137.4Weng NP. Ageing of the immune system: how much can the adaptive immune system adaptJ.Immunity, 2006,24(5):495-4995Salonen JT, Salonen R. Ultrasound B-mode imaging in observational studies of atheroserotic progression J.Circulation, 1993,87(3 Suppl): 56.6陈志宏，高福禄，庞晓静，等. 天年饮对亚急性衰老大鼠睾丸生精细胞增殖与凋亡的影响J.中国老年学杂志，2004，24(4)：347.7陈志宏，宋成军，高福禄. 天年饮调节血脂及抗氧化作用的实验研究J.时珍国医国药，2006，17：528.8陈志宏，高福禄，庞晓静. 中药天年饮对衰老大鼠学习记忆及脑单胺类神经递质含量的影响J.时珍国医国药，2006，17：7.9Pawdec G, Barnett Y, Forsey R, et al. T cells and agingJ.Front Biosci, 2002,7: d1056.10Sawin S, Clise-Dwyer K, Haynes L. Homeostasis and the age-associated defect of CD4 T cellJ.Semin Immunol, 2005,17(5): 370.11Huang H, Pate, DD, Manton KG. The immune system in aging: roles of cytokines, T cell and NK cellsJ. Front Biosci, 2005,10: 192.