丹心舒胶囊中三七和丹参的有效成分含量测定.docx

丹心舒胶囊中三七和丹参的有效成分含量测定
【摘要】 目的 建立丹心舒胶囊中三七和丹参有效成分的含量测定方法。方法 采用HPLC法测定本品中三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1及丹参中丹参酮ⅡA的含量。结果 人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1线性范围分别依次为～ μg、～ μg、～ μg；平均回收率分别为％、％、％，RSD分别为％、％、％；丹参酮ⅡA线性范围为～ μg,平均回收率为％，RSD为％。结论 本方法简便可靠，结果稳定，可用于丹心舒胶囊中三七和丹参的有效成分的含量测定。
【关键词】 丹心舒胶囊 人参皂苷Rg1 Rb1 三七皂苷R1 丹参酮ⅡA 含量测定
　Analysis of the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Danxinshu capsules
　　Abstract:Objective To analyze the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Danxinshu capsules. Methods HPLC was used to analyze the contents of ginsenoside Rg1 and Rb1, notoginsenoside R1 and tanshinoneⅡA in Danxinshu capsules. Results The linear ranges of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, notoginsenoside R1 and tanshinone ⅡA were ～, ～, ～ and ～ μg with average recoveries of ％ (RSD=％) , ％ (RSD=％), ％ (RSD=％) and ％ (RSD=％) , respectively. Conclusion The method is simple, reliable and stable, which could be used for the quality control of Danxinshu capsules.
　　Key words: Danxinshu capsule；ginsenoside Rg1; ginsenoside Rb1；notoginsenoside R1; tanshinoneⅡA
　　丹心舒胶囊由三七、丹参、桃仁等十一味药组成，本方为活血化瘀、通窍止痛类药物,并能扩张血管，增加冠状动脉血流量，用于冠心病、心绞痛等症。

　　三七和丹参为方中主药，三七中的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1，已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制剂的质量［1-7］。孙树周［7］和廖华卫［8］等报道采用HPLC法对丹参中丹参酮ⅡA进行含量测定。本文采用HPLC法，同时对丹心舒胶囊中的三七总皂苷和丹参酮ⅡA进行了含量测定，可用于控制丹心舒胶囊的质量，同时也可作为丹心舒胶囊的质控标准。
　　1 仪器与试药

　　Waters2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；PDA检测器；Diamonsil C18柱；KQ100型超声波清洗器。

　　人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、丹参酮ⅡA对照品均购自中国药品生物制品检定所；甲醇；乙腈；屈臣氏蒸馏水。丹心舒胶囊。
　　2 人参中有效成分含量测定
　　色谱条件

　　色谱柱：Diamonsil C18柱；以乙腈为流动相A，水为流动相B，进行二元梯度洗脱，洗脱程序：0→120 min流动相A 19%→36%，流动相B 81%→64%；流速：　mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：203 nm。
　　对照品溶液制备

　　精密称取经五氧化二磷减压干燥的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品适量，分别加甲醇制成：人参皂苷Rg1质量浓度为 mg/mL、人参皂苷Rb1质量浓度为 mg/mL，三七皂苷R1质量浓度为 mg/mL的溶液，将三者混合作为对照品溶液。
　　供试品溶液制备

　　取样品适量，研细，混匀，取约 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声30 min，使三七总皂苷溶解后，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。
　　阴性溶液制备

　　按处方比例依法配制除三七以外的阴性样品，按“”项方法制备三七阴性溶液。

　　取以上样品进行测定，结果显示阴性对照色谱中，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1峰附近无其他峰影响。结果见图1。
　　A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性溶液
　　图1 三七总皂苷的HPLC图谱
　　HPLC of Panax Notoginseny Saponins
　　线性关系的考察

　　分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，按上述的HPLC条件分析，以峰面积对进样量(m) 进行线性回归，得回归方程分别为：人参皂苷Rg1线性方程为A=，r=，线性范围为～ μg；人参皂苷Rb1线性方程为A=+，r=，线性范围为～ μg；三七皂苷R1线性方程为A=，r=，线性范围为～ μg。
　　精密度试验

　　分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品溶液，于测定条件下进样10 μL，分别重复进样5次。以3种组分峰面积分别计算，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为%、%、%，结果表明仪器精密度良好。
　　重现性试验

　　精密称取丹心舒胶囊内容物(批号050806)共5份，按“”项制备供试品溶液，取供试品溶液20 μL，按“”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1平均含量分别为2．67、、 mg/g，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为％，％、％。测定结果表明，本方法重现性符合要求。
　　稳定性试验

　　精密称取丹心舒胶囊内容物(批号050806)，分别按“”项制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、10、24 h进样，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为%、%、%。表明供试品溶液在24 h内稳定。
　　回收率试验

　　精密称取已知含量的丹心舒胶囊样品6份(批号050806)，分别精密加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品适量，按“”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果见表1～3。
　　样品测定

　　取3批丹心舒胶囊内容物，分别按“”项下方法进行处理样品及测定，结果批号为050806、050807、050808的样品测得的三七总皂苷含量分别为 9、 2、 1 mg/粒。
　　表1 人参皂苷Rg1加样回收率试验
　　Recovery test of ginsenoside Rg1
　　表2 人参皂苷Rb1加样回收率试验
　　The recovery test of ginsenoside Rb1
　　表3 三七皂苷R1加样回收率试验
　　Recovery test of notoginsenoside R1
　　3 丹参中有效成分丹参酮Ⅱ的含量测定
　　色谱条件［9］

　　色谱柱：Diamonsil C18柱；流动相：甲醇水(体积比75∶25) ；流速： mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：270 nm。
　　对照品溶液制备

　　精密称取丹参酮ⅡA对照品 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
　　供试品溶液制备

　　取样品适量，研细，取 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流提取1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　阴性溶液制备

　　按处方比例依法配制除丹参以外的阴性样品，按““项方法制备丹参阴性溶液。结果显示阴性对照色谱中丹参酮ⅡA峰附近无其他峰影响。结果见图2。
　　线性关系的考察

　　精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，按上述的HPLC条件分析，以峰面积对进样量(m) 进行线性回归，得丹参酮ⅡA回归方程为A=＋，r=，线性范围为～ μg。
　　精密度试验

　　精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液，于测定条件下进样10 μL，分别重复进样5次。以丹参酮ⅡA峰面积计算，其RSD为%；结果表明仪器精密度良好。
　　重现性试验

　　精密称取丹心舒胶囊内容物(批号050806)共5份，按“”项方法制备供试品溶液，取供试品溶液20 μL，按“”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得丹参中丹参酮ⅡA平均含量为 mg/g， RSD为％。测定结果表明，本方法重现性符合要求。
　　A 丹参酮ⅡA对照品 B 供试品溶液 C 阴性溶液
　　图2 丹参酮ⅡA的HPLC图谱
　　HPLC of TanshinoneⅡA
　　稳定性试验

　　精密称取丹心舒胶囊内容物(批号050806)，分别按“”项制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、10、24 h进样，结果丹参酮ⅡA的RSD为%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
　　回收率试验

　　精密称取已知含量的丹心舒胶囊样品6份(批号050806)，分别精密加入丹参酮ⅡA对照品适量，按“”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果见表4。
　　3．10 样品测定

　　取3批丹心舒胶囊内容物，分别按“”项下方法进行处理样品及测定，结果批号为050806、050807、050808的样品测得的丹参酮ⅡA含量分别为、、 mg/粒。
　　表4 丹参酮ⅡA加样回收率试验
　　Recovery test of tanshinoneⅡA
　　4 讨论
　　丹参酮ⅡA是丹参中主要脂溶性活性成分，为全面考察丹参有效成分在成品中的转移率，我们测定了丹参药材和丹心舒胶囊中丹参酮ⅡA的含量，胶囊中含量为％，按药材含量折算转移率为%，因此可作为丹心舒胶囊的质控指标。
　　丹参酮ⅡA是丹参治疗冠心病的有效成分之一，其水溶性差，遇光和热不稳定。在提取过程中，提取时间、温度、方法等对其含量都有影响，其损失随加热温度升高和加热时间延长而增加,所以温度成为影响丹参酮ⅡA提取效率的重要因素，同时本品中的含量高低也与提取工艺有关。
【参考文献】
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　　［3］ 何夏秋，杨 蕾，贺建华，等．用HPLC法测定三七及益尿通胶囊中人参皂苷Rg1的含量［J］．中国中药杂志，2001，26 (1)：37．
　　［4］ 王强，江英桥，马世平，等．高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1的含量［J］．中国中药杂志，2000，25(10)：617．
　　［5］ 权丽辉，赵淑平，薛 岚，等．HPLC测定鑫森脑泰粉针剂中三七皂苷R1的含量［J］．中草药，2001，32(6)：502．
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　　［7］ 孙树周. HPLC法测定复方丹参片中丹参酮ⅡA的含量［J］.广东药学院学报，2002，18：201.
　　［8］ 廖华卫 ，朱彩燕 ，邓金梅 ，等. RP-HPLC测定血脉通片中丹参酮ⅡA的含量［J］.广东药学院学报，2007，23：129.
　　［9］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：52.