毛细管气相色谱法测定辛夷药材中桉油精含量.docx

毛细管气相色谱法测定辛夷药材中桉油精含量
【摘要】 　　目的建立辛夷药材中桉油精含量的测定方法。方法采用水匀浆破碎，挥发油提取器中回流提取， ＦＦＡＰ 毛细管色谱柱分离，火焰离子化检测器检测，以苯乙烯为内标，毛细管气相色谱法测定辛夷药材中桉油精的含量。结果在桉油精进样量为０．４ ～３．０ ｍｇ 时有良好的线性关系；加标平均回收率为９９．３％，RSD为１．８％。结论加水匀浆破碎可有效地防止破碎过程中桉油精的挥发。不同产地辛夷药材桉油精含量相差很大。
【关键词】 辛夷 桉油精 毛细管气相色谱
　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ＧＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｎｅｏｌ ｉｎ Ｘｉｎｙｉ．MethodsXｉｎｙｉ ｗａｓ ｐｕｌｖｅｒｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ， ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ sｅｐａｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｃｏｌｕｍｎ ＦＦＡＰ　ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃｉｎｅｏｌ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌａｍｅ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｏｒ .Ｓｔｙｒｅｎｅ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ．ResultsＴｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ０．４～３．０ ｍｇ ， ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．３％， RSD ｗａｓ １．８％．ConclusionＴｈｅｒｅ ｅｘｉｓｔｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃｉｎｅｏｌ ｉｎ Ｘｉｎｙｉ， wａｔｅｒ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ａｎｄ ｐｕｌｖｅｒｉｚｉｎｇ ｃａｎ ａｖｏｉｄ ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｉｎｅｏｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｖａｉｌａｂｌｙ ．
　　Key words：Ｘｉｎｙｉ； Ｃｉｎｅｏｌ； Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ

　　辛夷，又名紫玉兰、望春花，属木兰科木兰属落叶乔木［１］ ，其花蕾入药称辛夷。有散风寒、通鼻窍之功效［２］ 。辛夷挥发油是一种重要的天然香料，广泛用于医药、日化和香精香料等行业［３］ 。辛夷挥发油的测定及化学成分的质谱分析已有报道，提取方法有水蒸气蒸馏法［４］ 、浸膏法［５］ 、超临界ＣＯ２ 流萃取法［６］等，以上方法提取辛夷中挥发油时，样品的破碎对桉油精的回收率有很大的影响［４］ 。桉油精是辛夷挥发油的重要组成部分，国内对辛夷药材桉油精含量测定的相关报道很少，２００５ 版《中国药典》Ⅰ部附录ⅩＣ 给出的桉油精含量测定法使用ＰＥＧ２０Ｍ ＋ＯＶ－１７ 混装气相色谱填充柱，适用于成分不太复杂的药材和中成药中桉油精含量测定。辛夷药材挥发油的成分复杂，《中国药典》的方法不能使与桉油精相邻的峰分离。因此，本实验选用ＦＦＡＰ 毛细管柱建立了辛夷药材中桉油精含量的气相色谱内标测定方法，采用匀浆破碎回流提取有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，确保了测定结果的真实性和准确性。
　　1 仪器和材料

　　岛津ＧＣ －１６Ａ 气相色谱仪、ＦＩＤ 检测器、ＳｅＰｕ３０００ 色谱工作站；匀浆机，ＦＦＡＰ 毛细管色谱柱。

　　辛夷药材由贵阳中医学院提供和鉴定，分别采自河南、广西和贵州。

　　化学对照品桉油精；苯乙烯。其它试剂均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　对照品溶液的配制准确称取对照品桉油精适量，用甲醇溶解后置于１０ ｍｌ 容量瓶中，配制成２０ ｍｇ／ｍｌ 的储备液，精密取出０．０５０ ｍｌ 储备液于５．０ ｍｌ 的０．２５ ｍｇ／ｍｌ 的苯乙烯－三氯甲烷内表液中，加水１ ｍｌ，振摇提取０．５ ｍｉｎ，离心，下层有机相为对照品溶液。
　　样品溶液的配制取辛夷药材１０ ｇ，精密称量于匀浆罐中，加水１５０ ｍｌ，匀浆，浆液及洗涤匀浆罐的水一并转移到２５０ ｍｌ 蒸馏瓶中，加入环己烷５．０ ｍｌ，于挥发油提取器［７］中回流提取４ ｈ，有机相收集于离心试管中，离心、将上清有机相转入１０ ｍｌ 容量瓶中，分别用２．５，２ ｍｌ 环己烷洗用过的提取器收集管和离心试管，离心、将上层有机相一并转入１０ ｍｌ 容量瓶中用环己烷定容为待测溶液，精密吸取待测溶液０．２５ ｍｌ，内标溶液５．００ ｍｌ，于１０ｍｌ 具塞离心试管中，加水１．０ ｍｌ，振摇提取０．５ ｍｉｎ，离心，下层有机相为供试品溶液。
　　色谱条件用ＦＦＡＰ 毛细管色谱柱；氮气为载气、柱前压８０ ｋＰａ；汽化室温度２４０℃；检测器温度２４０℃；柱温：８０℃保留６ ｍｉｎ，以４０℃／ｍｉｎ 的速率升到２２０℃，保留２ ｍｉｎ；以苯乙烯为内标在火焰离子化检测器上测定桉油精含量。
　　根据对照品的保留时间定性，峰面积比计算桉油精的含量。
　　色谱柱和内标物的选择分别用ＳＥ －３０，ＳＥ －５４，ＯＶ －１７０１ 和大口径、小口径的ＦＦＡＰ 毛细管柱进行对照品和样品的测定。结果表明，桉油精在大口径、小口径的ＦＦＡＰ 毛细管柱的峰形都很好，但样品经大口径的ＦＦＡＰ 毛细管柱分离，有一小峰不能与内标物分开。经各种内标物醋酸乙酯、冰片、萘和苯乙烯比较表明，苯乙烯能与其它峰完全分开且在恰当时间出峰。因此，选择苯乙烯为内标，色谱柱为小口径的ＦＦＡＰ 毛细管柱。样品与对照品的分析图谱见图１。
　　图１ 气相色谱图
　　前处理方法的选择经不同前处理方法比较桉油精的挥发损失试验，结果表明：辛夷药材在４０ ～４５℃烘干４ ｈ，其中的桉油精挥发损失约３０％；将辛夷药材在套环式撞击制样机中粉碎，撞击使样品破碎而同时发热，桉油精挥发损失３０％以上；破碎的样品于烧杯中室温下敞开放置５ ｄ 桉油精全部挥发。因此，本实验采用加水匀浆破碎，回流提取分析辛夷药材中的桉油精含量，有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，测定结果比干法粉碎的结果要高。
　　提取时间的选择取辛夷药材１０ ｇ，精密称量于匀浆罐中，加水１５０ ｍｌ，匀浆，浆液及洗涤匀浆罐的水一并转移到２５０ ｍｌ 蒸馏瓶中，加入环己烷５．０ ｍｌ，于挥发油提取器中回流提取，考察提取时间与提取率。结果见表１。
　　表1 辛夷药材中桉油精的提取率
　　从表１ 可知，采用匀浆破碎后，回流提取≤４ ｈ 时，随蒸馏时间的增长，出油率增高，蒸馏时间＞４ ｈ 后，延长蒸馏时间，出油率变化不大，且可能影响按油精的质量。因此，辛夷药材的最佳蒸馏时间为４ ｈ。
　　线性关系考察配制桉油精标准溶液系列，桉油精加入量分别为０．４，０．８，１．２，１．６，２．０，２．５，３．０ ｍｇ，加水１．０ ｍｌ，内标液５．００ ｍｌ，振摇提取０．５ ｍｉｎ，离心，吸取下层２．０ μｌ，注入气相色谱仪测定，以相对峰面积A’／对加入桉油精ｍ 进行线性回归，在０．４ ～３．０ ｍｇ 范围内，线性方程为A’＝０．６６２ ２ m ＋０．０１４ ９。
　　精密度试验与重现性实验取对照品溶液２．０ μｌ，按色谱条件进行测定，连续进样５ 次，求出桉油精的相对峰面积，RSD为０．２２％。

　　取同一个批号辛夷药材制成的供试品溶液５ 份各２．０ μｌ，按色谱条件进行测定，连续进样５ 次，求出桉油精的相对峰面积， RSD为１．１２％。
　　回收率实验精密称取辛夷药材５ ｇ ，共计９ 份，分别加入桉油精２４．００，３０．００，３６．００ ｍｇ，制备成供试品溶液，分别进样测定，记录色谱图。结果表２。
　　表2 回收率实验结果
　　样品测定按本实验建立的方法测定了河南、广西和贵州不同产地的辛夷药材，结果表明，不同产地的药材中桉油精的含量差异很大。
　　3 结论

　　本实验建立的加水均浆制样有效地防止了辛夷药材中桉油精的挥发，确保了测定结果的可靠性。

　　通过对十余批辛夷药材中桉油精的测定，表明本法具有良好的精密度和准确性，可用于辛夷药材的质量控制。
【参考文献】
　　［1］ 《全国中草药汇编》编辑委员会．全国中草药汇编［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９８８：３９８．
　　［2］ 张 涛．复方辛夷滴鼻剂的研制及应用［Ｊ］．中国医院药学杂志，１９９６，１６：３７．
　　［3］ 李 和，李佩文，丁振华．食品香料化学—杂环香味化合物［Ｍ］．北京：中国轻工业出版社，１９９２：１２０．
　　［4］ 尹献忠，李 晓，李胜华，等．水蒸气蒸馏法提取辛夷精油及在卷烟加香中的应用研究［Ｊ］．郑州轻工业学院学报，２００３，１８：６５．
　　［5］ 汤天曙，张 鑫，熊卫东，等．辛夷挥发油的提取及组分的研究［Ｊ］．精细与专用化学品， １９９７，１８：１．
　　［6］ 张 鑫，姚光明，张峻松，等．超临界ＣＯ２ 流萃取及与水蒸气蒸馏萃取辛夷挥发油的化学组分分析［Ｊ］．精细化工，１９９９，１６：１０．
　　［7］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５：附录５７．