瞬时受体电位香草酸6在子宫...不同分子亚型中的表达及意义_严淑萍.pdf

基金项目:河南省中青年卫生健康科技创新领军人才项目(YXKC2022015)作者简介:严淑萍(1983 )，女，硕士，副主任医师，主要从事女性生殖系统病理诊断工作。E-mail:15890140326163 com通信作者:陈奎生(1963 )，男，博士，教授，主要从事肿瘤病理基础与临床工作。E-mail:chenksh2002163 com瞬时受体电位香草酸 6 在子宫内膜癌不同分子亚型中的表达及意义严淑萍，许跃，郑湘予，马怡晖，杨琛擘，孙淼淼，陈奎生(郑州大学第一附属医院病理科，河南 郑州 450052)摘要 目的探讨瞬时受体电位香草酸 6(TPV6)在子宫内膜癌不同分子亚型中表达差异及意义。方法收集郑州大学第一附属医院 2018 年 3 月至 2022 年 2 月期间诊断且采用高通量测序技术进行分子分型的 140 例子宫内膜癌患者临床资料及组织石蜡标本，采用免疫组化方法检测 TPV6 在 140 例患者组织标本、27 例非典型增生子宫内膜及 10 例增生期子宫内膜中的表达情况。结果TPV6 在增生期子宫内膜、非典型增生及子宫内膜癌组织中表达逐渐升高(40 00%、70 37%、81 61%)，差异有统计学意义(2=9 023，P=0 009);在低级别(、级)子宫内膜样癌组织中表达明显高于高级别(级)，差异有统计学意义(82 98%、90 00%、57 14%;2=6 136，P=0 047)。在不同分子亚型中，错配修复缺陷(MMd)型中表达最高，约 93 55%(29/31)，p53 突变型中表达最低，约 40 74%(22/54)，在无特定分子特征型(NSMP)约 86 21%(25/29)、POLE 突变型中约 65 00%(13/20)，差异有统计学意义(2=15 297，P=0 002)。与 E、P 阴性(61 40%、64 06%)相比，TPV6 在 E、P 阳性的癌组织中高表达(81 25%、80 82%)，差异有统计学意义(2=6 650，P=0 010;2=4 859，P=0 028)。结论TPV6 促进子宫内膜癌进展，TPV6 随 E、P 表达而上调，在低级别子宫内膜样癌组织中高表达，TPV6 单抗有望成为子宫内膜癌患者生物治疗的新靶点。关键词 子宫内膜癌;分子分型;免疫组化;瞬时受体电位香草酸 6DOI:10 3969/j issn 1673-5412 2022 06 002 中图分类号 737 33 文献标识码 A 文章编号 1673 5412(2022)06 0466 05Expression and significance of transient receptor potential vanilloid 6 in different mo-lecular subtypes of endometrial carcinomaYAN Shuping，XU Yue，ZHENG Xiangyu，MA Yihui，YANG Chenbo，SUN Miaomiao，CHEN Kuisheng(Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)Abstract ObjectiveTo investigate the differential expression of transient receptor potential vanilloid 6(TPV6)indifferent molecular subtypes of endometrial carcinoma and its significance MethodsThe clinical data and paraffin samplesof 140 patients with endometrial cancer diagnosed by high-throughput sequencing technology in the First Affiliated Hospitalof Zhengzhou University from March 2018 to February 2022 were collected Immunohistochemistry was used to detect theexpression of TPV6 in the tissues of 140 patients，27 atypical hyperplasia endometrium and 10 hyperplasia endometriumtissues esultsThe expression of TPV6 increased gradually in the endometrium，atypical hyperplasia and carcinomatissues(40 00%，70 37%，81 61%)，the difference was significant(2=9 023，P=0 009)The expression of T-PV6 in low-grade endometrioid carcinoma was significantly higher than high-grade(82 98%，90 00%，57 14%;2=6136，P=0 047)Among different molecular subtypes，mismatch repair-deficient(MMd)had the highest expression，a-bout 93 55%(29/31)，the lowest expression was found in p53-mutant，about 40 74%(22/54)，in no specific molecu-lar profile(NSMP)about 86 21%(25/29)and POLE-mutant about 65 00%(13/20)，the difference was statistically sig-nificant(2=15 297，P=0 002)Compared with the E and P negative cancer(61 40%，64 06%)，TPV6 is high-ly expressed in the E and P positive cancer(81 25%;80 82%)，the difference was statistically significant(2=6664JOUNAL OF BASIC AND CLINICAL ONCOLOGY Vol.35 No.6 Dec.2022650，P=0 010;2=4 859，P=0 028)ConclusionTPV6 promotes the progression of endometrial cancer TPV6 isup-regulated with E and P expression，and highly expressed in low-grade endometrioid cancer TPV6-targeted is ex-pected to become a new target for biologic therapy of endometrial cancer Key words endometrial cancer;molecular subtypes;immunohistochemistry;transient receptor potential vanilloid 6子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，近年来子宫内膜癌的发病率逐年上升，且呈年轻化趋势1。瞬时受体电位香草酸 6(transient receptor po-tential vanilloid 6，TPV6)是 TP 通道的主要成员，对二价阳离子，特别是钙离子具有高度选择性2。T-PV6 在人类多种癌组织中过表达，包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、卵巢癌、甲状腺癌、子宫内膜癌3。由于TPV6 可以增加细胞内钙离子和启动下游信号通路，从而增加细胞增殖、转移和抑制凋亡，因此 TPV6 已经成为恶性肿瘤治疗中的靶点。但有关 TPV6 在子宫内膜癌不同分子类型中的表达情况未有报道，本文就 TPV6 在不同分子亚型之间的差异进行研究。1资料与方法1 1研究对象收集郑州大学第一附属医院病理科2018 年 3 月至 2022 年 2 月期间诊断并进行分子分型的子宫内膜癌患者石蜡包埋的组织标本 140 例:其中子宫内膜样癌 87 例(6 例为去分化癌;3 例刮宫后标本，E、P 无靶组织)，透明细胞癌 9 例，浆液性癌 44例(5 例伴有高级别肉瘤);分子分型:错配修复缺陷(mismatch repair defect，MMd)型 31 例，无特定分子特征型(no specific molecular profifile，NSMP)29 例，POLE 突变型 20 例，p53 突变型 54 例(6 例透明细胞未进行分子分型，统计分子分型时除外);其中 9 例患者具有多重分子特征(具有 MMd 和 p53 突变双重特征患者 5 例，具有 POLE 突变和 p53 突变双重特征患者 4 例)。患者中位年龄 57(27 82)岁;FIGO 分期:期患者 105 例，期 35 例;12 例伴有淋巴结转移;25 例伴有脉管浸润。另选同期非典型增生子宫内膜 27 例及增生期子宫内膜 10 例。该研究已经获得郑州大学第一附属医院伦理委员会批准(伦理号2022-KY-1200-002)。1 2免疫组化染色采用 Leica Bond-全自动免疫组化仪，E、P 购自上海罗氏诊断产品有限公司;T-PV6 购自同宜医药(苏州)有限公司;Bond 显色系统购自英国 Leica 公司，一抗均为工作液。以已知阳性组织为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗为空白对照。1 3分子分型TP53、POLE 基因采用一代测序;微卫星不稳定检测试剂盒购自常州桐树生物科技有限公司，按照试剂盒说明进行检测;测序仪 Genetic Analyzer3500Dx 购自美国 Applied Biosystems 公司。1 4结果判读根据阳性细胞比例及阳性着色强度4，按如下评分标准判定结果:阳性细胞数 5%、5%25%、25%50%、50%75%及75%，分别判定为 0、1、2、3、4 分;每张切片阳性细胞的着色强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别判定为0、1、2、3 分;根据两项积分之和判定结果，0 分阴性()，1 2 分弱阳性(+)，3 5 分中等阳性(+)，6 7 分强阳性(+)。处理时，将阴性()、弱阳性(+)视为阴性，中等阳性(+)、强阳性(+)视为阳性。1 5统计学处理采用 SPSS 21 0 进行统计分析，计数资料以数量和百分数表示，计数资料比较、各指标与临床病理参数之间相关性采用 2检验或 Fisher 确切概率法，检验水准 =0 05。2结果21TPV 在子宫内膜癌、非典型增生及增生期子宫内膜组织中表达情况在增生期子宫内膜中弱阳性表达(40 00%)，在非典型增生和子宫内膜样癌组织中表达逐渐增强(70 37%、81 61%)，呈强阳性表达，差异有统计学意义(2=9 023，P=0 009)。见图 1、表 1。2 2TPV6 在子宫内膜癌组织中表达与患者临床病理特征的关系TPV6 表达与子宫内膜癌组织学类型、组织学分级、分子分型及 E、P 表达有关。见表 2。3讨论子宫内膜癌在生物学行为、临床表现、组织学形态及遗传学方面都具有显著的异质性，因此 2013 年癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)提出了子宫内膜癌 4 种分子亚型5。在 TCGA 分子分型基础764肿瘤基础与临床 2022 年 12 月第 35 卷第 6 期上，女性生殖器官肿瘤第 5 版 WHO 分类6 将子宫内膜癌分为 POLE 突变型、MMd 型、NSMP 型及 p53 突变型或异常型(p53abn)。一项对子宫内膜癌分子分型研究7 显示:大约 3%(107/3518)的肿瘤同时具有p53 突变和其他分子特征，肿瘤具有 MMd 和 p53 突变分子改变归为 MMd 型，具有 POLE 突变和 p53 突变分子改变归为 POLE 突变型。本组患者存在多重分子特征的比率稍高，大约 6 25%(9/134)，同时具有MMd 和 p53 突变分子特征 5 例，具有 POLE 突变和p53 突变分子特征4 例，均参照上述标准进行分子分型。图 1TPV6 在不同子宫内膜组织中的表达(200)A:增生期子宫内膜弱阳性表达;B:非典型增生内膜强阳性表达;C:子宫内膜样癌弱阳性表达;D:子宫内膜样癌强阳性表达;E:透明细胞癌强阳性表达;F:浆液性癌强阳性表达表 1TPV6 在不同子宫内膜组织中的表达组别n阳性阴性阳性率/%2P子宫内膜样癌87711681 61非典型增生27198703790230009正常子宫内膜10464000表 2TPV6 在子宫内膜癌组织中表达与患者临床病理特征的关系项目n阴性阳性阳性率/%2P组织学类型内膜样癌8716718161浆液性癌441925568219 007 0001透明细胞癌97222 22FIGO 分期 105258076 1914820 269 3512236571组织学分级4783982 982021890 0061360 047146857 14续表 2TPV6 在子宫内膜癌组织中表达与患者临床病理特征的关系项目n阴性阳性阳性率/%2P淋巴结转移无128349473440 0140 907有12397500脉管癌栓无115278876522 8830 090有2510156000分子分型MMd312299355NSMP29425862115 2970 002POLE 突变207136500p53 突变5422325926E阴性57223561406 6500 010阳性8015658125P阴性64234164064 8590 028阳性7314598082年龄/岁5550113978000 7850 376559026647111TPV6 具有明显的钙离子选择性，在钙稳态中发864JOUNAL OF BASIC AND CLINICAL ONCOLOGY Vol.35 No.6 Dec.2022挥重要作用8，大量研究显示 TPV6 通过影响细胞内钙离子浓度来调节多种细胞功能，包括分化、增殖和凋亡9。由于钙在恶性肿瘤的发生中起着核心作用3，因此 TPV6 也被称为癌通道10。研究显示 TPV6在人类几种癌组织中表达上调，包括前列腺癌和乳腺癌11 12，并且与患者预后差相关13。但 Koh 等14 对219 例肝细胞癌患者研究发现，TPV6 在肝细胞癌中表达下调，并与不良预后相关。在早期宫颈鳞癌中TPV6 表达下调，且表达水平低的患者疾病无进展生存期和总生存期持续时间均较短15。更罕见的是在早期食管鳞癌中 TPV6 作为一种预测预后的生物学指标，TPV6 表达下调在男性提示预后好，而在女性提示预后差16。本研究显示 TPV6 作为一种跨膜蛋白，主要表达于上皮细胞膜和细胞质中，在增生期子宫内膜腺体中呈弱阳性表达(40 00%)，在非典型增生(70 37%)及子宫内膜样癌组织(81 61%)中表达增强，呈强阳性表达，且阳性表达率明显升高，因此 T-PV6 促进子宫内膜癌进展。大量研究表明，TPV6 表达上调与肿瘤患者预后不良的相关，而下调 TPV6 则通过调节钙信号激活来抑制癌细胞的增殖、迁移和侵袭17 18。因此，TPV6 被认为是一种癌通道和包括子宫内膜癌在内的恶性肿瘤潜在治疗靶点，可能在特异性钙信号激活过程中发挥直接作用。激素受体可能影响某些癌组织中 TPV6 水平，因为 TPV6 基因启动子包含 E 应答元件19。在大鼠妊娠期间，子宫和胎盘中的 TPV6 水平均通过 E 和P 依赖的途径而上调，并通过对这些受体的拮抗剂而降低20。在 E 阴性的乳腺癌中，TPV6 水平升高与预后不良相关21。他莫昔芬是一种 E 拮抗剂，导致乳腺癌细胞系 T-47D 中 TPV6 mNA 下调，而雌激素增加，孕酮和雌二醇也增加22。本研究显示 TPV6在 E 阳性的子宫内膜癌组织中 表 达 明 显 升 高(81 25%、61 40%)，且随着 E、P 表达而上调;在低级别子宫内膜样癌组织中表达明显高于高级别。在子宫内膜癌不同组织类型中，TPV6 在激素依赖性的型子宫内膜癌中表达明显高于非激素依赖性的型子宫内膜癌，特别是在透明细胞癌中表达显著下降(22 22%)。另外，本研究显示 TPV6 在子宫内膜癌中表达与分子类型密切相关，在不同分子亚型中表达具有显著性差异，MMd 中表达最高(93 55%)，p53突变型中表达最低(40 74%)，在 NSMP 及 POLE 突变型中表达分别为86 21%、65 00%。因此 TPV6 可做为子宫内膜分子分型的辅助生物学指标，特别是鉴别p53 突变型。由于 TPV6 已成为药物设计的一个重要靶点21，因此 TPV6 单抗有可能成为 MMd 患者潜在生物学治疗的新靶点。总之，本文首次研究了 TPV6 蛋白在子宫内膜癌不同组织学类型及不同分子类型中表达差异，TPV6促进子宫内膜癌恶性进展，在低级别子宫内膜癌组织中高表达，TPV6 单抗有望成为子宫内膜癌潜在治疗的新靶点。本组患者由于随诊时间短，无法评估 T-PV6 在预后中的价值。另外本研究仅从蛋白水平发现TPV6 在子宫内膜癌组织中表达上调，有关其促进子宫内膜癌进展的分子机制，是下一步研究的目标。参考文献:1CHEN W，ZHENG，BAADE PD，et al Cancer statistics inChina，2015 J CA Cancer J Clin，2016，66(2):115 132 2WISSENBACH U，NIEMEYE BA TPV6J Handbook ofExperimental Pharmacology，2007，179:221 234 3STEWAT JM TPV6 as A Target for Cancer TherapyJ JCancer，2020，11(2):374 387 4牟田，王建六，鲍冬梅，等 钙通道 TPV6 基因在子宫内膜癌表达及其临床意义的初步研究J 现代妇产科进展，2010，19(12):897 900 5HOANG LN，KINLOCH MA，LEO JM，et al Interobserver agree-ment in endometrial carcinoma histotype diagnosis varies depen-ding on The Cancer Genome Atlas(TCGA)-based molecular sub-group J Am J Surg Pathol，2017，41(2):245 252 6HUVILA J，POS J，THOMPSON EF，et al Endometrial carcino-ma:molecular subtypes，precursors and the role of pathology inearly diagnosis J J Pathol，2021，253(4):355 365 7LEN-CASTILLO A，GILVAZQUEZ E，NOUT，et al Clinico-pathological and molecular characterisation ofmultipleclassifierendometrial carcinomas J J Pathol，2020，250(3):312 322 8VAN GOO MKC，HOENDEOP JGJ，VAN DE WIJST J TPchannels in calcium homeostasis:from hormonal control to struc-ture-function relationship of TPV5 and TPV6 J Biochim Bio-phys Acta Mol Cell es，2017，1864(6):883 893 9HOENDEOP JG，VENNEKENS，MLLE D，et al Functionand expression of the epithelial Ca(2+)channel family:com-parison of mammalian ECaC1 and 2J J Physiol，2001，537:747 761 10 HUBE SM Oncochannels J Cell Calcium，2013，53(4):241 255 11 WISSENBACH U，NIEMEYE BA，FIXEME T，et al Expressionof CaT-like，a novel calcium-selective channel，correlates with themalignancy of prostate cancer J J Biol Chem，2001，276(22):19461 19468964肿瘤基础与临床 2022 年 12 月第 35 卷第 6 期 12 BOLANZ KA，HEDIGE MA，LANDOWSKI CP The role of T-PV6 in breast carcinogenesisJ Mol Cancer Ther，2008，7(2):271 279 13 THEBAULT S，FLOUAKIS M，VANOVEBEGHE K，et alDifferential role of transient receptor potential channels in Ca2+entry and proliferation of prostate cancer epithelial cells J Canc-er es，2006，66(4)?:2038 2047 14 KOH HH，CHOI S，PAK CK，et al Down-regulation of TPV6 IsAssociated With Adverse Prognosis in Hepatocellular CarcinomaTreated With Curative esectionJ Cancer Genomics Pro-teomics，2022，19(2)?:259 269 15 SUN F，XIAO L，JANG XX，et al TPV6 is a prognostic markerin early-stage cervical squamous cell carcinomaJ Tumor Biol，2016，37(12):15743 15751 16 ZHANG SS，XIE X，WEN J，et al TPV6 plays a new role in pre-dicting survival of patients with esophageal squamous cell carcino-ma J Diagn Pathol，2016，11:14 17 DHENNIN-DUTHILLE I，GAUTIE M，FAOUZI M，et al Highexpression of transient receptor potential channels in human breastcancer epithelial cells and tissues:correlation with pathological pa-rameters J Cell Physiol Biochem，2011，28(5):813 822 18 FU S，HITE H，WELCH S，et al Firstin-human phase I study ofSO-C13，a TPV6 calcium channel inhibitor，in patients withadvanced solid tumorsJ Invest New Drugs，2017，35(3):324 333 19 WEBE K，EBEN G，UMP A，et al Gene structure and regu-lation of the murine epithelial calcium channels ECaC1 and 2 J Biochem Biophys es Commun，2001，289(5):1287 1294 20 LEE BM，LEE GS，JUNG EM，et al Uterine and placental expres-sion of TPV6 gene is regulated via progesterone receptor-or estro-gen receptor-mediated pathways during pregnancy in rodentsJ eprod Biol Endocrinol，2009，7(1):49 21 PETES AA，SIMPSON PT，BASSETT JJ，et al Calcium channelTPV6 as a potential therapeutic target in estrogen receptor-nega-tive breast cancer J Mol Cancer Ther，2012，11(10):2158 2168 22 BOLANZ KA，HEDIGE MA，LANDOWSKI CP The role of T-PV6 in breast carcinogenesisJ Mol Cancer Ther，2008，7(2):271 279(收稿日期:2022 09 12)红细胞分布宽度与血红蛋白/红细胞分布宽度比值在霍奇金淋巴瘤中的预后价值许多1，2，孙振昌1，2，于慧1，2，南飞飞1，2，葛菊蕊1，2，夏亚勤1，2，丁佳音1，2，付晓瑞1，2，张明智1，2(1 郑州大学第一附属医院肿瘤科，河南 郑州 450052;2 河南省淋巴瘤诊疗中心，河南 郑州 450052)摘要 目的探讨红细胞分布宽度(DW)、血红蛋白/红细胞分布宽度比值(H)与霍奇金淋巴瘤(HL)患者临床特征及预后的关系。方法回顾性分析 2014 年 1 月至 2021 年 1 月郑州大学第一附属医院收治的 292 例HL 患者的临床资料。采用受试者工作曲线(OC)确定 DW、H 的最佳临界值，比较分析 DW、H 与 HL 临床特征的关系，Kaplan-Meier 曲线和 long rank 检验绘制并比较不同水平 H 患者的总生存(OS)和疾病无进展生存(PFS)，单因素及多因素 Cox 比例风险回归模型分析影响 HL 预后的风险因素。结果OC 曲线确定 DW、H 的最佳临界值分别为 15 25、8 85。DW 15 25、H 8 85 与结外侵犯、高 IPS 评分、低血红蛋白、低淋巴细胞、低白蛋白等预后不良因素密切相关。Kaplan-Meier 生存曲线显示 DW 15 25、H 8 85 组的 OS、PFS 更差。多因素 Cox 比例风险回归模型分析结果显示，H 为 PFS 的独立预测因素。结论初诊时低 H 与 HL 患者不良预后密切相关。关键词 霍奇金淋巴瘤;肿瘤微环境;红细胞分布宽度;血红蛋白与红细胞分布宽度比值DOI:10 3969/j issn 1673-5412 2022 06 003 中图分类号 733 1 文献标识码 A 文章编号 1673 5412(2022)06 0470 08基金项目:国家自然科学基金资助项目(81970184)作者简介:许多(1997 )，女，硕士在读，主要从事淋巴瘤的基础与临床研究。E-mail:847457403 qq com通信作者:张明智(1962 )，男，博士，主任医师，主要从事淋巴瘤的基础与临床研究。E-mail:mingzhi_zhang126 com付晓瑞(1974 )，女，博士，主任医师，主要从事淋巴瘤的基础与临床研究。E-mail:zymfxr_2006126 com074JOUNAL OF BASIC AND CLINICAL ONCOLOGY Vol.35 No.6 Dec.2022