人教版基因工程和细胞工程复习.pptx

第一章基因工程和第一章基因工程和第二章细胞工程复习第二章细胞工程复习一、基因工程的工具及其操作程序一、基因工程的工具及其操作程序1 1基因工程的基本工具基因工程的基本工具限制酶限制酶DNADNA连接连接酶酶载体载体作用作用切割目的基切割目的基因和载体因和载体连接连接DNADNA片段，形成片段，形成重组重组DNADNA携带目的基携带目的基因进入受体因进入受体细胞细胞作用作用部位部位两核苷酸的脱氧核糖与磷两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键酸间形成的磷酸二酯键限制酶限制酶DNADNA连接酶连接酶载体载体作用作用特点特点(条件条件)(1)(1)识别特定识别特定的核苷酸序的核苷酸序列列(2)(2)在特定位在特定位点上切割点上切割(1)(1)E Ecolicoli DNADNA连接酶连接酶只连接黏性只连接黏性末端末端(2)T(2)T4 4DNADNA连连接酶连接黏接酶连接黏性末端和平性末端和平末端末端(1)(1)能在宿主细能在宿主细胞内稳定存在并胞内稳定存在并大量复制大量复制(2)(2)有多个限制有多个限制酶切割位点酶切割位点(3)(3)具有特殊的具有特殊的标记基因标记基因常用常用类型类型EcoREcoR限制限制酶酶SmaSma限制限制酶酶E Ecolicoli DNA DNA连接酶连接酶T T4 4DNADNA连接连接酶酶质粒、噬菌体、质粒、噬菌体、动植物病毒动植物病毒基因工程基因工程的工具的工具限制酶限制酶主要存在于原核生物中主要存在于原核生物中具有专一性具有专一性(识别序列识别序列)切开切开DNA分子的磷酸二酯键分子的磷酸二酯键DNA连连接酶接酶连接磷酸二酯键连接磷酸二酯键种类种类E.coliDNA连接酶连接酶T4 DNADNA连接酶连接酶运载运载工具工具具备的具备的条件条件结构简单结构简单,大小适中大小适中能在宿主细胞中自能在宿主细胞中自我复制并稳定存在我复制并稳定存在具一个至多个限制酶切位点具一个至多个限制酶切位点具标记基因具标记基因质粒、质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒噬菌体衍生物、动植物病毒“分子缝合针分子缝合针”DNA连接酶连接酶1、种类：、种类：2、作用部位：、作用部位：两类两类Ecoli DNA连接酶连接酶（黏）（黏）T4 DNA连接酶（黏连接酶（黏,平）平）磷酸二酯键磷酸二酯键 DNA连接酶连接酶可把黏性末端可把黏性末端之间的缝隙之间的缝隙“缝合缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。分子就形成了。基因表达载体的构建基因表达载体的构建核心核心基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：目的基因目的基因+启动子启动子+终止子终止子+标记基因标记基因启动子：一段有特殊结构的启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，片段，位于基因的首端，它是它是RNA聚合酶识别和结合聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基的部位，有了它才能驱动基因转录出因转录出mRNA，最终获得，最终获得所需要的蛋白质。所需要的蛋白质。终止子：也是一段有特殊结构的终止子：也是一段有特殊结构的DNADNA片段，位片段，位于基因的尾端，使转录在所需要的地主停止下来。于基因的尾端，使转录在所需要的地主停止下来。目的基因目的基因载体载体限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶限制性内切酶T4 DNA连接酶连接酶15C重组体重组体载体自连载体自连目的基因目的基因 自连自连目目的的基基因因与与运运载载体体结结合合基因表达载体的构建基因表达载体的构建核心核心质粒质粒DNADNA分子分子一个一个切口切口两个两个黏性末端黏性末端两个两个切口切口获得目的基因获得目的基因DNA DNA 连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种 限制酶限制酶将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞方法：方法：将目的基因导入植物细胞：将目的基因导入植物细胞：农杆菌转化法农杆菌转化法（双子叶植物和祼子植物）（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法基因枪法（单子叶植物）（单子叶植物）、花粉管通道法花粉管通道法将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞 显微注射法显微注射法将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞感受态细胞（感受态细胞（用用CaCa2+2+处理）；电激或热激处理）；电激或热激目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定分子水平检测：分子水平检测：检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因：了目的基因：方法方法DNADNA分子杂交分子杂交检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA：方法方法DNADNA分子杂交分子杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质：检测目的基因是否翻译成蛋白质：方法方法抗原抗原抗体杂交抗体杂交（如果有，表示目的基因已经进行了翻译）（如果有，表示目的基因已经进行了翻译）蛋白质工程与基因工程比较蛋白质工程与基因工程比较项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别过过程程预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计设计预期的蛋白质结构预期的蛋白质结构推推测应有的氨基酸序列测应有的氨基酸序列找到对应的脱氧核苷酸找到对应的脱氧核苷酸序列序列获取目的基因获取目的基因构建基因构建基因表达载体表达载体将目的基因导将目的基因导入受体细胞入受体细胞目的基因的目的基因的检测与鉴定检测与鉴定实实质质定向改造或生产人类所定向改造或生产人类所需蛋白质需蛋白质定向改造生物的遗传特性，定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类以获得人类所需的生物类型或生物产品型或生物产品结结果果生产自然界没有的蛋白生产自然界没有的蛋白质质一般是生产自然界已有的一般是生产自然界已有的蛋白质蛋白质联系联系蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白代基因工程。对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通过基因修饰或基因合成实现质，必须通过基因修饰或基因合成实现1.1.下列是对各种与基因工程有关的酶的叙述，不下列是对各种与基因工程有关的酶的叙述，不正确的是（正确的是（）A ADNADNA连接酶能将连接酶能将2 2个具有末端互补的个具有末端互补的DNADNA片段连接在一起片段连接在一起 B BPCRPCR反应体系中引物的作用是反应体系中引物的作用是DNADNA聚合酶聚合酶的作用的起点的作用的起点 C C限制性内切酶可识别一小段特殊的核苷酸限制性内切酶可识别一小段特殊的核苷酸序列，并在特定位点切割序列，并在特定位点切割 D D逆转录酶是以核糖核苷酸为原料，以逆转录酶是以核糖核苷酸为原料，以RNARNA为模板合成互补为模板合成互补DNADNAD D5 5/3 3/G GG GT TC C3 3/5 5/G GA AC CC C5 5/3 3/A AG G引物引物5 5/3 3/G GG G引物引物PCRPCR原理原理变性变性复性复性延伸延伸3.3.有关载体的叙述不正确的是有关载体的叙述不正确的是A A载体将目的基因带入到受体细胞中，自我载体将目的基因带入到受体细胞中，自我复制或整合到受体复制或整合到受体DNADNA上上 B B构建基因文库时，含不同插入片段的载体构建基因文库时，含不同插入片段的载体在受体菌中能够储存并克隆目的基因在受体菌中能够储存并克隆目的基因C C携带目的基因的载体不必有遗传标记基因携带目的基因的载体不必有遗传标记基因（基因表达载体不必有特殊的遗传标记基因）（基因表达载体不必有特殊的遗传标记基因）D D基因表达载体必须有基因表达载体必须有RNARNA聚合酶识别和结聚合酶识别和结合的特定部位合的特定部位C人教版人教版P12P12页页4.4.下列关于基因表达载体构建的相关下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是叙述，不正确的是()A A需要限制酶和需要限制酶和DNADNA连接酶连接酶B B必须在细胞内进行必须在细胞内进行C C抗生素抗性基因可作为标记基因抗生素抗性基因可作为标记基因DD启动子位于目的基因的首端启动子位于目的基因的首端B B5.5.近年来基因工程的发展非常迅猛，科学近年来基因工程的发展非常迅猛，科学家可以用家可以用DNADNA探针和外源基因导入的方法进行探针和外源基因导入的方法进行遗传病的诊断和治疗，下列做法中不正确的是遗传病的诊断和治疗，下列做法中不正确的是 （）A.A.用用DNADNA探针检测镰刀型细胞贫血症探针检测镰刀型细胞贫血症 B.B.用用DNADNA探针检测病毒性肝炎探针检测病毒性肝炎 C.C.用导入外源基因的方法治疗半乳糖血症用导入外源基因的方法治疗半乳糖血症 D.D.用基因替换的方法治疗用基因替换的方法治疗2121三体综合征三体综合征D6.6.下列关于大肠杆菌的描述，不正确下列关于大肠杆菌的描述，不正确的是的是A.A.属于原核生物属于原核生物 B.B.是基因工程常用的载体是基因工程常用的载体 C.C.代谢类型是异养兼性厌氧型代谢类型是异养兼性厌氧型 D.D.可在人体内增殖可在人体内增殖浙科版选一浙科版选一P19“P19“大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。可以侵袭肠粘膜并产生毒素。肠道杆菌。可以侵袭肠粘膜并产生毒素。是基因工程技术中被广泛采用的工具。是基因工程技术中被广泛采用的工具”B7.7.蛋白质工程的基本操作程序中正确的是蛋白质工程的基本操作程序中正确的是合成蛋白质分子结构合成蛋白质分子结构 DNADNA的脱氧核苷的脱氧核苷酸序列酸序列 mRNA mRNA 蛋白质预期功能蛋白质预期功能 推推测氨基酸序列测氨基酸序列 蛋白质的预期结构蛋白质的预期结构 A A B BC C D DC8.8.下列关于蛋白质工程的说法，正确的是下列关于蛋白质工程的说法，正确的是()A A蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作子直接进行操作B B蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子过的新型蛋白质分子C C对蛋白质的改造是通过直接改造相应的对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNAmRNA来实现的来实现的D D蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的过程是相同的B9.9.限制性内切酶能识别特定的限制性内切酶能识别特定的DNADNA序列并进序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核酸序列进行剪切。现以的核酸序列进行剪切。现以3 3种不同的内切种不同的内切酶（酶（X X、T T、Z Z）对）对6.2kb6.2kb大小的大小的DNADNA分子分子进行剪切，并用凝胶电泳分离各核酸片段，进行剪切，并用凝胶电泳分离各核酸片段，结果如图结果如图6 6所示，则由此可推断该片断的酶所示，则由此可推断该片断的酶切图谱是切图谱是 （）D（1）首先根据）首先根据Y的凝胶电泳结果推测的凝胶电泳结果推测Y的酶的酶切图谱，即下图。切图谱，即下图。（2）根据）根据Y+Z的凝胶电泳结果推测的凝胶电泳结果推测Z的酶切的酶切图谱。由于存在图谱。由于存在1.0片段片段,所以所以Z切割的是切割的是5.2片段；综合片段；综合Z和和Y+Z的凝胶电泳结果得知的凝胶电泳结果得知3.6片段消失，则可推测片段消失，则可推测Z的一个酶切位点，另的一个酶切位点，另一个无法确定。一个无法确定。（3）根据）根据X+Y的凝胶电泳结果及图的凝胶电泳结果及图1，可推测出，可推测出X将将5.2片段切割成片段切割成3.5和和1.7两个片段，两个片段，1.0片段则片段则被切割成被切割成0.3和和0.7两个片段如图两个片段如图3根据根据X的凝胶电泳结果，可推测出图的凝胶电泳结果，可推测出图3.1正确。正确。4）总结，至此，推测结果如图）总结，至此，推测结果如图4所示：所示：（5）根据）根据X的凝胶电泳结果可推测出的凝胶电泳结果可推测出X的第的第二个酶切位点有两种可能，如图二个酶切位点有两种可能，如图5根据根据X+Z的凝胶电泳结果，由于没有的凝胶电泳结果，由于没有1.6片段，片段，所以可推测出图所以可推测出图5.1正确。正确。（6）根据）根据Z和和X+Z的凝胶电泳结果，可推测的凝胶电泳结果，可推测出出Z的第二个酶切位点的位置。即的第二个酶切位点的位置。即1010下图是将人的生长激素基因导入细菌下图是将人的生长激素基因导入细菌B B细胞内制造细胞内制造“工工程菌程菌”的示意图。已知细菌的示意图。已知细菌B B细胞内不含质粒细胞内不含质粒A A，也不含，也不含质粒质粒A A上的基因。判断下列说法正确的是（上的基因。判断下列说法正确的是（）A.A.将重组质粒导入细菌将重组质粒导入细菌B B常用的方法是显微注射法常用的方法是显微注射法B.B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌基上，能生长的只是导入了重组质粒的细菌C.C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能生长的就是导入了质粒能生长的就是导入了质粒A A的细菌的细菌D.D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长素的培养基上生长 C11.11.科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象。在研科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象。在研究溶菌酶的过程中，得到了多种突变酶，测其酶究溶菌酶的过程中，得到了多种突变酶，测其酶50%50%发生发生变性时的温度（变性时的温度（TmTm），部分结果见下表：），部分结果见下表：酶酶 半胱氨酸（半胱氨酸（CysCys）的位置和数目）的位置和数目 二硫键二硫键数目数目 Tm/Tm/野生型野生型T4T4溶菌酶溶菌酶 Cys54,Cys97 Cys54,Cys97 无无 41.9 41.9 突变酶突变酶C C Cys21,Cys142 Cys21,Cys142 1 152.952.9突变酶突变酶F F Cys3,Cys9,Cys21,Cys97,Cys3,Cys9,Cys21,Cys97,Cys142,Cys164Cys142,Cys1643 365.5 65.5 溶菌酶热稳定性的提高，是通过改变溶菌酶热稳定性的提高，是通过改变和增加得以实现的。从和增加得以实现的。从热稳定性高的酶的氨基酸序列出发，利用方法获热稳定性高的酶的氨基酸序列出发，利用方法获得目的基因，通过基因工程的手段，可以生产自然界中不存在得目的基因，通过基因工程的手段，可以生产自然界中不存在的蛋白质。的蛋白质。（注：（注：CysCys上角的数字表示半胱氨酸在肽链中的位置）上角的数字表示半胱氨酸在肽链中的位置）半胱氨酸的位置和数目半胱氨酸的位置和数目二硫键的数目二硫键的数目人工合成（化学）人工合成（化学）离体的植物器官、组织或细胞离体的植物器官、组织或细胞脱分化脱分化愈伤组织愈伤组织再分化再分化芽、根芽、根植物体植物体植物组织培养的过程植物组织培养的过程融合的融合的原生质原生质体体ABAB再再生生壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A A植物细胞植物细胞B B原生质体原生质体B B原生质体原生质体A A杂种杂种细胞细胞AB去壁去壁去壁去壁人人工工诱诱导导杂杂种种植植株株融合完成的标志融合完成的标志植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术过程过程12.12.下列与细胞工程技术相关的表下列与细胞工程技术相关的表述中，不正确的是述中，不正确的是 A.A.植物组织培养技术的理论基础植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性是细胞的全能性B.B.植物体细胞杂交技术可以克服植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍常规的远缘杂交不亲和障碍C.C.动物细胞融合与植物原生质体动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同融合的基本原理相同D.D.动物细胞培养与植物组织培养动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同所用的培养基成分基本相同DD13.13.下列有关植物组织培养的叙述，正确的是下列有关植物组织培养的叙述，正确的是A A愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞细胞B B二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株到稳定遗传的植株C C用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子装可制成人工种子 D D植物耐盐突变体可通过添加适量植物耐盐突变体可通过添加适量NaClNaCl的的培养基培养筛选而获得培养基培养筛选而获得DD14.14.某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了查找污染原因设计了4 4个实验，实验条件除图示外其他个实验，实验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，据图得出结论不正确均相同。下列各图表示实验结果，据图得出结论不正确的是的是 （）A A污染主要是培养基灭菌时间短造成的污染主要是培养基灭菌时间短造成的B B污染主要来源于组织培养所用的离体组织污染主要来源于组织培养所用的离体组织C C调节培养基调节培养基pHpH不能解决污染问题不能解决污染问题DD调节培养温度不能解决污染问题调节培养温度不能解决污染问题A 1515下列关于植物组织培养的叙述中，正确的是（下列关于植物组织培养的叙述中，正确的是（）A.A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B.B.离体器官或组织细胞都须在光下才能形成愈伤组织离体器官或组织细胞都须在光下才能形成愈伤组织 C.C.同一植株不同细胞经培养获得的愈伤组织基因相同同一植株不同细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 D.D.生长素导致愈伤组织形成而细胞分裂素使细胞分化生长素导致愈伤组织形成而细胞分裂素使细胞分化16.16.下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是 A.A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压B.B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C.C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织D.D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同因相同AD17.17.有关原生质体的分有关原生质体的分离和培养的叙述不正确离和培养的叙述不正确的是的是A A将除菌后的叶片剪将除菌后的叶片剪碎放入反应液中碎放入反应液中B B反应液的浓度都比反应液的浓度都比细胞液浓度低细胞液浓度低C C反应液中应含有纤反应液中应含有纤维素酶和果胶酶维素酶和果胶酶DD可观察胞质环流检可观察胞质环流检测原生质体的活力测原生质体的活力B动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶(胶原蛋白酶）胶原蛋白酶）10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加培养液加培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体1818下列有关动植物细胞工程的叙述，不下列有关动植物细胞工程的叙述，不正确的是（正确的是（）A A动物细胞融合过程中可用灭活的病毒、动物细胞融合过程中可用灭活的病毒、PEGPEG等等B B动物细胞培养过程中，常用动物细胞培养过程中，常用幼龄动物幼龄动物为材料为材料C C植物组织培养过程中，需要用纤维素植物组织培养过程中，需要用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁酶、果胶酶去除细胞壁D D植物体细胞杂交过程中，需要用不同植物体细胞杂交过程中，需要用不同浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种细浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种细胞胞C19.19.下列关于动物细胞工程的叙述不正确的下列关于动物细胞工程的叙述不正确的是是 A A细胞克隆的基本要求是必须保证起点为单细胞克隆的基本要求是必须保证起点为单个或单一类型的细胞个或单一类型的细胞B B培养胚胎干细胞的关键是要有一种既能促培养胚胎干细胞的关键是要有一种既能促进细胞分裂又可抑制细胞分化的培养体系进细胞分裂又可抑制细胞分化的培养体系C C用二氧化碳培养箱培养动物细胞的目的是用二氧化碳培养箱培养动物细胞的目的是促进细胞呼吸促进细胞呼吸D D将若干个效应将若干个效应B B细胞与骨髓瘤细胞进行融细胞与骨髓瘤细胞进行融合后不一定得到杂交瘤细胞合后不一定得到杂交瘤细胞C 20.20.回答下列有关动物细胞培养的问题回答下列有关动物细胞培养的问题在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面生长到细胞表面 时，细胞会停止时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的分裂增殖，这种现象称为细胞的 。此时，瓶壁上形成的细胞层数是此时，瓶壁上形成的细胞层数是 。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是用酶处理，可用的酶是 。随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现分裂停止，进而出现 现象；但现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成会因遗传物质发生改变而变成 细胞，细胞，该种细胞的黏着性该种细胞的黏着性 ，细胞膜表面蛋，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量白质（糖蛋白）的量 。相互接触相互接触接触抑制接触抑制单层（或一层）单层（或一层）胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低减少减少现用某种大分子染料，对细胞进行染色现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是色，原因是 检查某种毒物是否能改变细胞染色体的检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到数目，最好选用细胞分裂到 期的细期的细胞用显微镜进行观察。胞用显微镜进行观察。由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大（或由于死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色）分子染料能够进入死细胞内而着色）。中中在细胞培养过程中，通常在在细胞培养过程中，通常在 条件下保存细胞。因为在这种条条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中件下，细胞中 的活性降低，的活性降低，细胞细胞 的速率降低。的速率降低。给患者移植经细胞培养形成的皮给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当是因为机体把移植的皮肤组织当作作 进行攻击。进行攻击。冷冻（或超低温、液氮）冷冻（或超低温、液氮）酶酶新陈代谢新陈代谢抗原抗原在细胞培养过程中，通常在在细胞培养过程中，通常在 冷冷冻（或超低温、液氮）冻（或超低温、液氮）条件下保条件下保存细胞。因为在这种条件下，细存细胞。因为在这种条件下，细胞中胞中 酶酶 的活性降低，细胞的活性降低，细胞 新陈新陈代谢代谢 的速率降低。的速率降低。给患者移植经细胞培养形成的皮给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当是因为机体把移植的皮肤组织当作作 抗原抗原 进行攻击。进行攻击。21.21.为扩大可耕地面积，增加为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。培育出了耐盐水稻新品系。获得耐盐基因后，构建重组获得耐盐基因后，构建重组DNADNA分子分子所用的限制性内切酶作用于图中的所用的限制性内切酶作用于图中的 处，处，DNADNA连连接酶作用于接酶作用于 处（填处（填“a”a”或或“b”b”）。aa将重组将重组DNADNA分子导入水稻受体细胞分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和的常用方法有农杆菌转化法和 法。法。由导入目的基因的水稻细胞培养成由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用植株需要利用 技术，该技技术，该技术的核心是术的核心是 和和 。基因枪法（花粉管通道法）基因枪法（花粉管通道法）植物组织培养植物组织培养脱分化脱分化再分化再分化为了确定耐盐转基因水稻是否培为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记育成功，既要用放射性同位素标记的的 做探针进行分子杂交检做探针进行分子杂交检测，又要用测，又要用 方法从个体水方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。平鉴定水稻植株的耐盐性。耐盐基因（耐盐基因（目的基因）目的基因）一定浓度的盐水浇灌（移植到盐碱地中）一定浓度的盐水浇灌（移植到盐碱地中）22.22.动物器官的体外培养技术对于研动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。下图是一个新生小鼠的意义重大。下图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图，请回答肝脏小块培养装置示意图，请回答下列问题。下列问题。(1)(1)肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞_。(2)(2)气室中充入气室中充入5%CO5%CO2 2气体的主要作用是气体的主要作用是_。(3)(3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长，但要注意选择抗生素的但要注意选择抗生素的_，以保证抗生素对肝脏无害。，以保证抗生素对肝脏无害。吸收氧气和营养物质、排出代谢废物吸收氧气和营养物质、排出代谢废物维持培养液适宜的维持培养液适宜的pHpH种类和剂量种类和剂量(4)(4)有机物有机物X X有毒性，可诱发染色体断裂。利有毒性，可诱发染色体断裂。利用上图所示装置和提供的下列材料用具，探用上图所示装置和提供的下列材料用具，探究肝脏小块对有机物究肝脏小块对有机物X X是否具有解毒作用。是否具有解毒作用。材料用具：材料用具：肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养肝脏小块，外周血淋巴细胞，淋巴细胞培养液，植物凝集素液，植物凝集素(刺激淋巴细胞分裂刺激淋巴细胞分裂)；显微；显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管；吉姆镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，滴管；吉姆萨染液萨染液(使染色体着色使染色体着色)，有机物，有机物X X溶液等。溶液等。实验过程：实验过程：在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养在淋巴细胞培养液中加入植物凝集素培养淋巴细胞，取淋巴细胞，取4 4等份，备用。等份，备用。利用甲、乙、丙、丁利用甲、乙、丙、丁4 4组上图所示装置，按组上图所示装置，按下表步骤操作下表步骤操作(“”(“”表示已完成的步骤表示已完成的步骤)。上表中还需进行的操作是上表中还需进行的操作是_。甲甲乙乙丙丙丁丁步骤一：加入肝脏培养液步骤一：加入肝脏培养液步骤二：加入有机物步骤二：加入有机物X X溶溶液液步骤三：放置肝脏小块步骤三：放置肝脏小块向乙向乙(或丁或丁)组装置中放置肝脏小块组装置中放置肝脏小块培养一段时间后，取培养一段时间后，取4 4组装置中的等组装置中的等量培养液，分别添加到量培养液，分别添加到4 4份备用的淋巴份备用的淋巴细胞培养液中继续培养。细胞培养液中继续培养。一段时间后取淋巴细胞分别染色、制一段时间后取淋巴细胞分别染色、制片。在显微镜下观察片。在显微镜下观察_，并对比分析。，并对比分析。若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋若丙组淋巴细胞出现异常，而甲组的淋巴细胞正常，则说明巴细胞正常，则说明_。染色体形态和数量染色体形态和数量肝脏小块对有机物肝脏小块对有机物X X具有解毒作用具有解毒作用