复方天麻制剂镇痛的中枢和外周神经递质作用机理实验研究.docx

复方天麻制剂镇痛的中枢和外周神经递质作用机理实验研究
【摘要】 　　目的探讨复方天麻制剂镇痛的中枢与外周神经作用机制。方法以福氏完全佐剂制作慢性疼痛动物模型，采用高效液相电化学检测法与高效液相荧光检测法检测复方天麻制剂对中枢及外周神经递质的影响。结果复方天麻制剂使全脑5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素含量明显上升；使血清5-HTP，5-HIAA含量降低。结论复方天麻制剂通过升高脑组织神经递质含量和降低血清神经递质含量达到镇痛作用。
【关键词】 复方天麻制剂 神经递质 镇痛 小鼠
　　Abstract：ObjectiveTo discuss the analgesic function mechanism of Tian Ma Preparation on central and peripheral　on FCA induced pain model, the effect of Tian Ma Preparation on central and peripheral nurotransmitters was detected by high-performance liquid chromatography with electrochemical detector and high-performance liquid chromatography with fluorescence　Ma Preparation markedly increased 5-HT,5-HIAA and NE content in brain, decreased 5-HTP and 5-HIAA content in　Ma Preparation had analgesic function by markedly increasing content of 5-HT,5-HIAA and NE in brain, decreasing content of 5-HTP and 5-HIAA in serum.
　　Key words：Tianma preparation; Neurotransmitter; Mice; Analgesic

　　复方天麻制剂是古方研制的现代制剂，原方名为“芎天麻丸”。出自元代《御药院方》［1］。由天麻、川芎两味中药组成。方中药物有清利头目、消风化痰、宽胃利膈作用。古方主要用于心胸烦闷，旋晕欲倒，颈项紧急，肩背拘倦，神昏多睡，肢节烦痛，皮肤瘙痒，偏正头痛，鼻塞声重，面目虚浮等症。

　　现代药理研究表明天麻、川芎各自成分有镇痛作用。我们提取天麻、川芎镇痛有效成分，制成复方天麻制剂，并对此制剂对中枢及血清神经递质影响进行了实验研究。现将实验结果报告如下。
　　1 材料1 动物KM小鼠，雌雄各半，体重g，由中国军事医学科学院动物研究中心提供-2002-001）。2 药物 造模药物 福氏完全佐剂由北京邦定生物制品有限公司提供。 受试药物 复方天麻制剂由贵阳中医学院制剂教研室提供。每克合原生药。用%CMC配成混悬液。 阳性药 速效枣仁安神胶囊由重庆中药总厂提供，用%CMC配成混悬液。 试剂 5－羟色胺、5－羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色氨酸(5-HTP)均购自Sigma公司,其它化学试剂均为国产分析纯。3 仪器 LC-4C高效液相电化学检测器、Beckman低温离心机、Millipore纯水仪、AE160电子天平。岛津LC-6A型高效液相色谱仪(日本), TGL-16B高速台式离心机, GL-88B旋涡混合器。
　　2 方法与结果
　　对中枢吲哚类及儿茶酚胺类神经递质及其代谢产物的影响
　　分组、造模、给药将小鼠48只，随机分为6组,每组8只,即正常对照组，模型组，复方天麻制剂高、中、低剂量组，速效枣仁安神胶囊组。参照文献方法［2］除正常对照组外,其余各组动物于实验前1d,在小鼠右后足垫部向踝关节方向注入 ml,制作疼痛动物模型。正常对照组、模型组予% CMC 10 ml·kg－1·d－1灌胃,复方天麻制剂高、中、低剂量组分别予复方天麻制剂，，·kg－1·d－1灌胃,速效枣仁安神胶囊组予·kg－1·d－1灌胃,连续给药3 d。
　　样品制备末次给药后1 h，各组动物断颈处死，快速取出全脑组织，除去血液，滤纸拭干称重，吸取冷的匀浆介质醋酸、 mM半胱氨酸、 mM草酸1 ml混合液,倒入玻璃匀浆管中,充分磨碎使组织匀浆化(约6～8 min)。之后将研磨均匀的组织匀浆液倒入F导分管中,在4℃,以12 000 r/min离心20 min,吸取适量上清液进行各种测定。
　　计算公式

　　脑组织神经递质含量=
　　与正常对照组比较，1),2),3);与模型组比较,4),5);与高剂量组比较,6),7)；n=8

　　表1中提示模型组小鼠全脑5-HT、5-HIAA、NE含量比正常组低(),DA含量与正常组相比无差异。经复方天麻制剂治疗后5-HT、5-HIAA、NE含量明显上升,与正常组比较无差异,与模型组比较具有显着性差异。各治疗组DA含量与模型组、正常组比较无差异。
　　对血清吲哚类神经递质及其代谢产物的影响
　　分组、造模、给药 同“”项下。
　　样品制备 末次给药后1 h,摘除小鼠左侧眼球取血,参照文献［3］方法制备血清，取上清液进样。
　　测定条件 参照文献［4］方法进行检测。
　　计算公式

　　血清神经递质含量(μmol/L)=标准浓度×标准进样量×两标准比例×样本峰高×2标准峰高×样本进样量
　　结果 见表2。数据以±s表示,各组间均数比较采用t检验。
　　表2 小鼠血清5-HTP、5-HIAA含量
　　与正常对照组比较，1),2),3);与模型组比较,4),5),6);与高剂量组比较,7)；n=8

　　表2中提示模型组小鼠血清5-HTP、5-HIAA含量显着比正常对照组高。经复方天麻制剂治疗后5-HTP、5-HIAA含量显着比模型组低,与正常对照组比差异不明显。
　　3 讨论

　　现代医学认为DA、NE和5-HT既是神经介质,又能直接致痛,在疼痛过程中参与了致痛和镇痛两方面的作用。在外周它们均是致痛因子,通过第二信使(环核苷酸、钙离子)作用于局部和旁分泌,刺激感觉神经末梢而产生疼痛［5］。各种炎性介质包括H+、P物质、5-羟色胺(5-HT)、缓激肽(BK)、前列腺素(PG)以及三磷酸腺苷(ATP)等,当组织损伤或炎症时被释放出来［6］, 单胺类递质是体内重要的生物活性物质,具有广泛的生理作用。脑与脊髓内的5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)是参与镇痛的重要神经递质。

　　血中色氨酸经色氨酸羟化酶(TPH)催化在5位羟化成5-羟色胺酸(5-HTP),然后再经5-羟色氨酸脱羧酶(5-HTP-DC)脱羧成5-HT。合成的5-HT代谢最主要途径是生成5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)。中枢系统中5-HIAA浓度能反应脑内5-HT能神经活动。5-HT在外周和中枢神经系统均有分布。

　　儿茶酚胺在疼痛中发挥着重要的作用。去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、肾上腺素(E)3种胺类神经递质统称为儿茶酚胺。研究证实脑内NE主要通过α1受体拮抗吗啡镇痛,吗啡镇痛时脊髓背半侧代谢产物增加,说明此时NE下行系统功能极为活跃。脑室注射DA或DA激动剂对基础痛阈无明显影响,但对吗啡镇痛可产生一定对抗作用。脑内DA系统机能对镇痛的影响有无关、对抗、协同3种意见。

　　本实验研究结果显示模型组小鼠全脑5-HT、5-HIAA、NE含量显着性比正常组低,DA含量与正常组比较无差异,经复方天麻制剂治疗后5-HT、5-HIAA、NE含量明显上升,与正常组比较无差异,与模型组比较具有显着性差异,各治疗组DA含量与模型组、正常组比无差异。表明5-HT、5-HIAA、NE升高具有镇痛作用。DA含量无变化,表明佐剂制作的疼痛动物模型可能对小鼠全脑DA含量无影响,DA不参与复方天麻制剂镇痛过程。

　　5-HT是一种致痛物质,将微量的5-HT植入人体前臂内侧的皮质内,可致剧痛。目前已有证据证实5-HT致痛作用与其受体作用有关,它能激活外周的5-HT受体，使这些纤维去极化,从而传送伤害感受。

　　本实验研究结果显示模型组小鼠血清中5-HTP、5-HIAA含量与正常对照组对比显着性升高,经复方天麻制剂治疗后血清5-HTP、5-HIAA含量与模型组对比显着性降低。说明血清5-HTP、5-HIAA降低具有镇痛作用。

　　综上所述,复方天麻制剂镇痛的作用机理可能为通过抑制血清中5-HT释放,抑制外周致痛物质释放,减少SP,抑制5-HT外周受体, 代谢产物，减少致痛物质受体去极化,增加抗痛物质受体去极化,减少痛信息传入冲动,影响某些与疼痛有关核团的神经元，激活镇痛物质，对伤害性信息进行调整。进一步机理尚需深入研究以证实。
【参考文献】
　　［1］ 元·许国桢.御药院方［M］.北京:中国古籍出版社,
　　［2］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社,
　　［3］ 唐爱国,王继贵,周赛琴,等.高效液相色谱-荧光检测法测定血清5-羟色胺［J］.湖南医科大学学报，1996，21(5):419.
　　［4］ 张利平,杨永彰,刘厚钰,等.高效液相色谱法测定血浆中吲哚类神经递质［J］.中华医学检验杂志，1987，10(6):321.
　　［5］ 乔治·阿德尔曼.神经科学百科全书［M］.上海:上海科学技术出版社,1992:310.
　　［6］ Hu W P,Guan B C,Ru L Q,et　of 5-HT3 receptor function by the activation of coexistent 5-HT2 receptor in trigeminal ganglion neurons of rats［J］.Neuropharmacol,2004,47:833