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MALT1及Bcl2在MALT和DLBCL中的表达及意义【摘要】 目的： 了解MALT1和Bcl2表达对黏膜相关组织结外边缘区B细胞淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤的影响及肿瘤中两种蛋白表达的相互关系。方法： 收集MALT和DLBCL 64例，常规HE及免疫组织化学染色，观察两种淋巴瘤的组织形态学特点，检查肿瘤细胞的免疫表型和MALT1、Bcl2的表达，收集临床病理资料并随访，对所有资料进行统计学分析。结果： MALT1和Bcl2两种蛋白表达在MALT和DLBCL差异无显着性，较晚临床分期病例的表达明显多于较早分期病例，有淋巴结累及病例的表达明显多于无累及病例，肿瘤中两种蛋白的表达有明显的相关关系，生存状况MALT1阳性病例较阴性病例差、Bcl2阳性病例较阴性病例差，但无统计学意义。结论： Bcl2在MALT和DLBCL的表达可能与MALT1引起的NFB异常活化有关，两种蛋白的表达对MALT和DLBCL的临床病理特征有明显影响。【关键词】 淋巴瘤，黏膜相关淋巴样组织； 黏膜相关淋巴瘤易位基因1； Bcl2Abstract Objective: To investigate the expression of MALT1 and Bcl2 in mucosaassociated lymphoid tissue (MALT) and diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) as well as their effects on these lymphomas, and to understand the correlation between the expression of the two proteins in these lymphomas. Methods: Specimens of 64 cases of MALToma and DLBCL were collected. The morphology of the lymphomas were observed with HE stained sections. The immunophenotypes, such as CD20, CD3, CD5, CD10, and CyclinD1, were examined with immunohistochemistry staining method. The clinical and pathological data were collected. Some patients were followed up. Statistical analysis was done. Results: There was no statistical difference of expression between the two proteins in MALToma and DLBCL. The expressions were higher in cases with latter clinical stages than in those with earlier stages, and in cases with involvement of lymph node than in those without. There were distinct correlations between expressions of MALT1 and Bcl2 in these lymphomas. The survival status was worse in MALT1postive cases than in MALT1negative cases, and in Bcl2positive cases than in Bcl2negative cases, although the difference was not statistically significant. Conclusions: The expression of Bcl2 may associated with abnormal activation of NFB resulted from MALT1 in MALToma and DLBCL. The expression of MALT1 and Bcl2 affects the clinicopathological features of the two lymphomas.Key wordslymphoma, mucosaassociated lymphoid tissue; MALT1; Bcl2 在众多的B细胞性非霍奇金淋巴瘤类型中，黏膜相关组织结外边缘区B细胞淋巴瘤及弥漫大B细胞淋巴瘤是最常见的类型，这两类常见的B细胞淋巴瘤发生的分子机制、临床治疗的特异性靶点以及预后判断相关因子的发现是当前普遍关注的问题。MALT1基因位于18q21，是一个受体介导的NFkB传导通路的激活成分1，可能参与了MALT的发生发展机制。Bcl2是一种重要的凋亡抑制基因，近来发现它在多种B细胞淋巴瘤中都有异常表达。目前，Bcl2对于淋巴瘤发生发展的影响已有不少报道，但MALT1对B细胞淋巴瘤的影响尚未见到报道，这两种蛋白在B细胞淋巴瘤中表达的相互关系也未见到报道。据此，收集了一组MALT和DLBCL病例，检测肿瘤中MALT1和Bcl2蛋白的表达，了解在B细胞淋巴瘤中两种蛋白表达的关系，以及其表达对淋巴瘤临床过程和预后的影响。1 资料和方法病例收集 收集1999年5月2007年3月诊断的B细胞非霍奇金淋巴瘤，通过HE切片观察及肿瘤细胞免疫表型检测，按照2008年WHO淋巴造血组织肿瘤分类进行病例筛选，淋巴瘤的临床分期参照修正的Ann arbor 分期进行。 方法组织化学染色方法按照常规HE染色病理操作规范进行。免疫组织化学梁色采用SP三步法，并用枸橼酸盐缓冲液进行抗原热修复。标记CD20,CD3,CD5,CD10, CyclinD1,Bcl2和Paracaspase。上述抗体除cyclinD1外均为单抗，除Paracaspase外均为DAKO产品。CyclinD1为多抗，稀释度为175，Paracaspase购自imgenex公司，稀释度1700，其余抗体稀释度均为1150，以PBS代替一抗作空白对照。阳性结果判定Bcl2及Paracaspase阳性信号位于细胞浆，cyclinD1阳性信号位于细胞核，其余抗体阳性信号均位于细胞膜，根据着色深浅和表达细胞数综合判断。根据阳性信号着色情况评分：不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分；根据阳性细胞数评分：25%以下为1分，25%50%为2分，50%75%为3分，大于75%为4分。以两种评分的乘积进行判断：0分为阴性，12分为弱阳性，35分为阳性，68分为强阳性。随访主要采用电话随访和信访，以病人初次住院后为随访开始时间，以2009年7月2日为随访结束时间。统计学处理 所有实验数据均采用SPSS软件进行统计学分析，计数资料采用2检验，等级资料采用Spearman秩相关分析，生存分析采用对数秩检验，采用KaplanMeier方法绘制生存曲线，以为差异有显着性。 2 结果临床病理资料 具有完整临床资料被纳入研究的B细胞淋巴瘤共64例，其中DLBCL 43例，MALT淋巴瘤21例；男38例，女26例；发病年龄1681岁，中位发病年龄48岁；明确临床分期者55例，包括期8例，期13例，期20例，14例；有淋巴结累及者41例，无淋巴结累及者16例。 组织学特点和免疫表型 MALT淋巴瘤：中心细胞样或单核细胞样的肿瘤细胞弥漫分布，可见淋巴上皮病损和滤泡殖民地化，部分病例细胞内可见Dutchers小体,并见中心母细胞样或免疫母细胞样的肿瘤细胞散在分布；肿瘤细胞免疫表型： CD20阳性，CD3、CD5、CD10和CyclinD1均为阴性。DLBCL：一致的中心母细胞样或免疫母细胞样的大细胞弥漫分布，肿瘤细胞核圆形或椭圆型，染色质呈泡状，核膜厚，可见23个近核膜的小核仁或中位核仁，细胞浆嗜双色性或嗜碱，部分病例可见残留的低恶性MALT淋巴瘤病变；肿瘤细胞免疫表型：CD20阳性，CD5和CD10部分病例阳性，CD3和CyclinD1均为阴性。Bcl2和Paracaspase表达 Paracaspase和Bcl2在两种B细胞淋巴瘤中均有不同程度的表达，64例中，Bcl2阳性42例，其中MALT淋巴瘤15例、DLBCL 27例；Paracaspase阳性46例，其中MALT淋巴瘤15例，DLBCL 31例。Paracaspase和Bcl2的表达及其与淋巴瘤临床病理特征的关系见表1, Spearman秩相关分析Bcl2和MALT1蛋白表达的关系，。表1 Bcl2、MALT1蛋白的表达与B细胞淋巴瘤 随访分析 64例中，28例病人被随访，获访率44%,随访时间2005年4月2009年7月，平均随访时间51月。28例获访病人中，存活15例，存活时间1037月;两种淋巴瘤的中位存活时间:DLBCL 21月，MALT淋巴瘤26月；死亡13例，总生存率%。13例死亡病例中，11例死于肿瘤，2例死于化疗反应，8例为DLBCL、5例为MALT淋巴瘤患者。28例中17例有治疗资料，其中13例接受了化疗，10例为术后加化疗，1例采取抗生素治疗,3例未做治疗。根据淋巴瘤类型Bcl2和MALT1表达情况绘制生存曲线，见图35。3 讨论 惰性的MALT淋巴瘤具有多种遗传学改变。研究认为，染色体易位t是MALT淋巴瘤相对特异和常见的遗传学改变，t也在MALT淋巴瘤中被发现。这两种染色体易位都有MALT1基因的参与，可见，MALT1基因是MALT淋巴瘤中较活跃的基因。有研究表明，MALT1基因编码的蛋白与Bcl10和CARMA1(膜相关鸟氨酸激酶蛋白1)结合形成三联复合物，通过泛素化和磷酸化使IKK复合物活化，从而使NFB活化46，这可能是黏膜相关淋巴瘤中MALT1异常表达参与淋巴瘤发生发展的机制。NFB是重要的核转录因子，对多种参与细胞凋亡和增殖的基因有调控作用，凋亡抑制基因Bcl2就受到NFB基因的调控。Bcl2 基因是从滤泡性淋巴瘤中分离出来的原癌基因,由染色体t(1418)(q32q21)易位而被激活，导致肿瘤细胞Bcl2过度表达，故将其作为滤泡性淋巴瘤特异性的标记。近来发现，Bcl2 可以在滤泡性淋巴瘤以外的多种惰性和侵袭性B细胞淋巴瘤中表达。徐卫等研究发现，Bcl2表达与淋巴瘤的恶性程度呈负相关，提示低度恶性NHL的发病机制与高度恶性NHL有所不同。Bcl2高表达导致异常细胞凋亡受抑制，因细胞存活期延长而过度累积可能是低度恶性NHL 的主要发病机制，而高度恶性NHL发病机制可能与细胞增殖活性增高有关。Bcl2高表达常导致肿瘤细胞对各种化疗药物耐药，化疗反应差；而高度恶性NHL却对化疗药物非常敏感。蒋会勇等也证实，Bcl2蛋白阳性表达时肿瘤细胞凋亡受抑制，且对化疗不敏感，患者表现为病情进展快、分期晚、对治疗反应差及生存期短，是DLBCL具代表性的预后因子。还有报道认为，Bc12高表达，可作为DLBCL独立的不良预后指标。 Bcl2在多种B细胞淋巴瘤中的表达机制尚不清楚，本课题组发现，在多种B细胞淋巴瘤中都能检测到MALT1的RNA，而且其RNA的表达与B细胞淋巴瘤的临床过程和预后有一定的关系。基于MALT1在NFB异常活化中的作用，推测Bcl2 在多种B细胞淋巴瘤中的表达可能与MALT基因的活化有关。因此，检测MALT和DLBCL病例的MALT1和Bcl2蛋白，了解两种蛋白在B细胞淋巴瘤中的相关关系，同时了解这两种蛋白的表达对两种B细胞淋巴瘤临床过程和预后的影响。研究发现，MALT1和Bcl2在两种淋巴瘤中都有不同程度的表达，在MALT淋巴瘤中的表达低于DLBCL病例中的表达，但无统计学差异；两种蛋白在临床分期较晚病例中的表达明显高于分期较早的病例，在有淋巴结累及的病例中的表达明显高于无淋巴结累及的病例，差异有统计学意义。Bcl2在不同恶性程度B细胞淋巴瘤中的表达与文献报道不尽一致，对B细胞淋巴瘤临床过程的影响与文献报道相似，MALT1蛋白表达对B细胞淋巴瘤的影响与以前发现的MALT1基因RNA表达对淋巴瘤的影响一致。Spearman秩相关分析发现，B细胞淋巴瘤病例中MALT1和Bcl2表达明显相关，表明在MALT和DLBCL中Bcl2表达可能与MALT1活化NFB有关，两者对MALT淋巴瘤和DLBCL的临床过程的影响可能有协同作用。生存分析发现，MALT淋巴瘤病例的生存状况较DLBCL病例好、Bcl2阳性病例的生存状况差于阴性病例、MALT1阳性病例的生存状况较阴性病例差，但这种差异均无统计学意义，这可能与研究病例获访率偏低和随访时间短有关系，有待于延长随访时间、扩大范围做进一步的研究。【参考文献】 1Lucas PC, Yonezumi M, Inohara N, et al. 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