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心脑康胶囊质量标准的研究

　　【关键词】 心脑康胶囊,；薄层色谱；高效液相色谱
　　摘要：目的制定心脑康胶囊的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对处方中的丹参、枸杞子、甘草、川芎、牛膝进行定性鉴别，采用高效液相色谱对赤芍的芍药苷进行含量测定。结果芍药苷在 5~ μg范围线性关系良好，r= 9,平均回收率为%，RSD为%。结论该方法能准确可靠地进行定性定量检测及有效地控制制剂的质量。
　　关键词：心脑康胶囊 ； 薄层色谱； 高效液相色谱
　　Quality Standard for Xinnaokang Capsule by HPLC
　　Abstract：ObjectiveTo establish the method for quality control of Xinnaokang Capsules. MethodsSalvia miltiorrhiza Bge., Lycium barbarum L., Glycyrrhiza uralensis Fisch., Ligusticum chuanxiong Hort., Achyranthes bidentata Bl. were identified by TLC , and the content of paeoniflorin in Radix Paeoniae Rubra was determined by HPLC .ResultsPaeoniflorin showed a good linear relationship at a range of　5~ μg, r=　9. The average recovery was % , and RSD was % . ConclusionThe method is accurate and reliable , and can control the quality of this preparation effectively .
　　Key words：Xinnaokang Capsules ； TLC； HPLC

　　心脑康胶囊为部颁中药第12册收载品种，全方由丹参、枸杞子、甘草、川芎、牛膝等16味药组成，具有活血化淤、通窍止痛、扩张血管、增加冠状动脉血流量之功效。用于冠心病、心绞痛及脑动脉硬化症。为了有效控制产品内在质量，采用HPLC法对其主要药味赤芍中的有效成分芍药苷进行含量测定，并建立了丹参、枸杞子、甘草、川芎等的薄层色谱鉴别。
　　1 仪器与试药
　　点样毛细管； 硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板 ；高效液相色谱仪：LC10ATvp泵(日本岛津)、SPD10Avp紫外检测器(日本岛津)、CTO10Asvp柱温箱(日本岛津)；Shimadzu Libror AEL 40SM天平。乙腈；水；磷酸；芍药苷对照品；样品三批；原儿茶醛对照品；甘草次酸对照品；齐墩果酸对照品；川芎对照药材；牛膝对照药材。其余试剂均为分析纯。
　　2 方法
　　薄层鉴别实验
　　丹参的TLC鉴别研究供试品溶液的制备：取本品内容物2 g，加1%盐酸25 ml，搅拌使溶解，离心，分取上清液，加乙醚提取2次，25 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。阴性溶液的制备：取除丹参以外的其他药材，按制备工艺制成丹参阴性样品。取丹参阴性样品2 g，按供试品溶液制备方法制成丹参阴性溶液。丹参的TLC鉴别：吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。斑点清晰，阴性对照无干扰。结果见图1。原儿茶醛对照品 2，3，4.样品5.缺丹参样品
　　图1 丹参TLC鉴别图 枸杞子对照药材 2，3，4.样品5.缺枸杞子样品
　　图2 枸杞子TLC鉴别图
　　枸杞子的TLC鉴别研究供试溶液的制备：取本品内容物2 g，加水20 ml，搅拌使溶解，离心，分取上清液，用醋酸乙酯提取2次，20 ml/次。合并醋酸乙酯液，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。 对照药材溶液的制备： 取枸杞子对照药材 g，加水30 ml，煮沸15 min，滤过，滤液用醋酸乙酯提取2次，20 ml/次。合并醋酸乙酯液，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml溶解，作为对照药材溶液。阴性溶液的制备：取除枸杞子以外的其他药材，按制备工艺制成枸杞子阴性样品。取枸杞子阴性样品2 g，按供试品溶液制备方法制成枸杞子阴性溶液。枸杞子的TLC鉴别：吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚醋酸乙酯冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。供试品色谱与对照药材色谱对应整齐，斑点分离清晰，阴性对照无干扰。结果见图2。
　　甘草的TLC鉴别研究供试液的制备：取本品内容物2 g，加氯仿30 ml，盐酸3 ml，超声处理1 h，滤过，滤液用水30 ml洗涤，弃去水液，氯仿液加入适量无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取甘草次酸对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。阴性溶液的制备：取除甘草以外的其他药材，按制备工艺制成甘草阴性样品。取甘草阴性样品2 g，按供试品溶液制备方法制成甘草阴性溶液。甘草的TLC鉴别：吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚苯醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下烘烤10 min，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。斑点分离清晰，阴性对照无干扰。结果见图3。
　　川芎的TLC鉴别研究供试液的制备：取本品内容物1 g，加乙醚20 ml，超声处理10 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：另取川芎对照药材1 g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。阴性溶液的制备：取除川芎以外的其他药材，按制备工艺制成川芎阴性样品。取川芎阴性样品1 g，按供试品溶液制备方法制成川芎阴性溶液。 川芎的TLC鉴别：吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。斑点分离圆正、清晰，阴性对照无干扰。结果见图4。甘草次酸对照品 2，3，4.样品5.缺甘草样品
　　图3 甘草TLC鉴别图 川芎对照药材 2，3，4.样品5.缺川芎样品
　　图4 川芎TLC鉴别图
　　牛膝的TLC鉴别研究供试液的制备：取本品内容物2 g，加乙醇20 ml，回流提取40 min，滤过，滤液加入盐酸2 ml，回流提取1 h后浓缩至约5 ml，加水10 ml，用石油醚提取2次，20 ml/次，合并石油醚液，蒸干，残渣加乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：取牛膝对照药材2 g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。对照品溶液的制备：再取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。阴性溶液的制备：取除牛膝以外的其他药材，按制备工艺制成牛膝阴性样品。取牛膝阴性样品2 g，按供试品溶液制备方法制成牛膝阴性溶液。牛膝的TLC鉴别：吸取上述4种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃下显色至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。供试品色谱与对照品和对照药材色谱对应整齐，斑点分离清晰，阴性对照无干扰。结果见图5。齐墩果酸对照品 2.牛膝对照药材 3，4，5 样品 6.缺牛膝样品
　　图5 牛膝TLC鉴别图
　　含量测定
　　色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18(5μm，250 mm× mm，迪马)；流动相为乙腈水磷酸；流速1 ml/min；柱温35℃；检测波长230 nm。
　　溶液制备 对照品溶液制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含60 μg的溶液，即得。供试品溶液制备：取装量差异项下本品内容物1 g，精密称定，加甲醇25 ml，称重，超声处理30 min，取出，放冷，用甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液以微孔滤膜滤过，即得。阴性溶液制备：取除赤芍以外的其他药材，按制备工艺制成缺赤芍样品。取缺赤芍样品1 g，按供试品溶液制备方法制备，即得。
　　系统适用性实验分别取芍药苷对照品溶液、供试品溶液及缺赤芍的阴性溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱。从色谱图可知，在此色谱条件下，芍药苷峰与其他组分峰分离完全，在与芍药苷峰相同的保留时间内，阴性对照无干扰。
　　供试品溶液制备方法考察 提取方法选择：取本品内容物，精密加甲醇25 ml，分别用不同的提取方法提取30 min，过滤，滤液经微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，测定芍药苷含量，结果回流提取效率和超声提取效率相当，而索氏提取效率较低，由于超声提取操作方法简便，所以选择超声提取为样品提取方法。结果见表1。
　　表1 提取方法考察结果
　　提取溶剂选择：取本品内容物，分别精密加水、甲醇和乙醇25 ml，超声提取30 min，过滤，滤液经微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，测定芍药苷含量，结果溶剂甲醇的提取效率最高，所以我们选择甲醇为样品提取溶剂。结果见表2。提取时间考察：对同一批样品进行不同提取时间考察，结果表明，供试样品中的芍药苷在30 ～60 min内含量变化已不大，说明芍药苷基本提尽，故选30 min为提取时间。结果见表3。
　　线性关系的考察精密称取芍药苷对照品 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得 80 mg/ml的芍药苷对照品溶液，分别精密吸取芍药苷对照品溶液，5，10，15，20 μl，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，测定结果见表3，并以对照品进样量X为横坐标，峰面积值Y()为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，芍药苷在 5～μg范围内线性关系良好。结果见表4，图6。
　　表2 提取溶剂考察结果
　　表3 提取时间考察结果
　　表4 芍药苷线性关系考察
　　回归方程：Y=747　r= 9将直线方程拟合为过原点的方程为：y=746
　　图6 芍药苷拟合曲线图
　　取线性关系考察中最低点进样量分别代入上述两个方程，计算得两者相对偏差为%，说明本品可用外标一点法进行含量测定计算结果。
　　精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl,重复进样5次，测定芍药苷峰面积积分值，求出相对标准偏差，结果表明精密度良好。结果见表5。
　　表5 精密度实验结果
　　稳定性实验取供试品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试液。在室温下每隔一段时间进样10 μl，测定芍药苷峰面积值，求相对标准偏差。结果表明，芍药苷在12 h内基本稳定。结果见表6。
　　表6 稳定性实验结果
　　重复性实验 精密取本品内容物1 g，共5份，照前述供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液。精密吸取供试品溶液各10 μl，测定芍药苷峰面积积分值，计算含量，求相对标准偏差。结果表明，重复性良好。结果见表7。
　　回收率实验 采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品5份，精密称取各约 g，精密加入芍药苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10 μl，照上述色谱条件测定，计算含量，结果表明，芍药苷的回收率良好。结果见表8。
　　表7 重复性实验结果
　　样品测定 取3批样品，按上述供试品溶液制备方法，分别制成供试品溶液。吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，在上述色谱条件下进行测定，计算芍药苷含量。结果见表9。
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