DB53∕T 1167.3-2023 异种移植医用供体猪 第3部分：病理学诊断规范.pdf

ICS 65.020.30 CCS B43 53 云南省地方标准 DB53/T 1167.32023 异种移植医用供体猪 第 3 部分：病理学诊断规范 2023-04-25 发布 2023-07-25 实施 云南省市场监督管理局 发 布 DB53/T 1167.32023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是DB53/T 1167异种移植医用供体猪的第3部分。DB53/T 1167已经发布了以下部分：第 1 部分：遗传质量控制；第 2 部分：微生物学和寄生虫学等级及监测；第 3 部分：病理学诊断规范；第 4 部分：环境及设施。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南农业大学提出。本文件由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。本文件起草单位：云南农业大学。本文件主要起草人：魏红江、赵红业、王配、赵恒、成文敏、王娇祥、杨畅。DB53/T 1167.32023 III 引言 “异种器官移植”即将人类以外物种的器官移植到人体内，延续人的生命，被认为是解决人类器官短缺最为有效的方法之一。异种移植医用供体猪与人类器官结构大小、生理生化、解剖特征接近，生长周期较短，繁殖能力高，涉及伦理学障碍相对较少，易于利用基因编辑技术克服异种器官移植免疫排斥反应，可被大规模生产等优点，自上世纪90年代开始被认为是异种器官移植最理想的供体。为了对异种移植医用供体猪生产进行指导和规范化生产，编制并发布DB53/T 1167异种移植医用供体猪地方标准，从遗传质量控制、微生物学和寄生虫学等级及监测、病理学诊断规范、环境及设施等环节指导和规范异种移植医用供体猪生产，可让从事异种移植医用供体猪生产相关人员按标准化和规范化程序开展异种移植医用供体猪养殖，带动异种移植医用供体猪规范化、标准化和产业化发展，利于大健康产业创新发展和惠及末期器官衰竭患者。DB53/T 1167由四个部分构成。第 1 部分：遗传质量控制。目的在于确立异种移植医用供体猪的命名、繁殖和遗传质量监测。第2部分：微生物学和寄生虫学等级及监测。目的在于确立异种移植医用供体猪微生物学和寄生虫学的等级分类、检测规则、检测程序和指标、检测方法、结果判定和判定结论等技术要求。第3部分：病理学诊断规范。目的在于确立异种移植医用供体猪的病理学检查的内容和方法，包括检查规则、检查程序、临床病理学检查、解剖病理学检查、病理学诊断报告和检查结论等方面的技术要求。第4部分：环境及设施。目的在于确立异种移植医用供体猪对设施、环境条件的技术要求，环境条件及设施设计、施工、工程验收及经常性监督管理，同时规定了对饮水和笼具的要求。DB53/T 1167.32023 5 异种移植医用供体猪 第 3 部分：病理学诊断规范 1 范围 本部分规定了异种移植医用供体猪的病理学检查的内容和方法，包括检查规则、检查程序、临床病理学检查、解剖病理学检查、病理学诊断报告和检查结论等技术要求。本部分适用于异种移植医用供体猪的病理学诊断。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 DB53/T 802.4 实验小型猪 第4部分：病理学诊断规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。异种移植医用供体猪 Medical grade donor pig for xenotransplantation 选择遗传背景明确的人工培育的实验猪只，利用基因编辑技术，针对异种移植后移植物在受体体内不同阶段的免疫排斥反应，选择可以引起超急性/急性免疫排斥，以及参与调节补体系统、凝血功能，控制感染等的关键基因（以下简称“异种移植关键基因”）加以修饰，制备适合不同细胞、组织和器官的异种移植医用供体猪，用于医用异种移植供体、科学研究、教学、生产和质量控制鉴定以及其他科学实验的基因编辑猪。清洁级异种移植医用供体猪 Medical grade clean（CL）donor pig for xenotransplantation 除不携带所规定的人畜共患病病原和动物烈性传染病病原外，也不携带所规定的对猪只危害大和对科学研究干扰大的病原的异种移植医用供体猪。无指定病原体级异种移植医用供体猪 Medical grade designated pathogen free（DPF）donor pig for xenotransplantation 除清洁级异种移植医用供体猪应排除的病原外，不携带世界卫生组织（World Health Organization,WHO）指定供体动物应排除的潜在感染或条件致病和感染性人畜共患病病原，其组织及器官未来可移植到人体的异种移植医用供体猪。DB53/T 1167.32023 6 无菌级异种移植医用供体猪 Medical grade germ free(GF）donor pig for xenotransplantation 无可检出的任何微生物和寄生虫的异种移植医用供体猪。临床病理学 Clinical pathology 用化学、微生物学、血液学和分子生物学的方法对体液（血液和尿液）和组织等进行实验室分析，从而对疾病进行诊断的医学学科。解剖病理学 Anatomical pathology 通过肉眼、显微镜、化学的、免疫学的和分子的方法对整体、器官和组织的形态进行检查从而对疾病做出诊断的医学学科。4 检查规则 检查频率 4.1.1 清洁级异种移植医用供体猪每 3 个月临床病理学检测至少检查一次，解剖病理学检测每年至少检查一次。4.1.2 无特定病原体级异种移植医用供体猪每半年临床病理学检测至少检查一次，解剖病理学检测每隔一年至少检查一次。4.1.3 无菌级异种移植医用供体猪每年临床病理学检测至少检查一次，解剖病理学检测每隔一年至少检查一次。抽样要求 4.2.1 异种移植医用供体猪应按等级分类要求进行抽样检查。根据群体大小，抽样数量见表 1。4.2.2 异种移植前，每头用于异种移植的供体猪均进行临床病理学检查。4.2.3 异种移植后，每头用于异种移植的供体猪均进行解剖病理学检查。表1 抽样数量 群体规模N（头）抽样数量（头）N100 5 100N500 10 N500 20 5 检查程序 检查程序见图 1。DB53/T 1167.32023 7 图1 异种移植医用供体猪病理学检查程序 6 外观检查 检查异种移植医用供体猪的精神状态、被毛、皮肤、天然孔、营养状况、运动状态、采食情况和呼吸状态等。7 临床病理学检查 采样要求 7.1.1 采血时间 采血前应禁食8 h20 h，宜缩短禁食时间。7.1.2 采血量 采血量应满足检查需求。7.1.3 血样处理 7.1.3.1 用于血液生物化学检查的样品室温静置 30 min60 min，之后 3 000 rpm 离心 5 min，取血清用于检测；若静置后不能及时处理，则应确保冷链运输直至离心。7.1.3.2 用于血液生物化学检查的血清样品密封、避光储存，室温条件下不超过 12 h，4 条件下不超过 24 h。检查指标和参考值 血液生物化学项目及指标正常值参考范围见附录 A。结果判定 DB53/T 1167.32023 8 发现指标存在显著性异常并结合临床情况进行判断。8 解剖病理学检查 大体解剖 8.1.1 基本程序 基本程序如下：a)体表检查；b)皮下检查；c)剖开腹腔做一般视检；d)取出腹腔脏器并检查；e)取出骨盆腔脏器并检查；f)剖开胸腔作一般视检；g)取出胸腔脏器并检查；h)取出口腔和颈部器官并检查；i)剖开颅腔，取出头部器官并检查；j)剖开脊椎管，取出脊髓并检查；k)肌肉、关节和淋巴结检查；l)骨和骨髓检查。8.1.2 检查内容 8.1.2.1 被皮系统 被毛、皮肤、皮下脂肪。8.1.2.2 呼吸系统 鼻腔、肺、气管和支气管。8.1.2.3 循环系统 心包、心包液和心脏、主动脉、肝门部位的血管。8.1.2.4 消化系统 口腔、食管、胃、肠道（十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠）、肝脏、胆管、胆囊、胰腺。8.1.2.5 泌尿系统 肾脏、膀胱。8.1.2.6 生殖系统 睾丸、附睾、前列腺、精囊腺、卵巢、输卵管、子宫、阴道、乳腺。8.1.2.7 免疫系统 胸腺、体表淋巴结、肺门淋巴结、脾脏和脾门淋巴结、肠系膜淋巴结。DB53/T 1167.32023 9 8.1.2.8 神经内分泌系统 大脑、小脑、脑干、垂体、肾上腺、甲状腺、甲状旁腺。8.1.2.9 骨骼与肌肉系统 肌肉、关节、骨、骨髓。组织病理学检查 8.2.1 检查内容 对心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、睾丸/卵巢等主要器官，大体解剖检查发现异常的组织器官，以及根据实验目的需要检查的组织器官进行组织病理学检查。8.2.2 组织取材 组织标本取材规范参见 DB53/T 802.4。8.2.3 病理组织制片 常规石蜡切片，伊红-苏木精染色，必要时应用免疫组织化学或特殊染色等方法进行染色。8.2.4 阅片及诊断 由病理师或病理学专业技术人员完成。结果判定 解剖病理学检查结果分为四个等级，分别为未见异常、轻微异常、轻度异常和明显异常，判定标准如下：a)未见异常：未发现病理形态学异常变化；b)轻微异常：发现轻微的病理形态学变化，推测动物仍然能够表现正常的生理功能；c)轻度异常：发现轻度的病理形态学变化，推测动物正常生理功能已经出现偏差；d)明显异常：有明显的病理形态学变化，推测动物出现生理功能障碍。9 病理学诊断报告 诊断报告书要求 病理学诊断报告书应使用规范的病理学术语及诊断标准，表述准确，条理清晰，具有时效性、真实性、科学性。诊断报告内容 诊断报告内容包括：a)背景信息：送检单位、动物来源、动物编号、品种/品系、性别、年龄、体重、标本取材部位、固定方法等；b)临床病理学诊断：检查所用仪器，外观检查描述（未进行解剖病理学检查时），血液生物化学检测指标、检测结果及正常值参考范围，临床病理学诊断结果等。如外观发现有异常变化，应附有相应的图片；DB53/T 1167.32023 10 c)解剖病理学诊断：检查所用仪器，外观检查描述，大体解剖病理变化描述，组织切片病理变化描述，解剖病理学诊断结果等。如发现有异常变化，应附有相应的图片；d)结论与讨论：给出病理诊断结论，若出现病变则需对可能的原因进行分析讨论，必要时附参考文献。诊断报告确认 诊断报告应由病理师或病理学专业技术人员出具并签字。诊断结果如有争议则可进行同行评议。10 检查结论 临床病理学检查和解剖病理学检查未见异常或轻微异常时，判定合格。否则判定为不合格。临床病理学与解剖病理学检查结果不一致时，依据解剖病理学检查结果做出检查结论。DB53/T 1167.32023 11 附录A （规范性）异种移植医用供体猪的血液生化指标正常值参考范围 异种移植医用供体猪的血液生化指标正常值参考范围见表A.1。表 A.1 异种移植医用供体猪的血液生化指标正常值参考范围表 序号 项目 单位 雄性（）雌性（）1 总胆固醇(TC)mmol/L 0.551.23 1.382.62 2 甘油三脂(TG)mmol/L 0.250.57 0.30.6 3 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)mmol/L 0.721.28 0.751.35 4 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)mmol/L 0.470.99 0.741.2 5 非高密度脂蛋白胆固醇(Non-HDL-C)mmol/L 0.751.17 0.881.32 6 载脂蛋白 A1(ApoA1)g/L 0.120.18 0.140.16 7 载脂蛋白 B(ApoB)g/L 0.010.03 00.03 8 脂蛋白(a)(Lpa)mg/L 0.338.81 0.226 9 总蛋白(TP)g/L 66.8102.7 70.15103.39 10 白蛋白(ALB)g/L 33.7753.63 34.9152.57 11 球蛋白(GLB)g/L 28.2353.91 30.6755.43 12 白球比（A/G）0.771.49 0.781.38 13 前白蛋白(PA)mg/L 11.7934.31 7.1928.33 14 总胆红素(TBIL)mol/L 0.30.88 0.121.32 15 直接胆红素(DBIL)mol/L 0.120.6 0.021.06 16 间接胆红素(IBIL)mol/L 00.48 00.41 17 丙氨酸氨基转移酶(ALT)unit/L 45.4472.5 39.3671.2 18 天冬氨酸氨基转移酶(AST)unit/L 36.7990.93 1.29142.55 19 谷丙/谷草 L/S 0.711.35 0.621.35 20-谷氨酰转肽酶(GT)unit/L 37.3186.95 41.3262.78 21 碱性磷酸酶(ALP)unit/L 53.63130.17 44.75129.15 22-L-岩藻糖苷酶(AFU)unit/L 3.1516.51 2.095.99 23 总胆汁酸(TBA)mol/L 1.1947.73 046.79 24 葡萄糖(GLU)mmol/L 3.718.67 3.768.04 25 尿素(Urea)mmol/L 2.545.66 2.715.07 26 肌酐(CREA)mol/L 58.78112.4 75.73124.15 27 尿酸(UA)mol/L 38.0 38.0 28 钙(CA)mmol/L 2.492.85 2.492.85 29 镁(MG)mmol/L 0.941.22 0.941.2 30 无机磷(P)mmol/L 1.892.87 2.092.77 31 钠(NA)mmol/L 140.52149.04 140.31148.11 32 钾(K)mmol/L 5.037.21 4.996.75 33 氯(CL)mmol/L 100.82107.36 100.88106.14 34 血清碳酸氢盐(CO2)mmol/L 9.6819.92 033.16 DB53/T 1167.32023 12 表A.1 异种移植医用供体猪的血液生化指标正常值参考范围表（续）序号 项目 单位 雄性（）雌性（）35 胱抑素 C(CYSC)mg/g 01.26 00.76 36 肌酸激酶(CK)unit/L 03043.99 03011.88 37 腺苷脱氨酶(ADA)unit/L 0.367.12 2.398.09 38 乳酸脱氢酶(LDH)unit/L 353.18708.88 417.82783.62 39 胆碱酯酶(PCHE)unit/L 225.27398.31 154.64551.98 40 补体 C3(C3）g/L 0.0583 0.0583 41 补体 C4(C4）g/L 0.0167 0.0167 42 免疫球蛋白 A(IgA)g/L 0.0667 0.0667 43 免疫球蛋白 G(IgG)g/L 4.590.93 4.846.5 44 免疫球蛋白 M(IgM)g/L 0.420.9 0.580.96