甲、戊肝抗体检测内容.doc

HQBJS/MYXM-14-2014 SOP文件
B14、2【检测原理】
甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理，在聚酯纤维（或无纺布）上预包被金标记HAV抗原与鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线与质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗与抗鼠IgG抗体。检测阳性标本时，血清（或血浆）样本中甲型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中得甲型肝炎病毒抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物延纸条向前移动，经过检测线时于预包被得抗人IgMu链单抗结合形成“Au-HAV Ag-HAV IgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物，从而在检测处显示紫红色条带，游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠IgG抗体结合，从而在质控线处显示紫红色条带。阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
戊型肝炎病毒IgM抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理，在聚酯纤维（或无纺布）上预包被金标记HEV抗原与鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线与质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗与抗鼠IgG抗体。检测阳性标本时，血清（或血浆）样本中戊型肝炎病毒IgM抗体与胶体金中得戊型肝炎病毒抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物延纸条向前移动，经过检测线时于预包被得抗人IgMu链单抗结合形成“Au-HEV Ag-HEV IgM Ab- 抗人IgM Ab”夹心物，从而在检测处显示紫红色条带，游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠IgG抗体结合，从而在
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质控线处显示紫红色条带。阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。
B14、3【样本要求】
B14、3、1、 在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。
B14、3、2、 检测时应尽量使用新鲜标本。如标本不能及时检测，可在2-8℃冷藏7天。长期保存需冷冻于-20℃，反复冻融次数不超过3次。
B14、3、3、 常规得0、2mg/ml肝素与150mmol/L得EDTA-2Na及2、5％枸橼酸钠抗凝剂不影响检测结果。
B14、3、4、 溶血标本不适用于本试剂。
B14、3、5、 在标本中加入0、1％NaN3不影响检测结果。
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B14、4【试剂盒组成成分】
规格
型号
组份名称
主要生化成份
卡型
HAV-HEV 胶体金法试纸卡
由甲型肝炎病毒IgM抗体试纸、戊型肝炎病毒IgM抗体试纸、塑料卡、干燥剂、吸管与铝箔袋组成。HAV试纸由塑料基片、胶体金垫、纤维素膜、上样垫、吸收垫构成。胶体金垫上预包被金标记HAV抗原与鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线与质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗与抗鼠IgG抗体。HEV试纸由塑料基片、胶体金垫、纤维素膜、上样垫、吸收垫构成。胶体金垫上预包被金标记HEV抗原与鼠单抗，在硝酸纤维膜检测线与质控对照线处分别包被抗人IgMu链单抗与抗鼠IgG抗体。
说明书
纸制印制
稀释液
PH值为8、0，主要含有Tris-Hcl缓冲液、防腐剂、络蛋白
B14、5【检验方法】
进行测试前必须先完整阅读使用说明书：
B14、5、1、 在测试卡（不要打开铝箔袋）及待测得样本恢复至室温（20-30℃）
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B14、5、2、 将采集得血清或血浆样品用稀释液按1：100倍比例稀释（取2ul样本加入到198ul稀释液中，混匀）
B14、5、3、 从铝箔包装袋中取出测试卡，并标记病人或样品编号，将测试卡平放于台面上。
B14、5、4、 用一次性塑料吸管吸取上述已稀释得血清或血浆，分别滴加2滴于二个加样孔内。
B14、5、5、 阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟时在最终观察并记录实验结果，20分钟后显示得结果无临床意义。
注意：从包装铝箔袋中取出得试纸，在室温低于30℃及相对湿度小于65%条件下应于1小时内尽快使用；在室温高于30℃或相对于湿度大于65%条件下应立即使用。
B14、6【检验结果得解释】
B14、6、1、
显示
编号
T（HAV）

T(HEV)
C
结果
HAV
HEV
1
未出现
未出现
出现
阴性
阴性
2
出现
出现
出现
阳性
阳性
3
未出现
出现
出现
阴性
阳性
4
出现
未出现
出现
阳性
阴性
5
未出现
未出现
未出现
无效
无效
6
出现
出现
未出现
无效
无效
阳性结果表明：标本中检测出甲型肝炎病毒IgM抗体/或戊型肝炎病毒IgM抗体。
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阴性结果表明：标本中检测不出甲型肝炎病毒IgM抗体与戊型肝炎病毒IgM抗体。
无效：质控对照线未出现紫红色条带，表明不正确操作过程或试剂盒失效。在此情况下应再次阅读说明书，并用新得试纸卡重新检测。如仍存在问题，应立即停止使用该批号产品，并与当地供应商联系，更换新批号合格产品。
B14、6、2、质控对照线处出现紫红色条带就是作为试纸卡内在控制得标准，以确定就是否使用了正确得操作步骤与得到正确得测试结果。
B14、6、3、检测不同标本时，检测不同标本时，检测线处得紫红色条带可呈现颜色深浅得现象，这就是由于甲型肝炎病毒IgM抗体或戊型肝炎病毒IgM抗体浓度高低不同得原因。但就是在规定内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱得色带也应判定为阳性结果。
B14、7【检验方法得局限性】
B14、7、1、 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治得唯一依据，对患者得临床管理应结合其症状/体征、病史、其她实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。
B14、7、2、 感染初期，病毒特异性IgM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，如怀疑有病毒感染，应提示患者在7-14天内复查，抽取第二份样本，并与第一份样本在同条件下同时检测，以确定就是否有初次感染得血清转化或病毒特异IgM或IgG抗体滴度明显升高。
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B14、7、3、 高滴度病毒特异性IgG抗体会与特异性IgM抗体竞争抗原结合部位，会使检测得敏感性降低，IgM结果可能会出现假性低值或阴性结果。尤其就是怀疑先天性病毒感染得新生儿样本，她们得血清中可能含有母亲来源得高水平病毒特异得IgG抗体与胎儿产生得相对低水平得病毒特异IgM抗体，因此，对于该类样本得阴性结果应慎重分析。
B14、7、4、 由于脐带血中可能含有源于母体得病毒特异性IgM抗体（胎盘渗漏），因此，最好在出生后5天内在对婴儿得后续样本进行检测，以证实脐带血样本病毒特异IgM抗体得阳性结果。强烈推荐新生儿与母亲得血清样本平行测试，如果就是胎儿得先天性感染，其IgM抗体水平（以及IgG抗体水平）会持续存在或上升趋势，反之，如果抗体来源于母体，则在平行试验中婴儿得抗体水平会逐渐下降或消失。
B14、7、5、 由于孕妇得实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病得风险，故不建议采用本试剂对无症状得母体感染进行筛查，不得将本试剂得检测结果单独作为终止妊娠得依据。
B14、7、6、 免疫功能受损或接受免疫治疗得患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗得患者，其血清学IgM抗体检测得参考价值有限，可能会导致错误得医学解释。
B14、7、7、 在近几个月内接受过输血或其她血液制品治疗得人群，对其阳性检测结果得分析应慎重。
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B14、7、8、 病毒特异性IgM抗体不仅出现于初次感染，当二次感染与复发感染时也可能出现。
B14、7、9、 当疾病得流行程度降低时阳性预测值降低，对低危人群阳性结果得解释应当慎重。
B14、8【预期用途】
体外定性检测人血清（或血浆）中得甲型肝炎病毒与／或戊型肝炎病毒IgM抗体，用于临床辅助诊断。
甲型病毒肝炎简称甲型肝炎（hepatitisA）,就是由小核糖核酸病毒科（picornaviridae）嗜肝病毒属（hepatovirus）得甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）感染所致得急性传染病，经粪-口途径传播，多见于儿童与青少年，病程呈自限性，常无慢性感染。甲肝有7个基因型，但HAV只有一个血清型，因此仅有1个抗原抗体系统，感染后可产生IgM型与IgG型抗体。IgM抗体出现早，一般可持续8~12周，少数病例可延续6个月。IgG抗体可持续数年，就是主要得保护性抗体。甲型病毒肝炎感染方式主要有：（1）日常生活接触，（2）水源传播，（3）食物传播，此外，苍蝇与蟑螂也就是传播本病得重要媒介。
戊型肝炎（戊肝，HE）就是一种由戊型肝炎病毒（HEV）引起得急性传染性肝炎，主要经污染得水源传播，也可通过食物与日常生活接触，既往称肠道传播得非甲非乙型肝炎，常引起爆发或流行，但也可散发。病死率约0、5％~1、5％，稍高于甲肝，但孕妇戊肝得病死率可高达20％。我国就是戊肝得高流行区之一，
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约占临床散发性肝炎病例得10％~20％。HEV有4个基因型，基因1型就是亚洲与非洲得发展中国家得流行株；基因2型分布在墨西哥与部分非洲国家；基因3型在全球广泛分布，并从除非洲之外得许多国家得散发急性肝炎患者体内检出；基因4型仅在亚洲国家得人体内检出。我国得HEV主要就是基因1型，部分为基因4型。目前发现HEV只有一个血清型。
B14、9【参考文献】
体外诊断试剂说明书编写指导原则
中国生物制品规程