学术讨论—筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选.ppt

2.2.2 2.2.2 动物动物(dngw)(dngw)细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体第一页，共二十七页。1 1、概念概念(ginin)(ginin)动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交也称细胞杂交，是指是指两个或多个两个或多个动物细胞形成动物细胞形成一个一个(y)细胞的过程细胞的过程一、一、动物动物(dngw)(dngw)细胞融细胞融合合2 2、原理：、原理：膜的流动性膜的流动性第二页，共二十七页。一、一、动物动物(dngw)(dngw)细胞融细胞融合合3 3、结果：形成杂交、结果：形成杂交(zjio)(zjio)(zjio)(zjio)细胞。细胞。杂交细胞：杂交细胞：融合后融合后形成的形成的具有原具有原来两个或多个细胞遗传信息的来两个或多个细胞遗传信息的单核单核 细胞细胞。4 4、诱导、诱导(yudo)(yudo)方法：方法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、灭活的病毒、电激等。灭活的病毒、电激等。第三页，共二十七页。5 5、过程、过程(guchng)(guchng)：第四页，共二十七页。3 3、过程、过程(guchng)(guchng)：细胞相互细胞相互(xingh)凝凝集集膜上蛋白质分子膜上蛋白质分子(fnz)和脂质分子和脂质分子(fnz)重新重新排布排布细胞膜打开细胞膜打开细胞发生融合细胞发生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。相互凝集。第五页，共二十七页。6 6、优点、优点(yudin)(yudin)：突破了有性杂交的局限，突破了有性杂交的局限，使远缘使远缘(yun yun)杂交成为可能杂交成为可能7 7、应用：、应用：用于研究细胞遗传、细胞免疫、用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养肿瘤和生物新品种培养(piyng)(piyng)(piyng)(piyng)等的重要手等的重要手段。段。最重要的用途：制备单克隆抗体最重要的用途：制备单克隆抗体第六页，共二十七页。2 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么或融合过程有什么(shn me)(shn me)影响？影响？3 3、植物体细胞杂交诱导、植物体细胞杂交诱导(yudo)(yudo)(yudo)(yudo)原生质体融合常用的原生质体融合常用的方法有哪些？方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法离心、振动、电激等物理方法(fngf)(fngf)(fngf)(fngf)；PEGPEG等化学方法等化学方法(fngf)(fngf)(fngf)(fngf)问题讨论问题讨论动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能，只能得到杂交细胞不能，只能得到杂交细胞第七页，共二十七页。4 4、动物细胞融合能利用、动物细胞融合能利用(lyng)(lyng)(lyng)(lyng)上述两类方法吗？还上述两类方法吗？还有其他方法吗？有其他方法吗？能能，还可以利用灭活的病毒（生物还可以利用灭活的病毒（生物(shngw)(shngw)(shngw)(shngw)方法）进行诱导方法）进行诱导问题问题(wnt)讨论讨论、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性相同，都是细胞膜的流动性第八页，共二十七页。问题问题(wnt)讨讨论论6 6、为什么要用、为什么要用灭活灭活的病毒的病毒(bngd)(bngd)(bngd)(bngd)？病毒病毒(bngd)(bngd)一般对生物体是有伤害的。一般对生物体是有伤害的。仙台病毒仙台病毒物理或物理或物理或物理或化学方法化学方法化学方法化学方法丧失感染活性丧失感染活性保留融合活性保留融合活性第九页，共二十七页。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得获得(hud)(hud)杂种植杂种植株株物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电激）荡、电激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途用途诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目8 8、植物、动物植物、动物(dngw)(dngw)(dngw)(dngw)细胞融合的比细胞融合的比较较第十页，共二十七页。1.1.抗体抗体(kngt)(kngt)(kngt)(kngt)是由何种细胞产生的？是由何种细胞产生的？2.2.2.2.抗体是如何产生的？抗体是如何产生的？二、二、单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt)第十一页，共二十七页。（一）获得抗体的传统（一）获得抗体的传统(chuntng)方法方法1、方法：、方法：向动物体内反复注射某种抗原向动物体内反复注射某种抗原(kngyun)，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。抗体。2、缺点：、缺点：产量少、纯度低、特异性差产量少、纯度低、特异性差.第十二页，共二十七页。3、解决问题的设想、解决问题的设想:免疫反应过程中，免疫反应过程中，每一个每一个B淋巴细淋巴细胞胞只分泌一种只分泌一种特异性抗体。特异性抗体。克隆单一的克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。群，获得大量的单一抗体。4、面临的新问题：、面临的新问题：一个一个B淋巴细胞不可能在体外培养淋巴细胞不可能在体外培养条件条件(tiojin)下无限增殖的。下无限增殖的。.第十三页，共二十七页。1 1、如何、如何(rh)(rh)获得化学性质单一、特异性强的抗体？获得化学性质单一、特异性强的抗体？问题问题(wnt)讨讨论论提示提示(tsh)：1.1.什么样的细胞可以产生抗体？什么样的细胞可以产生抗体？2.2.什么样的细胞可以无限增殖？什么样的细胞可以无限增殖？2 2、瘤细胞和癌细胞有何区别？、瘤细胞和癌细胞有何区别？共同点：共同点：两者都有无限增殖的能力两者都有无限增殖的能力不同点：不同点：瘤细胞不能转移瘤细胞不能转移第十四页，共二十七页。1、设计方案：设计方案：一个一个B淋巴细胞淋巴细胞只分泌只分泌(fnm)(fnm)一种特异性抗体一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖杂种杂种(zzhng)(zzhng)细胞细胞（二）（二）单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt)的制备的制备第十五页，共二十七页。2 2、单克隆抗体单克隆抗体(kngt)(kngt)制备过制备过程程 注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、细胞融合、筛选筛选(shixun)杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选，继续培养，继续培养足够数量足够数量(shling)的、能的、能产生特定抗体的细胞群产生特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体（选择性培养基）（选择性培养基）诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？第十六页，共二十七页。单克隆抗体(kngt)的制备 第十七页，共二十七页。单克隆抗体(kngt)的制备第十八页，共二十七页。B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤、细胞融合后培养液中有几种、细胞融合后培养液中有几种(j zhn)细胞？细胞？筛选杂种细胞筛选杂种细胞思考思考(sko)：杂交瘤细胞杂交瘤细胞(xbo)、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？细胞融合技术、细胞培养技术细胞融合技术、细胞培养技术第十九页，共二十七页。3、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念(ginin)：化学性质单一，特异性强的抗体化学性质单一，特异性强的抗体4、单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可大量特异性强，灵敏度高，并可大量(dling)制备。制备。第二十页，共二十七页。诊断疾病诊断疾病诊断疾病诊断疾病（识别作用（识别作用（识别作用（识别作用(zuyng)(zuyng)(zuyng)(zuyng)，如同位素标记单克隆抗体，可如同位素标记单克隆抗体，可如同位素标记单克隆抗体，可如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）诊断肿瘤、心血管畸形等）诊断肿瘤、心血管畸形等）诊断肿瘤、心血管畸形等）（三）（三）单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt)的应用的应用优点：优点：准确准确(zhnqu)、高效、简易、快速、高效、简易、快速用于治疗疾病和运载药物（用于治疗疾病和运载药物（用于治疗疾病和运载药物（用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，主要用于癌症治疗，主要用于癌症治疗，主要用于癌症治疗，也可运载药物，如也可运载药物，如也可运载药物，如也可运载药物，如“生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹”）（导向作用，作为载体，生物导弹（导向作用，作为载体，生物导弹=单克单克隆抗体隆抗体+药物，药物，用于用于治疗肿瘤）治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）（位置准确、疗效高、副作用小）第二十一页，共二十七页。小结小结(xioji)(xioji)两个两个(lin)过程过程动物动物(dngw)细胞培养过细胞培养过程程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势单克隆抗体单克隆抗体第二十二页，共二十七页。下图为某同学根据杂交瘤技术的方法下图为某同学根据杂交瘤技术的方法(fngf)，设计的生产破伤风杆菌的，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案抗体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备制备(zhbi)单克隆抗单克隆抗体体B细胞细胞(xbo)抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC第二十三页，共二十七页。世界上第一只克隆羊世界上第一只克隆羊“多莉多莉”的培育过程的培育过程(guchng)如图所示，请据图回答：如图所示，请据图回答：乙乙甲甲abcdef(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，为多莉羊。那么，a和和b是通过是通过(tnggu)_分裂形成的，其分裂形成的，其DNA含量是体细胞的含量是体细胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 细胞，乙的遗细胞，乙的遗传性状与提供传性状与提供 _的绵羊的绵羊 一致一致.减数减数(jin sh)一半一半体体细胞核细胞核第二十四页，共二十七页。乙乙甲甲abcdef(2)产生产生 甲和乙的过程分别是甲和乙的过程分别是和和（3）在形成乙是的过程中，需要）在形成乙是的过程中，需要将将d的细胞核取出，将的细胞核取出，将c细胞核移细胞核移入入d细胞内，此技术叫细胞内，此技术叫。所。所需的受体细胞大多采用动物卵细需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是胞的原因是（4）绵羊的白色对黑色为显色。）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用纯合体，选用(xunyng)与它交配的绵与它交配的绵羊最好是羊最好是-有性生殖有性生殖(yuxng shngzh)克隆克隆(k ln)核移植核移植卵细胞大，易于操作；卵细卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能胞具有继续分化的潜能。黑毛黑毛第二十五页，共二十七页。乙乙甲甲abcdef（5）在产生多莉羊时，需将）在产生多莉羊时，需将e细细胞形成的早期胚胎移入另一头母胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（羊（f）子宫里，这种技术在细）子宫里，这种技术在细胞工程中叫胞工程中叫（6）继植物组织培养后，克隆绵羊）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也有的培育成功，证明动物细胞也有（7）在繁殖多莉羊的过程）在繁殖多莉羊的过程(guchng)中，中，是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与的性状与d羊、羊、c羊及羊及f羊的关系是什羊的关系是什么？么？胚胎胚胎(piti)移植移植全能性全能性不遵循，多莉羊的多数不遵循，多莉羊的多数(dush)性状象性状象c羊，个别性状羊，个别性状象象d羊，发育也会受到羊，发育也会受到f羊影响羊影响。第二十六页，共二十七页。内容(nirng)总结2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体。动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成(xngchng)一个细胞的过程。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成(xngchng)杂种动物个体吗。一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。全能性第二十七页，共二十七页。