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尿液检验尿液检验(jinyn)标准化、质控进标准化、质控进展展现现 状状建建 议议曾真第一页，共五十二页。第一章第一章干化学检测干化学检测尿液有形成分尿液有形成分第二页，共五十二页。o优点：检测化学项目多、速度快；o不足：检测特异性不好、检测项目名不副实；o质控：1、质控物为化学物质，不是真实形态学成分；2、干扰因素多，无法预知和排除；o许多有形成分不能检测；o方法自身不能证实检测的真实性；o不符合(fh)ISO15189；o只能是过筛检测；现现 状状第三页，共五十二页。o检测粒细胞的酯酶o淋巴细胞、单核细胞等不能检测o干扰物质(wzh)众多：庆大、先锋、甲醛、胆红质等例如白细胞蛋白o检测白蛋白o其他蛋白不能检测o干扰因素众多(zhngdu)：pH、药物等。红细胞红细胞o检测血红蛋白、肌红蛋白o干扰(gnro)因素众多：维生素C、高蛋白、pH第四页，共五十二页。弥补弥补(mb)办法办法o必须镜检：1、镜检与化学检验的关系：互补(h b)、验证 2、镜检干化学不能检测的有形成分；o使用特异性检测方法检测化学成分；第五页，共五十二页。第二章第二章尿液有形成分检测标准化尿液有形成分检测标准化第六页，共五十二页。尿液有形成分检验(jinyn)的现状多种技术并存性能差别很大仪器种类非形态学形态学检测技术第七页，共五十二页。尿液有形成分检测仪器(yq)分类经典流式 UF数字图像流式 IQ200 迪瑞数字图像机器视觉AVE 罗氏、科宝其他识别戴西斯、龙鑫、惠生单镜头单镜头单镜头单镜头第八页，共五十二页。o显微镜离心(lxn)镜检o戴西斯仪器离心镜检o流式、数字流式检测直接发报告o流式、数字流式检测+手工显微镜镜检复核o流式、数字流式检测+戴西斯仪器镜检复核o流式、数字流式检测+干化学对比+镜检复核o镜检自动化仪器检测o镜检自动化仪器检测+镜检复核检验检验(jinyn)程序多样程序多样性性第九页，共五十二页。ECLM -European Urinalysis Guidelines（2000）NCCLS-Routine Urinalysis and Collection,Transportation,and Preservation of Urine Specimens;Approved Guideline（1995）JCCLS -JCCLS Guideline GP1-P3（2000）SCCLS-尿沉渣检查标准化的建议(jiny)(2002)ISLH -ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003)NCCLS-尿液检验操作指南（第三版）(20092009)修改的 GP16-A3GP16-A3尿液检验尿液检验(jinyn)(jinyn)的规范管理标准文件的规范管理标准文件不不离离心心(lxn)离心方离心方法法第十页，共五十二页。尿液有形成分国际标准文件不离心方法不离心方法 1 1、20032003年年 ISLHISLH 尿液颗粒计数尿液颗粒计数 Recommended Reference Procedure for the Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003)Enumeration of Particles in Urine(2003)2 2、20092009年年NCCLSNCCLS 尿液检验操作指南（第三版）尿液检验操作指南（第三版）离心方法离心方法(fngf)（2002年以前标准文件）第十一页，共五十二页。（CLSI原原NCCLS)尿液分析操作尿液分析操作(cozu)指南（第三版）指南（第三版）GP16-A3(2009)第十二页，共五十二页。Number 4 GP16-A324 Clinical and Laboratory Standards Institute.All rights reserved.10.1.2 Urine Particle Analyzers64-68Automated urine analyzers use various technologies to classify and enumerate particles in urine.Depending on the instrument,the technologies incorporated can include impedance,digital imaging flow cytometrydigital imaging flow cytometry,flow cytometry,light scatter,dyes,fluorescence,or some combination thereof.Particles with like characteristics are then grouped and classified.The elements that are typically identified include RBC,WBC,epithelial cells(squamous and nonsquamous),casts(benign and pathologic),bacteria,sperm,mucus,crystals,and small round cells.Samples showing abnormalities,either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,are then reviewed microscopically by a technologist.Negative samples may obviate the need for manual microscopy.第十三页，共五十二页。国际标准国际标准(u j bio zhn)（GP16-A3 20092009年）给出的解年）给出的解决对策决对策1 1、数字图像流式细胞仪、流式细胞仪等数字图像流式细胞仪、流式细胞仪等 标本不论是实验室认为或仪器检测异常时（Samples showing abnormalities,either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,）必须用人工镜检方必须用人工镜检方法重新检测确认。法重新检测确认。2 2、阴性结果可以免除镜检确认。阴性结果可以免除镜检确认。第十四页，共五十二页。流式流式图像流式人工人工镜检镜检国际标准国际标准(u j bio zhn)规定规定第十五页，共五十二页。国际标准(u j bio zhn)的参考文献64 Delanghe J.New screening diagnostic techniques in urinalysis.Acta Clin Belg.2007;62:155-161.65 Ottiger C,Huber AR.Quantitative urine particle analysis:integrative approach for the optimal combination of automation with UF-100 and microscopic review with KOVA cell chamber.Clin Chem.2003;49:617-623.66 Delanghe JR,Kouri TT,Huber AR,et al.The role of automated urine particle flow cytometry in clinical practice.Clin Chim Acta.2000;301:1-18.67 Roggeman S,Zaman Z.Safely reducing manual urine microscopy analyses by combining urine flow cytometer and strip results.Am J Clin Pathol.2001;116:872-878.68 Shayanfar N,Tobler U,von Eckardstein A,Bestmann L.Automated urinalysis:first experiences and a comparison between the Iris iQ200 urine microscopy system,the Sysmex UF-100 flow cytometer and manual microscopic particle counting.Clin Chem Lab Med.2007;45:1251-1256.第十六页，共五十二页。o再次过筛理论依据：1、干化学也能检测部分有形成(xngchng)分的化学物质；2、流式仪器也能检测部分有形成分；3、两者结合检测结果对照可以进一步减少人工镜检数量，减少复检率；o干化学指标：红细胞、白细胞、蛋白质、胆红素；o方式：排列组合为64种模式；流式+干化学再次再次过筛减少镜检率的可行性第十七页，共五十二页。临床实际验证(ynzhng)差异太大的原因：o两者检测方法均为过筛检测过筛检测，干扰物均无法排除、证实(zhngsh)；o两者均为非形态学方法，两者之间无相互验证性相互验证性；o两者方法之间也无检测的互补性互补性；o排列组合方式不适合这种检测：案例流 式 结 果RBC WBC 干 化 学 排 列 组 合 结 果 RBC WBC Pr 1 234第十八页，共五十二页。使用(shyng)流式、数字图像流式仪器怎样做到规范和标准o按照NCCLS要求，阳性标本必须镜检；o镜检复核方法要 符合ISLH方法要求；o复核后按镜检结果报告；o灵敏度要求：符合临床(ln chun)决定限第十九页，共五十二页。镜检方法(fngf)标准化文件具体要求国际标准ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003)第二十页，共五十二页。ISLH镜检方法核心内容1、不离心尿液直接检测，、不离心尿液直接检测，2、计数池体积、计数池体积 6.4ulul3、低倍镜低倍镜 观察计数大型有形成分（上皮细胞、管型）；高倍镜高倍镜 观察计数小型有形成分（细胞、真菌、结晶等）4、结、结 果果 以“个/ul”报告。5、统计学精度、统计学精度 低倍：低倍：（管型和上皮）至少计数50个 CV14%CV14%；高倍：高倍：（红、白细胞等）至少计数200个，CV7%CV7%；第二十一页，共五十二页。一、标准镜检参考方法的检测特点o不离心尿液直接镜检 定量准确o检测体积：6.4ul(不是1ul)目的：目的：提高灵敏度，确保检测准确性 原因原因：不离心尿液直接镜检极易漏检o报告：个/ul第二十二页，共五十二页。o必须有两个镜头：高倍镜和低倍镜必须有两个镜头：高倍镜和低倍镜 两个镜头观察的两个镜头观察的内容内容不同（大小不同）不同（大小不同）两个镜头观察的两个镜头观察的范围范围不同（体积范围不同）不同（体积范围不同）两个镜头观察的两个镜头观察的细节细节不同（分辨率不同）不同（分辨率不同）二、标准镜检参考方法的基本要求：第二十三页，共五十二页。o统计学精度统计学精度 低低 倍：倍：（管型和上皮）至少计数50个CV14%CV14%；高高 倍：倍：（红、白细胞等）至少计数200个，CV7%CV7%；这是在有形成分浓度不低时候的理想统计学精度这是在有形成分浓度不低时候的理想统计学精度三、标准镜检参考方法的理想精密度第二十四页，共五十二页。镜检必须(bx)做到o检测：不离心(lxn)尿液直接检测o检测体积：不小于6.4ulo灵敏度达到：3-10个细胞/ul （符合临床决定限要求）目的：低浓度不漏检o检测报告：个/ul第二十五页，共五十二页。第二节第二节 镜检自动化技术仪器镜检自动化技术仪器第二十六页，共五十二页。依依 据据机器视觉o方法学：显微镜镜检方法，金标准，方法溯源o镜检自动化已经成为发展方向o镜检自动化仪器没有(mi yu)改变人工镜检程序：改变的是：操作自动化：仪器预识别和计数有形成分 人工审核时作用就是人工镜检 o符合国际标准：ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003)第二十七页，共五十二页。仪器仪器(yq)(yq)(yq)(yq)工作流程工作流程 完全参照人工镜检标准参考方法完全参照人工镜检标准参考方法完全参照人工镜检标准参考方法完全参照人工镜检标准参考方法进进样样充充池池低倍过筛低倍过筛(u shi)（视野数可设置）（视野数可设置）低倍定位低倍定位 分类分类(fn li)(fn li)计数计数（管型、上皮）（管型、上皮）高倍识别高倍识别分类计数分类计数报报告告清洗清洗阴阴性性阳阳性性人人工工审审核核第二十八页，共五十二页。第三节数字图像自动化仪器如何达到人工镜检标准第二十九页，共五十二页。镜检自动化仪器(yq)=人工镜检条条 件件o是否符合是否符合ISLHISLH（20032003年）的国际标准条件；年）的国际标准条件；o是否是使用的具有高、低倍镜的显微镜是否是使用的具有高、低倍镜的显微镜;o拍摄图像是否是真实显微镜下的实景？拍摄图像是否是真实显微镜下的实景？o图像经过处理否？图像经过处理否？o检测灵敏度能否检测灵敏度能否(nn fu)(nn fu)达到达到:3-10:3-10个细胞个细胞/ul;/ul;o结果有人工审核；结果有人工审核；o审核人员专业知识、经验、能力、责任心；审核人员专业知识、经验、能力、责任心；第三十页，共五十二页。第三章尿液有形成(xngchng)分检验质控第三十一页，共五十二页。尿液有形成(xngchng)分检测质控o真实成分标准品质控o单一(dny)真实成分标准品质控o标准成分图像质控o替代品质控第三十二页，共五十二页。有形成分检测仪器(yq)技术不同质控不同o流式：质控物为特制颗粒物；o机器视觉技术(jsh)：红细胞o没有质控物的仪器现现 状状第三十三页，共五十二页。第一节流式质控第三十四页，共五十二页。o质控依据是血液分析o质控物为特制颗粒，不是尿液有形成分，为替代品，与实际检测无系统属性(shxng)；o干扰物影响无法质控和检测；o检测错误时检测者无法获悉；o分类计数无意义；o实际意义：校准仪器计数准确性；检测、质控依据检测、质控依据(yj)和问题和问题流式第三十五页，共五十二页。特制颗粒质控物，实际检测无系统(xtng)属性流式第三十六页，共五十二页。检测错误时仪器(yq)无法知道流式第三十七页，共五十二页。第二节镜检仪器(yq)质控第三十八页，共五十二页。机器(j q)视觉质控：o质控物：单一红细胞；o其他成分质控品目前无法做到；o发展方向：标准图像质控；o预识别后人工审核不能少；o标准图库建立和指导意义大，需要增加和加强；o实际意义：校准仪器(yq)计数准确性；分类计数在人工审核后才具有意义；第三十九页，共五十二页。第三节无质控品仪器第四十页，共五十二页。问问 题题无质控品的仪器检测灵敏度不够，不能质控识别能力不好，无法质控检测体积达不到国际标准要求，精确度较差单镜头下小的分辨不清（ISLH要求两个镜头）第四十一页，共五十二页。单镜头的仪器(yq)探讨：第四十二页，共五十二页。高、低倍镜下图像(t xin)比较第四十三页，共五十二页。第四十四页，共五十二页。第四十五页，共五十二页。第四章如何保证尿液检测标准和正确第四十六页，共五十二页。如何能是尿液检测(jin c)标准和正确o按国际标准文件 ISLH（2003）和GP16-A3 执行，不折扣；o尿液检验(jinyn)必须包括：理学、化学和镜检；o任何仪器检测结果必须与人工镜检相符合；第四十七页，共五十二页。o仪器检测的阳性结果必须(bx)镜检复检（GP16-A3规定）；o镜检复核时方法应符合ISLH 规定o自动化仪器灵敏度符合临床决定限要求 3-10个细胞/ul如何能是尿液检测(jin c)标准和正确使用流式仪器第四十八页，共五十二页。质质 控控应在定性良好的前提下强调应在定性良好的前提下强调(qing dio)定量准确定量准确如何能是尿液检测(jin c)标准和正确第四十九页，共五十二页。o符合ISLH(2003)规定；o应该具备高低倍镜头o图像必须是镜下整体(zhngt)的、真实图像，不能是局部、个别图像o人工审核不能省略；o镜检自动化仪器灵敏度必须达到：3-10个细胞/ulo仪器必须有权威公布的正常参考值 如何能是尿液检测标准(biozhn)和正确镜检和图像技术自动化仪器第五十页，共五十二页。第五十一页，共五十二页。内容(nirng)总结尿液检验标准(biozhn)化、质控进展。第二章尿液有形成分检测标准(biozhn)化。3、两者结合检测结果对照可以进一步减少人工镜检数量，减少复检率。镜检方法标准(biozhn)化文件具体要求。必须有两个镜头：高倍镜和低倍镜。两个镜头观察的范围不同（体积范围不同）。两个镜头观察的细节不同（分辨率不同）。第三节数字图像自动化仪器如何达到人工镜检标准(biozhn)。有形成分检测仪器技术不同质控不同。谢谢第五十二页，共五十二页。