学术讨论—肠杆菌科细菌鉴定.ppt

肠杆菌科细菌(xjn)鉴定组员(z yun)：李木生，颜大钧，郑伟坛，朱俊林，胡思妙，王荣迎，陈琳蔓第一页，共十八页。肠杆菌(gnjn)科细菌一般性鉴定程序未未知知肠肠杆杆菌菌(gnjn)分分离离(fnl)培培养养挑挑取取可可疑疑菌菌落落纯纯培培养养革革兰兰染染色色镜镜检检生生化化实实验验鉴鉴定定药药敏敏试试验验血血清清学学试试验验第二页，共十八页。一.分离(fnl)培养无菌操作用接种环提取可疑(ky)肠道杆菌，在EMB上分区划线接种。送37培养24小时。第三页，共十八页。二.纯培养(piyng)（一）确定可疑菌落。1.观察(gunch)EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的单个菌落可初步定为可疑大肠杆菌菌落，标号为。（2）.凡光滑无色透明的单个小菌落可初步定为痢疾杆菌属菌落或伤寒杆菌属菌落，标号为。第四页，共十八页。（二）.可疑菌落纯化培养 无菌操作(cozu)用接种针挑取已编号可疑菌落，分别接种在双糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37温箱培养2448小时。（三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察初步初步(chb)确定为伤寒杆菌确定为伤寒杆菌初步确定初步确定(qudng)为大肠杆菌为大肠杆菌第五页，共十八页。革兰染色(rns)镜检 挑取纯培养后的可疑菌落(jnlu)进行革兰染色，确定为革兰阴性菌后进行细菌的生化培养基接种。细菌的生化培养基接种。革兰阴性菌革兰阴性菌短杆状，分散短杆状，分散(fnsn)排列排列第六页，共十八页。生化试验(shyn)鉴定 将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接种于各种将需全面鉴定的可疑细菌从双糖铁琼脂斜面挑菌分别接种于各种(zhn)zhn)生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计有糖发酵管生化反应培养基。每株可疑菌需接种的培养基计有糖发酵管（葡葡.乳乳.麦麦.甘甘.蔗蔗）各）各1 1支，支，蛋白胨水蛋白胨水1 1支（支（I I），），葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨水水2 2支（支（M.VpM.Vp），），枸橼酸盐琼脂斜面枸橼酸盐琼脂斜面1 1支（支（C C）。接种完毕后，试）。接种完毕后，试管置于试管架上，送管置于试管架上，送3737温箱培养温箱培养24482448小时后观察记录结果。小时后观察记录结果。第七页，共十八页。1.1.不变黄，小管无气泡：糖发酵不变黄，小管无气泡：糖发酵(f jio)(f jio)为为阴性（阴性（）。2.2.黄色，小管有气泡（产酸，产黄色，小管有气泡（产酸，产气）：糖发酵为气）：糖发酵为阳性（阳性（+）。黄色，小管无气泡（产酸，不产气）黄色，小管无气泡（产酸，不产气）：糖发酵为：糖发酵为阳性（阳性（+）。糖发酵糖发酵(f jio)(f jio)(f jio)(f jio)试验试验第八页，共十八页。结果：红色为吲哚试验结果：红色为吲哚试验结果：红色为吲哚试验结果：红色为吲哚试验阳性阳性阳性阳性(yngxng)(yngxng)(yngxng)(yngxng)（+），无变化为，无变化为，无变化为，无变化为阴性阴性阴性阴性（-）红色为甲基红试验红色为甲基红试验红色为甲基红试验红色为甲基红试验阳性阳性阳性阳性(yngxng)(yngxng)(yngxng)(yngxng)（+），桔，桔，桔，桔黄色为黄色为黄色为黄色为阴性（阴性（阴性（阴性（-）吲哚吲哚吲哚吲哚(yn du)(yn du)(yn du)(yn du)试验试验试验试验(I)(I)(I)(I)甲基红试验甲基红试验甲基红试验甲基红试验(MR)(MR)(MR)(MR)试验试验试验试验第九页，共十八页。VPVP试验试验(shyn)(shyn)枸橼酸盐利用枸橼酸盐利用枸橼酸盐利用枸橼酸盐利用(lyng)(lyng)(lyng)(lyng)试验试验试验试验(C)(C)(C)(C)斜面上有菌苔，且变成深蓝色，斜面上有菌苔，且变成深蓝色，斜面上有菌苔，且变成深蓝色，斜面上有菌苔，且变成深蓝色，为为为为阳性阳性阳性阳性(yngxng)(yngxng)(yngxng)(yngxng)；斜面上；斜面上；斜面上；斜面上无菌苔，仍是绿色为无菌苔，仍是绿色为无菌苔，仍是绿色为无菌苔，仍是绿色为阴性阴性阴性阴性。红色为红色为VPVP阳性阳性。第十页，共十八页。表1 肠杆菌(gnjn)科细菌生化反应鉴定结果记录表细菌细菌编号编号葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麦芽麦芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基红红 VP枸橼枸橼酸盐酸盐H2S动力动力大肠杆菌 +-+伤寒杆菌 -+-+细菌细菌编号编号葡萄葡萄糖糖 乳糖乳糖麦芽麦芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗糖蔗糖 吲哚吲哚甲基甲基红红 VP枸橼枸橼酸盐酸盐H2S动力动力大肠杆菌 -/+-+伤寒杆菌 +-+-+-/+表2 肠杆菌科细菌生化反应(fnyng)鉴定数据参考表第十一页，共十八页。实验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在己接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散(kusn)，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。药物敏感(mngn)试验第十二页，共十八页。实验方法 （一）接种肉汤培养基 （二）菌液均匀涂抹平板培养基 （三）分别夹取青霉素、链霉素、庆大霉素和头孢拉定四种(s zhn)抗生素纸片贴在平板上进行培养第十三页，共十八页。实验实验(shyn)结结果果第十四页，共十八页。青霉素(mm）链霉素（mm）头孢拉定（mm）庆大霉素（mm）大肠杆菌-1815(敏感）-2415(敏感）沙门菌-1615(敏感）-1915(敏感）志贺菌-2215(敏感）-2515(敏感）实验(shyn)结果 三种(sn zhn)菌对链霉素链霉素和庆大霉素庆大霉素敏感敏感，但对青霉素青霉素和头孢拉定头孢拉定耐药耐药。第十五页，共十八页。血清学试验(shyn)第十六页，共十八页。第十七页，共十八页。内容(nirng)总结肠杆菌科细菌鉴定。血清学试验。无菌操作用接种环提取可疑肠道杆菌，在EMB上分区划线接种。（1）.凡紫黑色的单个菌落可初步定为可疑大肠杆菌菌落，标号为。（2）.凡光滑无色透明的单个小菌落可初步定为痢疾杆菌属菌落或伤寒杆菌属菌落，标号为。无菌操作用接种针挑取已编号(bin ho)可疑菌落，分别接种在双糖铁高层琼脂斜面和半固体培养基上，送37温箱培养2448小时。（三）.双糖铁琼脂斜面培养特征观察与动力观察。实验结果第十八页，共十八页。