离心技术201209112011级临床本科.pptx

以常用分析与检测实验技术为主线，以细胞与分子生物学、生物化学、免疫细胞与分子生物学、生物化学、免疫学、遗传学学、遗传学等学科内容为基础，使医学生初步掌握常用分析与检测实验技术的基本知识和技能、常规仪器设备的使用和保养，了解现代分子生物学技术的基本知识，熟悉各种检测指标的临床意义。主讲内容：一、离心原理与技术一、离心原理与技术二、常用标记技术二、常用标记技术三、其它实验技术三、其它实验技术离离 心心 原原 理理 与与 技技 术术离心技术离心技术是指利用旋转运动产生的离心力，根据物质的沉降系数或浮力密度的差别进行物质的分析、分离、浓缩和提纯的一种技术。洗衣机的洗衣机的脱水筒脱水筒“棉花棉花”糖的制糖的制作作汽汽车车转转弯弯应用：应用：分离、纯化样品及对已纯化的样品进行结构和性质分析。离心技术离心技术是指利用旋转运动产生的离心力，根据物质的沉降系数或浮力密度的差别进行物质的分析、分离、浓缩和提纯的一种技术。离心机（离心机（centrifugecentrifuge）是实施离心技术的）是实施离心技术的装置。装置。它主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液它主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开；或将乳浊液中两种密度不同，又互体分开；或将乳浊液中两种密度不同，又互不相溶的液体分开（例如从牛奶中分离出奶不相溶的液体分开（例如从牛奶中分离出奶油）；它也可用于排除湿固体中的液体，例油）；它也可用于排除湿固体中的液体，例如用洗衣机甩干湿衣服；特殊的超速管式分如用洗衣机甩干湿衣服；特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物；利用离机还可分离不同密度的气体混合物；利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点，有的沉降离心机还可对固体度不同的特点，有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。颗粒按密度或粒度进行分级。离心技术的应用离心技术的应用 1.1.用于工业生产的，如化工、制药、食品等用于工业生产的，如化工、制药、食品等 工业大型制备用的离心技术，转速都在工业大型制备用的离心技术，转速都在 每分钟每分钟50005000转以下转以下。2.2.用于生物、医学、化学等实验室分析研究用于生物、医学、化学等实验室分析研究 的，转速从的，转速从每分钟几千到几万转每分钟几千到几万转以上，此以上，此 类技术的使用目的在于分离和纯化样品，类技术的使用目的在于分离和纯化样品，以及对纯化的样品有关性能进行研究。以及对纯化的样品有关性能进行研究。内容：第一节第一节 离心技术的基本原理离心技术的基本原理第二节第二节 离心设备离心设备第三节第三节 常用离心方法及应用常用离心方法及应用第一节第一节 离心技术的基本原理离心技术的基本原理一、离心的一般原理一、离心的一般原理二、离心力和相对离心力二、离心力和相对离心力三、沉降速度三、沉降速度四、沉降系数四、沉降系数五、沉降时间五、沉降时间六、测定相对分子量六、测定相对分子量一一.基本原理基本原理1.1.离心力离心力 （Centrifugal forceCentrifugal force，F F）：）：是指是指悬浮颗粒在离心过程中所受的离开旋转中心轴悬浮颗粒在离心过程中所受的离开旋转中心轴的作用力。的作用力。F=ma=mF=ma=m2 2r r F:F:离心力（离心力（g.cm/s2g.cm/s2或达因）或达因）m:m:颗粒质量颗粒质量 a:a:加速度加速度 :旋转角速度旋转角速度 r r：旋转体离旋转轴的距离：旋转体离旋转轴的距离 n:n:每分钟的转数每分钟的转数 =(rad/sec)=(rad/sec)2n602.2.相对离心力相对离心力 Relative centrifugal Relative centrifugal force (RCF)force (RCF)RCF RCF 就是在离心场中颗粒所受的离心力相就是在离心场中颗粒所受的离心力相当于它受到的地球重力的倍数，称为重力加当于它受到的地球重力的倍数，称为重力加速度。速度。RCF=FRCF=F离心力离心力/F/F重力重力 =m=m2 2r/mg=r/mg=2 2r/g r/g g g为重力加速度（为重力加速度（980cm/sec980cm/sec2 2)若用若用 2n2n =(rad/sec)=(rad/sec)60 60 (2n/60)(2n/60)2 2 RCFRCF=x r=x r 980 980 =1.119101.11910-5-5 n n2 2 r r n n：转子每分钟的转数：转子每分钟的转数(rpm)(rpm)RCF=1.119101.11910-5-5 n n2 2 r rRCFRCF =1.11910 =1.11910-5-5(12000)(12000)2 23.83.8 =6123g =6123gRCFRCF =1.11910 =1.11910-5-5(12000)(12000)2 28.18.1 =13052g =13052gDole&Cotzias制作了转子速度和半径相对应的离心力列线图。制作了转子速度和半径相对应的离心力列线图。dx 2r dx 2r2 2(p p-m m)V=.V=.2 2 X X dt 9 dt 9 d d2 2(p p-m m)=.=.2 2 X X 18 18r r r r：球形粒子的半径球形粒子的半径球形粒子的半径球形粒子的半径 d d d d：球形粒子的直径：球形粒子的直径：球形粒子的直径：球形粒子的直径：流体介质的粘度数：流体介质的粘度数：流体介质的粘度数：流体介质的粘度数 p p p p：粒子的密度：粒子的密度：粒子的密度：粒子的密度m m m m：介质的密度：介质的密度：介质的密度：介质的密度3.3.沉降速度沉降速度 Sedimentation velocitySedimentation velocity(1)(1)定义：指在强大离心作用下，单位时间内物定义：指在强大离心作用下，单位时间内物质运动的距离。质运动的距离。p p-m m=0 =0 即即p p=m m V=0 S=0 V=0 S=0 粒子平衡粒子平衡p p-m m0 0 即即p pm m V0 S0 V0 S0 粒子达到某一位置后就达到平衡粒子达到某一位置后就达到平衡p p-m m0 0 即即p pm m1 V0 S0 1 V0 Smpm则则S0,S0,该离心法的离心时该离心法的离心时间要严格控制间要严格控制,即有足够的时间使各种粒子在即有足够的时间使各种粒子在介质梯度中形成区带介质梯度中形成区带,又要控制在任一粒子达又要控制在任一粒子达到沉淀前。到沉淀前。此法是一种不完全的沉降此法是一种不完全的沉降,沉降受物质本沉降受物质本身大小的影响较大身大小的影响较大,一般是应用在物质大小相一般是应用在物质大小相异而密度相同的情况。异而密度相同的情况。2.2.注意点：注意点：严格控制离心时间严格控制离心时间pmpm事先配成较平缓的连续密度的梯度溶液事先配成较平缓的连续密度的梯度溶液不能用角式转头、只能用水平式转头不能用角式转头、只能用水平式转头不能用刹车不能用刹车等密度离心法等密度离心法1 1原理原理 当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场下，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿场下，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上（即等梯度移动到它们密度恰好相等的位置上（即等密度点）形成区带，称为等密度区带离心法。密度点）形成区带，称为等密度区带离心法。等密度区带离心的有效分离取决于颗粒的等密度区带离心的有效分离取决于颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效果越好，与浮力密度差，密度差越大，分离效果越好，与颗粒的大小和形状无关，但后两者决定着达到颗粒的大小和形状无关，但后两者决定着达到平衡的速率、时间和区带的宽度。平衡的速率、时间和区带的宽度。等密度区带离心示意图等密度区带离心示意图 特点：特点：（1 1）与样品粒子的密度有关）与样品粒子的密度有关（2 2）与样品粒子的大小和其他参数无关）与样品粒子的大小和其他参数无关 （3 3）转速、温度不变）转速、温度不变,则延长离心时间也则延长离心时间也 不能改变这些粒子的成带位置。不能改变这些粒子的成带位置。2.2.注意点：注意点：离心时间要长离心时间要长可用角式转头或水平式转头可用角式转头或水平式转头粒子密度相近或相等时不宜用粒子密度相近或相等时不宜用密度梯度溶液中要包含所有粒子密度密度梯度溶液中要包含所有粒子密度不能用刹车不能用刹车四四.梯度溶液的制备梯度溶液的制备(一一).).梯度材料的选择原则梯度材料的选择原则:1 1、与被分离的生物材料不发生反应。、与被分离的生物材料不发生反应。2 2、可达到要求的密度范围、可达到要求的密度范围,且在所要求的密且在所要求的密 度范围内度范围内,粘度低粘度低,渗透压低渗透压低,离子强度和离子强度和 pHpH变化较小。变化较小。3 3、不会对离心设备发生腐蚀作用。、不会对离心设备发生腐蚀作用。4 4、容易纯化、容易纯化,价格便宜或容易回收。价格便宜或容易回收。5 5、浓度便于测定、浓度便于测定,如具有折光率。如具有折光率。6 6、对于分析超速离心工作来说、对于分析超速离心工作来说,它的物理性它的物理性 质质,热力学性质应该是已知的。热力学性质应该是已知的。常用的梯度材料：常用的梯度材料：.糖类糖类:蔗糖、甘油、聚蔗糖蔗糖、甘油、聚蔗糖(Ficoll)(Ficoll)、右、右 旋糖酐、糖原旋糖酐、糖原 无机盐类无机盐类:CsCl(:CsCl(氯化铯氯化铯)、RbCl(RbCl(氯化铷氯化铷)、NaClNaCl、KBrKBr等等 有机碘化物有机碘化物:三碘苯甲酰匍萄糖胺等三碘苯甲酰匍萄糖胺等 硅溶胶硅溶胶:如如PercollPercoll。蛋白质蛋白质:如牛血清白蛋白如牛血清白蛋白重水重水 非水溶性有机物非水溶性有机物:如氟代碳等如氟代碳等 (二二).).梯度材料的应用范围梯度材料的应用范围 1.1.蔗糖蔗糖:水溶性大水溶性大 性质稳定性质稳定 渗透压较高渗透压较高 最高密度可达最高密度可达1.33g/ml,1.33g/ml,价格低价格低 容易制备容易制备,常用于细胞器、病毒、常用于细胞器、病毒、RNARNA分离的梯度材料分离的梯度材料 有较大的渗透压有较大的渗透压,不宜用于细胞的分离。不宜用于细胞的分离。2.2.聚蔗糖聚蔗糖:商品名商品名Ficoll,Ficoll,渗透压低渗透压低 粘度却特别高粘度却特别高,为此常与泛影葡胺混合使用为此常与泛影葡胺混合使用 以降低粘度以降低粘度 用于分离各种细胞包括血细胞、成纤维细用于分离各种细胞包括血细胞、成纤维细 胞、肿瘤细胞、鼠肝细胞胞、肿瘤细胞、鼠肝细胞 3.3.氯化铯氯化铯:离子性介质离子性介质 水溶性大水溶性大 最高密度可达最高密度可达1.91g/ml1.91g/ml 重金属盐类重金属盐类,在离心时形成的梯度有较在离心时形成的梯度有较 好的分辨率好的分辨率 被广泛地用于被广泛地用于DNADNA、质粒、病毒和脂蛋、质粒、病毒和脂蛋 白的分离白的分离 价格较贵价格较贵 4.4.卤化盐类卤化盐类:KBrKBr和和NaClNaCl可用于脂蛋白分离可用于脂蛋白分离KIKI和和NaINaI可用于可用于RNARNA分离分离,其分辨率高于铯盐其分辨率高于铯盐 NaClNaCl梯度梯度 可用于分离脂蛋白可用于分离脂蛋白NaINaI梯度可分离天然或变性的梯度可分离天然或变性的DNADNA。5.Percoll:5.Percoll:SiOSiO2 2 2 2胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮渗透压低渗透压低对生物材料的影响小对生物材料的影响小颗粒稳定颗粒稳定在冷却和冻融情况下还是稳定的在冷却和冻融情况下还是稳定的 粘度高粘度高在酸性在酸性pHpH和高离子强度下不稳定和高离子强度下不稳定用于细胞、细胞器和病毒的分离用于细胞、细胞器和病毒的分离 五五.分析性超速离心分析性超速离心 为了研究生物大分子的沉降特性和结构为了研究生物大分子的沉降特性和结构,而不是专门收集某一特定组分。而不是专门收集某一特定组分。它使用了特殊的转子和检测手段它使用了特殊的转子和检测手段,以便以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。分析性超速离心的工作原理分析性超速离心的工作原理椭圆形的转子椭圆形的转子一套真空系统一套真空系统一套光学系统一套光学系统 转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置转子通过一个柔性的轴联接成一个高速的驱动装置,这轴可使转子在旋转时形成自己的轴。这轴可使转子在旋转时形成自己的轴。这轴可使转子在旋转时形成自己的轴。这轴可使转子在旋转时形成自己的轴。转子在一个冷冻转子在一个冷冻的真空腔中旋转，其容纳两个小室：分析室和配衡室。的真空腔中旋转，其容纳两个小室：分析室和配衡室。分析室的容量一般为分析室的容量一般为1ml，呈扇形排列在转子中，其，呈扇形排列在转子中，其工作原理与一个普通水平转子相同。分析室有上下两工作原理与一个普通水平转子相同。分析室有上下两个平面的石英窗，离心机中装有的光学系统可保证在个平面的石英窗，离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质，可以整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质，可以通过对紫外光的吸收（如对蛋白质和通过对紫外光的吸收（如对蛋白质和DNA）或折射率）或折射率的不同对沉降物进行监测。在分析室中物质沉降时重的不同对沉降物进行监测。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜，粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜，结果在检测系统的照相底板上产出一个结果在检测系统的照相底板上产出一个“峰峰”，由于，由于沉降不断进行，界面向前推进，故沉降不断进行，界面向前推进，故“峰峰”也在移动，也在移动，从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就像一个折射的透镜，结果在检测系统的照相底板上产出一个射的透镜，结果在检测系统的照相底板上产出一个“峰峰”，由于沉，由于沉降不断进行，界面向前推进，故降不断进行，界面向前推进，故“峰峰”也在移动，从峰移动的速度也在移动，从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。可以得到物质沉降速度的指标。转子容纳二个小室转子容纳二个小室:分析室分析室配衡室配衡室 ：经过精密加工的金属块：经过精密加工的金属块,作为分析作为分析 室的平衡用。室的平衡用。分析室：分析室：容量为容量为1 1毫升毫升,呈扇形排列在转子中。呈扇形排列在转子中。其有上下二个平面的石英窗其有上下二个平面的石英窗,离心机中装有的离心机中装有的光学系统可保证在整个离心期间都能观察小光学系统可保证在整个离心期间都能观察小室中正在沉降的物质室中正在沉降的物质,通过对紫外光的吸收通过对紫外光的吸收或折射率的不同对沉降物进行监视。或折射率的不同对沉降物进行监视。折射率原理折射率原理:当光线通过一个具有不同密度区的透当光线通过一个具有不同密度区的透明液时明液时,在这些区带的界面上产生光的折在这些区带的界面上产生光的折射。射。在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒在分析室中物质沉降时重粒子和轻粒子之间形成的界面就象一个折射的透镜子之间形成的界面就象一个折射的透镜,结果在检测系统的照相底板上产生一结果在检测系统的照相底板上产生一“峰峰”。由于沉降不断进行。由于沉降不断进行,界面向前推进界面向前推进,故故“峰峰”也在移动也在移动,从峰移动的速度可以得从峰移动的速度可以得到物质沉降速度的指标。到物质沉降速度的指标。(二二).).分析性超速离心的应用分析性超速离心的应用1.1.测定生物大分子的相对分子重量测定生物大分子的相对分子重量 沉降速度沉降速度 沉降平衡沉降平衡 接近沉降平衡接近沉降平衡沉降速度：超速离心在高速中进行沉降速度：超速离心在高速中进行,使得任使得任意分布的粒子通过溶剂从旋转的中心辐射地意分布的粒子通过溶剂从旋转的中心辐射地向外移动向外移动,在清除了粒子的那部分溶剂和尚含在清除了粒子的那部分溶剂和尚含有沉降物的那部分溶剂之间形成一个明显的有沉降物的那部分溶剂之间形成一个明显的界面界面,该界面随时间移动而移动该界面随时间移动而移动,这就是粒子这就是粒子沉降速度的一个指标沉降速度的一个指标,然后用照像记录然后用照像记录,即可即可求出粒子的沉降系数。求出粒子的沉降系数。dx/dt dx/dt S=S=2 2X X RTS RTS M=M=D(1-D(1-)M-M-M-M-该分子不含水的相对分子重量该分子不含水的相对分子重量该分子不含水的相对分子重量该分子不含水的相对分子重量;R-R-R-R-气体常数气体常数气体常数气体常数;T-T-T-T-绝对温度绝对温度绝对温度绝对温度;S-S-S-S-分子的沉降系数分子的沉降系数分子的沉降系数分子的沉降系数;-分子的微分比容分子的微分比容分子的微分比容分子的微分比容(当一克溶质加到一个大体积的溶当一克溶质加到一个大体积的溶当一克溶质加到一个大体积的溶当一克溶质加到一个大体积的溶液中所占有的体积液中所占有的体积液中所占有的体积液中所占有的体积;-溶剂的密度。溶剂的密度。溶剂的密度。溶剂的密度。2.2.生物大分子的纯度估计生物大分子的纯度估计 3.3.分析生物大分子中的构象变化分析生物大分子中的构象变化 六、离心机的应用和维护六、离心机的应用和维护（1）离心方法的选择）离心方法的选择:选择合适的离心转速和离心时间，就能达到较好的分离效果。若样品中存在两种以上质量和密度不同的样品颗粒，可采用差速离心法。对于有密度梯度差异的样品介质，可采用密度梯度离心法。若不同样品颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内，离心时密度不同的物质颗粒因浮力差异或向下沉降，或向上漂浮，一直移到它们各自密度恰好对应的位置（等密度点），形成区带。可采用等密度梯度离心。（2）离心时间以及温度和）离心时间以及温度和pH值的确定值的确定（3）离心机的使用、维护：）离心机的使用、维护：（4）离心机常见故障及排除方法：）离心机常见故障及排除方法：（1）离心方法的选择）离心方法的选择:（2）离心时间以及温度和）离心时间以及温度和pH值的确定值的确定离心时间：离心时间：依据离心方法的不同有所差别。差速离心是指某种颗粒完全沉降到离心管底的时间。等密度梯度离心是指颗粒完全到达等密度点的平衡时间。密度梯度离心所需的离心时间则是指形成界限分明的区带的时间。温度和温度和pH值：值：为了防止欲分离物质的凝集、变性和失活，除了在离心介质的选择方面加以注意外，还必须控制好温度及介质溶液的pH值等离心条件。离心温度一般控制在4度左右，对于某些热稳定性较好的酶等，也可以在室温下进行。（3）离心机的使用、维护：）离心机的使用、维护：（4）离心机常见故障及排除方法：）离心机常见故障及排除方法：（1）离心方法的选择）离心方法的选择:（2）离心时间以及温度和）离心时间以及温度和pH值的确定值的确定（3）离心机的使用、维护：）离心机的使用、维护：各类离心机因其转速高，产生的离心力大，使用不当或缺乏定期的检修和保养，都可能发生严重事故，因此使用离心机时都必须严格遵守操作规程。（4）离心机常见故障及排除方法：）离心机常见故障及排除方法：离心机的应用和维护离心机的应用和维护（1）离心方法的选择）离心方法的选择:（2）离心时间以及温度和）离心时间以及温度和pH值的确定值的确定（3）离心机的使用、维护：）离心机的使用、维护：（4）离心机常见故障及排除方法：）离心机常见故障及排除方法：电机不转转头的损坏机体震动剧烈、响声异常。有许多故障为不正确操作所致，正确操作可减少或消除故障。在工作过程中，如出现任何异常现象均应立即停机，检查原因，不得强行运转，以免产生不必要的损失。关于制作关于制作“棉花棉花”糖的原理：糖的原理：它的内筒与洗衣机它的内筒与洗衣机的脱水筒相似，里面加的脱水筒相似，里面加入白砂糖，加热使糖熔入白砂糖，加热使糖熔化成糖汁。内筒高速旋化成糖汁。内筒高速旋转，黏稠的糖汁就做离转，黏稠的糖汁就做离心运动，从内筒壁的小心运动，从内筒壁的小孔飞散出去，成为丝状，孔飞散出去，成为丝状，到达温度较低的外筒时，到达温度较低的外筒时，迅速冷却凝固，变得纤迅速冷却凝固，变得纤细雪白，像一团团棉花。细雪白，像一团团棉花。在水平公路上行驶的汽车转弯F mr2F汽车三、离心运动的防止：1、在水平公路上行驶的汽车转弯时F mr2F汽车 在水平公路上行驶的汽车，转弯时所需的向心力是由车轮与路面的静摩擦力提供的。如果转弯时速度过大，所需向心力F大于最大静摩擦力Fmax，汽车将做离心运动而造成交通事故。因此，在公路弯道处，车辆行驶不允许超过规定的速度。阅读离心机使用说明书，转头说明书 说明书应该放置在离心机旁边，使用前必须仔细阅读说明书 防止事故发生离心机事故离心机高速运转，使用不当或者维护不当，会出严重事故主要是转头事故，转头爆炸离心机的安全使用说明书与相关资料机器、转头、离心管正确使用方法专人管理，维护保养，排出故障离心基本概念转速离心力和相对离心力容量K因子转速的描述RPM RPM 转转/分分角速度角速度每秒转过的弧度数每秒转过的弧度数 1 1 弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角弧度即为弧长等于半径的圆弧所对的圆心角 “转速转速”的含义的含义 离心机的最高转速转头的最高转速转头的最高允许转速转头的允许转速离心机的最高转速可以用于该离心机的转头中，转速最高的这个转速，是离心机最高转速离心机最高转速 转头的最高转速转头盖上标明的转速 应注意，同一转头在不同离心机中使用，不一定都能达到转头的最高转速使用转头的最高允许转速样品密度不超过样品密度不超过样品密度不超过样品密度不超过1.21.2克克克克/ml/ml的情况下，和以下因素的情况下，和以下因素的情况下，和以下因素的情况下，和以下因素有关：有关：有关：有关：离心机型号离心机型号离心机型号离心机型号 离心管形状、材料、厚度离心管形状、材料、厚度离心管形状、材料、厚度离心管形状、材料、厚度 （注意，同样的离心管在不注意，同样的离心管在不注意，同样的离心管在不注意，同样的离心管在不同转头中使用，最高允许转速也可能不同同转头中使用，最高允许转速也可能不同同转头中使用，最高允许转速也可能不同同转头中使用，最高允许转速也可能不同）离心管帽的材质离心管帽的材质离心管帽的材质离心管帽的材质 离心管是否装满离心管是否装满离心管是否装满离心管是否装满 是否用适配器是否用适配器是否用适配器是否用适配器 必须根据实际使用情况，从转头手册和转头说明书中查询转头的允许转速样品密度超过了样品密度超过了1.2克克/ml的情况下：的情况下：转头的允许转速=转头的最高允许转速（1.2/样品的平均密度）1/2注意：不适用于密度梯度离心离心力和相对离心力“离心力是多少个g”的提法不对 离心力=粒子质量离心加速度 （F离心力离心力=mr 2）相对离心力RCF=F离心力离心力/F重力重力=r 2/gRCF与RPM换算=2 RPM/60=0.10472 RPM=2 RPM/60=0.10472 RPM RCF=r 2/g=（0.10472 RPM0.10472 RPM）2r/g r以毫米为单位时，RCF=1.12r（RPM/1000）2 RPM=1000（RCF/1.12r）1/2例：文献给出条件为80000g，RPM=1000（80000/1.12r）1/2转头的K系数什麽是转头的什麽是转头的K K系数系数 K K K K系数系数系数系数是转头的一个特性指标，它的大小是转头的一个特性指标，它的大小是转头的一个特性指标，它的大小是转头的一个特性指标，它的大小可以衡量转头离心效率的高低可以衡量转头离心效率的高低可以衡量转头离心效率的高低可以衡量转头离心效率的高低.转头的K值可以查表得到 K 系数的计算 R max:转头的最大半径.R min 转头的最小半径.RPM:转头的转速 在离心时，估算沉降时间 t ：离心时间（小时）。K：实际转速下的转头K值。S：粒子的沉降系数。K系数的应用 从一个转头换成另一个转头时估算沉降时间.(即根据文献资料,使用现有的转头,建立实验条件)利用已知转头的实验条件,使用另一个转头,分离相同样品时,如何确定实验条件。K值的应用K值的应用同一转头同一转头，改变离心转速时，计算离心时，改变离心转速时，计算离心时间：间：K值的应用K值越小，转头的效率越高，选择合适的转头在离心管允许不加满的情况下，可以通过减少各个管内样品，降低k值，缩短离心时间离心机的维护保养转头的某些部位是铝合金，保养不当会腐蚀，引起离心不平衡，发生事故离心事故离心机转头损坏的原因离心机转头损坏的原因（操作或使用不当所造成的）（操作或使用不当所造成的）过速过速 腐蚀腐蚀 金属疲劳金属疲劳 不平衡不平衡离心机和转头保养注意事项清洁离心机腔体和转头，并擦干腔内冷清洁离心机腔体和转头，并擦干腔内冷凝水凝水使用完后要打开门，直至腔内恢复常温使用完后要打开门，直至腔内恢复常温离心之前要平衡样品离心之前要平衡样品根据需要选用根据需要选用tubes/bottles、adapters 以以及及spacers，根据要求加样品量，根据要求加样品量必要时预冷转子必要时预冷转子转头的维护和存放LubricateO-ringsandrotorassemblyregularlyReplaceoverspeeddiskwhendamagedRemoverotorlid/tubeplugsandinverttherotorduringstorage正确的安装转头LocktherotoronthespindleanddepressthebuttonduringinstallaitonCheckthebucketsarehookedproperlyontotherotor使用前一定要先阅读手册RefertorotormanualsforoperationUselogbookstorecordhistoryofrotoruse各种材料的离心管及其特性J-30IJ-30I高高速速冷冷冻冻离离心心机机用用 途途1.1.细菌，蛋白沉淀细菌，蛋白沉淀 -核酸提取核酸提取 -细细胞胞/亚细胞组份分离。亚细胞组份分离。2.2.动、植物病毒分离、血液血清提取动、植物病毒分离、血液血清提取及溶液中大、小颗粒不同组份的分及溶液中大、小颗粒不同组份的分离。离。、操作步骤操作步骤1打打开开离离心心机机盖盖,选选择择容容量量适适合合的的转转子子，将将带带样样品品离离心心管管放放入入转转子子内内（样样品品一一定定要要平平衡衡好好），再再将将转转子子放放入入离离心心室室内固定好转子。内固定好转子。2关好离心机盖，设定离心机转子型号、转速、离心时间、关好离心机盖，设定离心机转子型号、转速、离心时间、温度、启动运转。温度、启动运转。3离心时间到待转速降至零，打开离心机盖将样品（离心管）离心时间到待转速降至零，打开离心机盖将样品（离心管）取出，离心结束。取出，离心结束。離心機操作說明使用離心管取水取水到40的刻度將離心管等份量放置入離心機中以4000rpm的轉速離心5分鐘檢查離心管中濃縮的程度濃縮後的水樣使用滴定管吸取水樣到載玻片蓋上蓋玻片將水體樣本放置到顯微鏡上