仪器与药物分析考试大纲复习必备.pptx

第二章第二章 气相色谱法气相色谱法一、气相色谱仪的组成及作用一、气相色谱仪的组成及作用二、基本术语二、基本术语三、色谱法的分类（按流动相和固定相分）三、色谱法的分类（按流动相和固定相分）四、色谱分析理论基础四、色谱分析理论基础 1.色谱分析的基本原理（色谱分析的基本原理（P8-11）2.色谱分离的基本理论（色谱分离的基本理论（11-16）1.色谱分析的基本原理（色谱分析的基本原理（P8-11）v分配原理分配原理v吸附原理吸附原理v出峰顺序与分配系数、分配比的关系出峰顺序与分配系数、分配比的关系2.色谱分离的基本理论（色谱分离的基本理论（11-16）v塔板理论塔板理论v速率理论：速率理论：H=A+B/U+CUv分离度分离度R：分离完全：分离完全R=1.5五、固定液的选择：相似相容原则五、固定液的选择：相似相容原则(P32-33)六、检测器六、检测器v检测器的分类检测器的分类v检测器的工作原理（热导池、氢火焰）检测器的工作原理（热导池、氢火焰）v检测器的应用检测器的应用七、色谱定量分析方法七、色谱定量分析方法v校正因子：绝对校正因子、相对校正因子校正因子：绝对校正因子、相对校正因子v归一化法归一化法v内标法：标准曲线法、比较法内标法：标准曲线法、比较法v外标法外标法八、复习时结合习题和实验八、复习时结合习题和实验第三章第三章 高效液相色谱法高效液相色谱法v高压高压高速高速高效高效高灵敏度高灵敏度v高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。（气相色谱法难以进行分析）析方法。（气相色谱法难以进行分析）一、一、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱仪主要部件二、高效液相色谱仪主要部件v高压输液泵高压输液泵v梯度淋洗装置梯度淋洗装置v进样装置进样装置v高效分离柱高效分离柱v检测器检测器紫外检测器紫外检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器示差折光检测器示差折光检测器荧光检测器荧光检测器三、基本原理与主要分离类型三、基本原理与主要分离类型1.液液-液分配色谱液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理：基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；组分在固定相和流动相上的分配；流流动动相相：对对于于亲亲水水性性固固定定液液，采采用用疏疏水水性性流流动动相相，即即流流动动相相的的极极性性小小于于固固定定液液的的极极性性（正正相相色色谱谱），反反之之，流流动动相相的的极极性性大大于于固固定定液液的的极极性性（反反相相色谱）。正相与反相的出峰顺序相反。色谱）。正相与反相的出峰顺序相反。2.液液-固吸附色谱固吸附色谱基基本本原原理理：组组分分在在固固定定相相吸吸附附剂剂上上的的吸吸附附与与解解吸。吸。适适用用于于分分离离相相对对分分子子质质量量中中等等的的油油溶溶性性试试样样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；3.离子交换色谱离子交换色谱基基本本原原理理：组组分分在在固固定定相相上上发发生生的的反反复复离离子交换反应。子交换反应。应应用用：离离子子及及可可离离解解的的化化合合物物，氨氨基基酸酸、核核酸等。酸等。4.离子对色谱离子对色谱原原理理：将将一一种种（或或多多种种）与与溶溶质质离离子子电电荷荷相相反反的的离离子子（对对离离子子或或反反离离子子）加加到到流流动动相相中中使使其其与与溶溶质质离离子子结结合合形形成成疏疏水水性性离离子子对对化化合合物物，使使其其能能够够在在两相之间进行分配。两相之间进行分配。固定相：凝胶固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分布)；原原理理：按按分分子子大大小小分分离离。小小分分子子可可以以扩扩散散到到凝凝胶胶空空隙隙，由由其其中中通通过过，出出峰峰最最慢慢；中中等等分分子子只只能能通通过过部部分分凝凝胶胶空空隙隙，中中速速通通过过；而而大大分分子子被被排排斥斥在在外外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。可可对对相相对对分分子子质质量量在在100-105范范围围内内的的化化合合物物按按质量分离质量分离5.尺寸排斥色谱尺寸排斥色谱6.亲和色谱亲和色谱原原理理：利利用用生生物物大大分分子子和和固固定定相相表表面面存存在在的的某某种特异性亲和力，进行选择性分离。种特异性亲和力，进行选择性分离。四、四、流动相选择流动相选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：常用溶剂的极性顺序：水水(最大最大)甲酰胺甲酰胺乙腈乙腈甲醇甲醇乙醇乙醇丙醇丙醇丙酮丙酮二氧六环二氧六环四氢呋喃四氢呋喃甲乙酮甲乙酮正丁醇正丁醇乙酸乙酯乙酸乙酯乙醚乙醚异丙醚异丙醚二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)五、分离类型选择五、分离类型选择第四章第四章电位分析法电位分析法一、一、什么是电分析化学法什么是电分析化学法 电分析化学法电分析化学法利用物质的电学及电化学利用物质的电学及电化学性质来进行分析的方法。性质来进行分析的方法。二、电分析化学法分类：二、电分析化学法分类：v 第一类：通过试液的浓度在某一特定实验条第一类：通过试液的浓度在某一特定实验条 件下与化学电池中某些物理量的关系来进行分析。件下与化学电池中某些物理量的关系来进行分析。电位分析法（物理量：电极电位）电位分析法（物理量：电极电位）电导分析法（物理量：电阻）电导分析法（物理量：电阻）库仑分析法（物理量：电量）库仑分析法（物理量：电量）伏安分析法（物理量：电流伏安分析法（物理量：电流电压曲线）电压曲线）v第二类（电容量分析法）：以上述电物理量的第二类（电容量分析法）：以上述电物理量的突变作为滴定分析中终点的指示。突变作为滴定分析中终点的指示。电位滴定电位滴定电流滴定电流滴定电导滴定电导滴定v第三类（电重量法、电解分析法）：将试液第三类（电重量法、电解分析法）：将试液中某一个待测组分通过电极反应转化为固定相中某一个待测组分通过电极反应转化为固定相（金属或起氧化物），然后有工作电极上析出的（金属或起氧化物），然后有工作电极上析出的金属或其氧化物的质量来确定该组分的量。金属或其氧化物的质量来确定该组分的量。电分析化学法的电分析化学法的优点优点仪器设备简单；仪器设备简单；分析速度快；分析速度快；灵敏度高；灵敏度高；选择性好选择性好;应用范围广泛应用范围广泛v电化学基础理论电化学基础理论的研究的研究v有机化学有机化学的研究的研究v药物化学药物化学的研究的研究v生物化学生物化学的研究的研究v临床化学临床化学的研究的研究v环境生态环境生态的研究的研究应用范围广泛：应用范围广泛：三、电位分析法原理三、电位分析法原理v 电位分析法：用一指示电位分析法：用一指示 电极和一参比电极与试液组电极和一参比电极与试液组 成化学电池，在成化学电池，在零电流零电流条件条件 下测定电池的电动势，依此下测定电池的电动势，依此 进行分析的方法。进行分析的方法。v 包括：包括：直接电位法和直接电位法和 电位滴定法电位滴定法v 什么是什么是直接电位法？直接电位法？根据电极电位与待测组分根据电极电位与待测组分 活度之间的关系，利用测得的电位差值（或电极电活度之间的关系，利用测得的电位差值（或电极电 位值）直接求得待测组分的活度（或浓度）的方法。位值）直接求得待测组分的活度（或浓度）的方法。v 什么是电位滴定法？什么是电位滴定法？根据滴定过程中电位差根据滴定过程中电位差 （或电极电位）的变化来确定滴定终点的容量分（或电极电位）的变化来确定滴定终点的容量分 析法。析法。电位分析法的理论基础是什么电位分析法的理论基础是什么？能斯特方程（电极电位与溶液中待测离子间的能斯特方程（电极电位与溶液中待测离子间的定量关系）。定量关系）。对于氧化还原体系：对于氧化还原体系：Ox+ne-=Red四、膜电位及其选择性四、膜电位及其选择性(p114)2.考虑到共存离子产生的电位，则膜电位的一般考虑到共存离子产生的电位，则膜电位的一般式可写成为：式可写成为：1.(1)对阳离子响应的电极，对阳离子响应的电极，K 后取正号；对负离子响应后取正号；对负离子响应的电极，的电极，K 后取负号。后取负号。(2)Ki,j 称之为电极的选择性系数，称之为电极的选择性系数，其意义为：在相同的测定条件下，待测离子和干扰离子其意义为：在相同的测定条件下，待测离子和干扰离子产生相同电位时待测离子的活度产生相同电位时待测离子的活度ai与干扰离子活度与干扰离子活度aj的比值的比值:3.4.线性范围、检测下限、级差（斜率）线性范围、检测下限、级差（斜率）五、五、电位分析法的应用电位分析法的应用1.直接电位法直接电位法（1）（2）离子活度）离子活度(或浓度或浓度)的测定原理与方法（的测定原理与方法（P127）将离子选择性电极（指示电极）和参比电极插入试液可以将离子选择性电极（指示电极）和参比电极插入试液可以组成测定各种离子活度的电池，电池电动势为：组成测定各种离子活度的电池，电池电动势为：离子选择性电极作正极时，离子选择性电极作正极时，比较法比较法对阳离子响应的电极，取正号；对阳离子响应的电极，取正号；对阴离子响应的电极，取负号。对阴离子响应的电极，取负号。离子选择性电极作负极时，离子选择性电极作负极时，对阳离子响应的电极，取负号；对阳离子响应的电极，取负号；对阴离子响应的电极，取正号。对阴离子响应的电极，取正号。标准曲线法标准曲线法用测定离子的纯物质配制一系列不同用测定离子的纯物质配制一系列不同浓度的标准溶液，并用总离子强度调节缓浓度的标准溶液，并用总离子强度调节缓冲溶液（冲溶液（TotleIonicStrengthAdjustmentBuffer简称简称TISAB）保持溶液的离子强度相）保持溶液的离子强度相对稳定，分别测定各溶液的电位值，并绘对稳定，分别测定各溶液的电位值，并绘制制:E-lgci关系曲线。关系曲线。注意：注意：离子活度系数保持不变时，膜电位才与离子活度系数保持不变时，膜电位才与logci呈线呈线性关系。性关系。Elgci总离子强度调节缓冲溶液总离子强度调节缓冲溶液（Totle Ionic Strength Adjustment Buffer简称TISAB）TISAB的作用的作用：保持较大且相对稳定的离子强度，使活度系数恒定；保持较大且相对稳定的离子强度，使活度系数恒定；维持溶液在适宜的维持溶液在适宜的pH范围内，满足离子电极的要求；范围内，满足离子电极的要求；掩蔽干扰离子。掩蔽干扰离子。测测F-过过程程所所使使用用的的TISAB典典型型组组成成：1mol/L的的NaCl，使使溶溶液液保保持持较较大大稳稳定定的的离离子子强强度度；0.25mol/L的的HAc和和0.75mol/L的的NaAc,使使溶溶液液pH在在5左左右右；0.001mol/L的的柠柠檬檬酸钠酸钠,掩蔽掩蔽Fe3+、Al3+等干扰离子。等干扰离子。标准加入法标准加入法(p129)E-V曲线法：曲线法：图（图（a）简单，准确性稍差。简单，准确性稍差。E/V-V曲线法：曲线法：图（图（b）一阶微商由电位改变量与滴定一阶微商由电位改变量与滴定剂体积增量之比计算之。剂体积增量之比计算之。曲线上存在着极值点，该点对曲线上存在着极值点，该点对应着应着E-V 曲线中的拐点。曲线中的拐点。2E/V 2-V曲线法：曲线法：图（图（c）2E/V 2二阶微商。二阶微商。计算：计算：2.电位滴定分析法电位滴定分析法v离子选择性电极离子选择性电极 pH玻璃电极、玻璃电极、F-电极的构造、组成及电极的构造、组成及使用注意事项。使用注意事项。第八章第八章原子吸收光原子吸收光谱法法1.电子跃迁电子跃迁v 原子吸收是指呈气态的自由原子对由同类原子辐原子吸收是指呈气态的自由原子对由同类原子辐 射出特征谱线所具有的吸收现象。射出特征谱线所具有的吸收现象。v 原子发射和原子吸收都与原子的外层电子在不同原子发射和原子吸收都与原子的外层电子在不同 能级之间的跃迁有关。当电子从低能级跃迁到高能级能级之间的跃迁有关。当电子从低能级跃迁到高能级 时，必须吸收相当于两个能级差的能量；而从高能级时，必须吸收相当于两个能级差的能量；而从高能级跃迁到低能级时，则要释放出相对应的能量。跃迁到低能级时，则要释放出相对应的能量。一、一、原子吸收光谱的产生原子吸收光谱的产生低低高高hv2.共振吸收线和共振发射线共振吸收线和共振发射线v当电子从基态跃迁到第一激发态时，所吸收能量当电子从基态跃迁到第一激发态时，所吸收能量对应的光谱线叫做共振吸收线；对应的光谱线叫做共振吸收线；v而由第一激发态跃迁回到基态时，所所释放能量而由第一激发态跃迁回到基态时，所所释放能量对应的光谱线叫做共振发射线。对应的光谱线叫做共振发射线。v共振吸收线和共振发射线也称做共振线。共振吸收线和共振发射线也称做共振线。3.元素的特征谱线元素的特征谱线（1）各种元素的原子结构和外层电子排布不同）各种元素的原子结构和外层电子排布不同基态基态第一激发态第一激发态:跃迁吸收能量不同跃迁吸收能量不同具有特征性。具有特征性。（2）各种元素的基态）各种元素的基态第一激发态第一激发态最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线。最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线。（3）利利用用原原子子蒸蒸气气对对特特征征谱谱线线的的吸吸收收可可以以进进行行定定量分析量分析二、原子吸收光谱分析基本原理二、原子吸收光谱分析基本原理1.原子吸收线的形状和展宽的原因原子吸收线的形状和展宽的原因2.锐线光源需满足的条件锐线光源需满足的条件v发射（光源）线与吸收线的发射（光源）线与吸收线的v一致一致v发射线的发射线的 v1/2吸收线的吸收线的 v1/23.定量基础定量基础 A=lg(I0/I)=K c三、三、原子吸收光谱仪原子吸收光谱仪1.原子吸收光谱仪的组成原子吸收光谱仪的组成光源光源原子化系统原子化系统分光系统分光系统检测系统检测系统2.特点特点(1)采用锐线光源采用锐线光源(2)单色器在火焰与单色器在火焰与检测器之间检测器之间(3)原子化系统原子化系统四、干扰和抑制四、干扰和抑制v 光谱干扰及抑制光谱干扰及抑制v物理干扰及抑制物理干扰及抑制v化学干扰及抑制（结合实验）化学干扰及抑制（结合实验）v背景干扰及抑制背景干扰及抑制五、五、定量分析方法定量分析方法1.标准曲线法标准曲线法2.标准加入法标准加入法取取若若干干份份体体积积相相同同的的试试液液（cX），依依次次按按比比例例加加入入不不同同量量的的待测物的标准溶液（待测物的标准溶液（cO），定容后浓度依次为：），定容后浓度依次为：cX，cX+cO，cX+2cO，cX+3cO，cX+4cO分别测得吸光度为：分别测得吸光度为：AX，A1，A2，A3，A4。以以A对浓度对浓度c做图得一直线，图中做图得一直线，图中cX点即待测溶液浓度。点即待测溶液浓度。比较法和作图法比较法和作图法第九章第九章紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法一、紫外可见吸收光谱的产生一、紫外可见吸收光谱的产生1.紫外可见吸收光谱紫外可见吸收光谱是分子光谱是分子光谱紫外吸收光谱：分子价电子能级跃迁。紫外吸收光谱：分子价电子能级跃迁。波长范围：波长范围：100-800nm.(1)远紫外光区远紫外光区:100-200nm(2)近紫外光区近紫外光区:200-400nm(3)可见光区可见光区:400-800nm 可用于结构鉴定和定量分析。可用于结构鉴定和定量分析。电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁;带状光谱。带状光谱。2.物质分子内部有哪三种运动形式：物质分子内部有哪三种运动形式：（1）电子相对于原子核的运动）电子相对于原子核的运动（2）原子核在其平衡位置附近的相对振动）原子核在其平衡位置附近的相对振动（3）分子本身绕其重心的转动）分子本身绕其重心的转动分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级分子具有三种不同能级：电子能级、振动能级和转动能级三种能级各自具有相应的能量三种能级各自具有相应的能量分子的内能：电子能量分子的内能：电子能量Ee、振动能量、振动能量Ev、转动能量、转动能量Er即即EEe+Ev+Erevr能级跃迁能级跃迁 紫外紫外-可见光谱属于电子可见光谱属于电子跃迁光谱。跃迁光谱。电子能级间跃迁的同时电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动能级间总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包的跃迁。即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间含有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。宽谱带。二、二、有机物吸收光谱与电子跃迁有机物吸收光谱与电子跃迁1紫外紫外可见吸收光谱由哪些电子跃迁？可见吸收光谱由哪些电子跃迁？有机化合物的紫外有机化合物的紫外可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：可见吸收光谱是三种电子跃迁的结果：电子、电子、电子、电子、n电子电子。分子轨道理论：成键轨道分子轨道理论：成键轨道反键轨道。反键轨道。当外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态当外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态(反反键轨道键轨道)跃迁。主要有四种跃迁所需能量跃迁。主要有四种跃迁所需能量大小顺序为：大小顺序为：nn200nm的的光光)，但当它们与生色团相连时，就会发生，但当它们与生色团相连时，就会发生n共轭作用，增共轭作用，增强生色团的生色能力强生色团的生色能力(吸收波长向长波方向移动，且吸收强度吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加增加)，这样的基团称为助色团。，这样的基团称为助色团。4.什么是红移与蓝移？什么是红移与蓝移？有机化合物的吸收谱带有机化合物的吸收谱带常常因引入取代基或改变溶常常因引入取代基或改变溶剂使最大吸收波长剂使最大吸收波长maxmax和吸和吸收强度发生变化收强度发生变化:maxmax向长波方向移动称向长波方向移动称为为红移红移，向短波方向移动称，向短波方向移动称为蓝移为蓝移 (或紫移或紫移)。吸收强度。吸收强度即摩尔吸光系数即摩尔吸光系数增大或减增大或减小的现象分别称为小的现象分别称为增色效应增色效应或或减色效应减色效应，如图所示。，如图所示。5.跃迁跃迁所需能量最大；所需能量最大；电子只有吸收远紫外光的能量才能发生跃电子只有吸收远紫外光的能量才能发生跃迁；迁；饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区；饱和烷烃的分子吸收光谱出现在远紫外区；吸收波长吸收波长200nm；例：甲烷的例：甲烷的max为为125nm,乙烷乙烷max为为135nm。只能被真空紫外分光光度计检测到；只能被真空紫外分光光度计检测到；作为溶剂使用；作为溶剂使用；s sp p*s s*RKE,Bnp p E6.n跃迁跃迁所需能量较大。所需能量较大。吸收波长为吸收波长为150250nm，大部分在远紫外区，近，大部分在远紫外区，近紫外区仍不易观察到。紫外区仍不易观察到。含非键电子的饱和烃衍生物含非键电子的饱和烃衍生物(含含N、O、S和卤素等和卤素等杂原子杂原子)均呈现均呈现n*跃迁。跃迁。7.跃迁跃迁所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫所需能量较小，吸收波长处于远紫外区的近紫外端或近紫外区，外端或近紫外区，max一般在一般在104Lmol1cm1以以上，属于强吸收。上，属于强吸收。（1）不饱和烃*跃迁K带带共轭非封闭体系的共轭非封闭体系的 *跃迁跃迁（2）芳香烃及其杂环化合物）芳香烃及其杂环化合物 苯：苯：E1带带180 184nm；=47000E2带带200 204nm=7000苯环上三个共扼双键的苯环上三个共扼双键的 *跃迁特征吸收带；跃迁特征吸收带；B带带230-270nm=200 *与与苯环振动引起；苯环振动引起；含取代基时，含取代基时，B带简化，带简化，红移。红移。max（nm）max苯苯254200甲苯甲苯261300间二甲苯间二甲苯2633001，3，5-三甲苯三甲苯266305六甲苯六甲苯272300三、三、基本组成基本组成光源光源单色器单色器样品室样品室检测器检测器显示显示1.光源光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围光源，其辐射波长范围在在3202500nm。紫外区：氢、氘灯。紫外区：氢、氘灯。发射发射185400nm的连的连续光谱。续光谱。2.单色器单色器将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。波长单色光的光学系统。入射狭缝：光源的光由此进入单色器；入射狭缝：光源的光由此进入单色器；准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；焦至出射狭缝；出射狭缝。出射狭缝。3.样品室样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。英池，可见区一般用玻璃池。4.检测器检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，如：光电池、光电管、如：光电池、光电管、光电二极管或光电倍增管光电二极管或光电倍增管(目前常用目前常用)。5.结果显示记录系统结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理器自动控制和结果处理四、分光光度计的类型四、分光光度计的类型1.单光束单光束简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。的稳定性。2.双光束双光束自动记录，快速全波段自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较分析。仪器复杂，价格较高。高。3.双波长双波长 将不同波长的两束单色光将不同波长的两束单色光(1 1、2 2)快速交替通过同快速交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。=1 12nm2nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。两波长同时扫描即可获得导数光谱。五、五、测定条件的选择测定条件的选择1.选择适当的入射波长选择适当的入射波长一般应该选择一般应该选择max为入射光波长。为入射光波长。如果如果max处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。低但能避免干扰的入射光波长。2.选择合适的参比溶液选择合适的参比溶液 为什么需要使用参比溶液？为什么需要使用参比溶液？测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。参比溶液的选择一般遵循以下原则：参比溶液的选择一般遵循以下原则：若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其它所加试剂均无吸收，用其它所加试剂均无吸收，用纯溶剂（水纯溶剂（水)作参比溶液作参比溶液；若显色剂或其它所加试剂在测定波长处略有吸收，而试若显色剂或其它所加试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，用液本身无吸收，用“试剂空白试剂空白”(不加试样溶液不加试样溶液)作参比溶液；作参比溶液；若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用收，则可用“试样空白试样空白”(不加显色剂不加显色剂)作参比溶液；作参比溶液；若显色剂、试液中其它组分在测量波长处有吸若显色剂、试液中其它组分在测量波长处有吸收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。后再加显色剂，作为参比溶液。3.控制适宜的吸光度（读数范围）控制适宜的吸光度（读数范围）用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在用仪器测定时应尽量使溶液透光度值在T%=2065%，吸光度，吸光度A=0.700.20。Tmin36.8%,Amin0.434六、定性方法六、定性方法 max：化合物特性参数，可作为定性依据。：化合物特性参数，可作为定性依据。有机化合物紫外吸收光谱：反映结构中生色团有机化合物紫外吸收光谱：反映结构中生色团和助色团的特性，不完全反映分子特性；和助色团的特性，不完全反映分子特性；复习有关习题；有关的实验。复习有关习题；有关的实验。七、普通分光光度法七、普通分光光度法1.单组分的测定单组分的测定（1）通常采用通常采用A-C标准曲线法标准曲线法定量测定。定量测定。AAXccX（2）比较法比较法A标标=c标标bA试试=c试试b由于标准溶液与试样为同一物由于标准溶液与试样为同一物质，同时测定条件一致，则质，同时测定条件一致，则c试试=A试试A标标c标标2.多组分的同时测定多组分的同时测定若各组分的吸收曲线互不重叠，若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没行测定。这本质上与单组分测定没有区别。有区别。若各组分的吸收曲线互有重叠，若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。方程组得出各组分的含量。A1=a1bcab1bcb A2=a2bcab2bcbv应用化学专业还应复习：应用化学专业还应复习：1.第六章第六章 库仑分析法：实验库仑分析法：实验2.第十章第十章 红外吸收光谱分析：习题红外吸收光谱分析：习题3.结合实验复习荧光分析法结合实验复习荧光分析法4.结合所做的实验进行复习结合所做的实验进行复习生物工程专业还应复习：生物工程专业还应复习：v1.复习红外习题复习红外习题v2.第四章第四章 样品分析方法的思考题样品分析方法的思考题v3.第五章第五章 化学药物分析的思考题化学药物分析的思考题v4.结合所做的实验进行复习结合所做的实验进行复习